Aptamer Karakterisaasje Analyse Tsjinst

Alpha Lifetech leveret al jierren tsjinsten oangeande aptameren en kin op it stuit wiidweidige aptamerenûntwikkelingsskema's oanbiede, lykas aptamerensynteze, SELEX-screening, hege-trochput-sekwinsjearring, en aptamerenoptimalisaasje en karakterisaasje. Op basis fan 'e foardielen fan' e SELEX-metoade foar it screenen fan aptameren hat Alpha Lifetech mear metoaden foar it screenen fan aptameren útwreide.

Ynlieding ta Aptamer-karakterisaasje-analyze

Affiniteitsferifikaasje

De optimalisearre aptameer-affiniteit waard ferifiearre troch relevante techniken fan 'e aptameer-bindingstest. Foarbylden binne Isothermal Titration Calorimetry (ITC), Flow Cytometry (FCM), en Surface Plasmon Resonance (SPR), Microfluidics, ensfh. Aptameer-affiniteit wurdt meastentiids útdrukt troch de dissosiaasjekonstante (KD), in fysike kwantiteit dy't brûkt wurdt om de mjitte fan molekulêre dissosiaasje yn in omkearbere reaksje te kwantifisearjen. Hoe lytser de KD-wearde, hoe stabiler it kompleks, dat is, hoe sterker de affiniteit; omkeard, hoe grutter de KD-wearde, hoe ynstabiler it kompleks en hoe swakker de affiniteit. Dizze stap is de kaai foar it identifisearjen fan 'e prestaasjes fan' e aptameer, wêrtroch't de aptameer-affiniteitsryping wurdt garandearre en kin yn praktyske tapassingen mei hege affiniteit en selektiviteit oan it doelmolekule bine.

Fig. 1 Proses fan aptamer-affiniteitsryping. Referinsjeboarne:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Funksjeferifikaasje

Neist affiniteitsferifikaasje moat de funksje fan 'e aptamer ferifiearre wurde. Dit omfettet it ferifiearjen fan 'e stabiliteit, spesifisiteit en ynteraksjes fan 'e aptamer mei oare molekulen yn in bepaalde omjouwing. De resultaten fan funksjonele ferifikaasje sille direkt ynfloed hawwe op 'e wearde fan aptameren yn wittenskiplik ûndersyk en yndustriële tapassingen.

Spesifike ferifikaasje

Kompetitive eksperimint: It fermogen fan 'e aptamer om te binen oan in spesifyk doelwyt wurdt evaluearre yn 'e oanwêzigens fan oare ferlykbere doelwyt. As de aptamer spesifyk oan it doelmolekule kin binen sûnder ynterferinsje fan oare molekulen, jout dat oan dat it in hege spesifisiteit hat.

Krúsreaksje-eksperimint: De aptameer wurdt bûn oan in searje relatearre of net-relatearre doelen om te sjen oft it allinich oan in spesifyk doelwyt bindt, om syn spesifisiteit te ferifiearjen.

Stabiliteitsferifikaasje

Eksperimint mei nuklease-ôfbraak: De aptameren waarden bleatsteld oan ferskillende konsintraasjes fan nukleasen en harren ôfbraak waard waarnommen. Troch de mjitte fan ôfbraak op ferskillende tiidpunten te fergelykjen, kin it anty-nuklease-ôfbraakfermogen fan 'e aptamer wurde evaluearre.

Temperatuer- en tiidstabiliteitseksperimint: De aptamer waard ûnder ferskate temperatuer- en tiidsomstannichheden pleatst om syn strukturele en funksjonele stabiliteit te observearjen. Dit helpt by it bepalen fan optimale opslach- en gebrûksomstannichheden foar aptameren.

Identifikaasje fan biologyske aktiviteit

De passende metoade wurdt meastentiids selektearre neffens it spesifike tapassingsdoel fan 'e nukleïnezuur-aptameer.

(1) Molekulêre nivo testen: Mei help fan molekulêre biologytechniken, lykas gelelektroforese, Western blot, ensfh., om de kompleksen te detektearjen dy't foarme binne nei't de aptameer kombinearret mei it doelmolekule, of om de feroaringen yn it ekspresjenivo fan it doelmolekule te detektearjen dy't feroarsake wurde troch de aptameer.

(2) Testen op selnivo: Troch gebrûk te meitsjen fan selkultuertechnology wurde aptameren ynkubearre mei doelzellen om biologyske feroarings lykas selmorfology, proliferaasje en apoptose te observearjen, en de biologyske aktiviteit fan aptameren te evaluearjen.

(3) Diermodeltests: Yn passende diermodellen wurde nukleïnezuuraptameren jûn troch ynjeksje of medisyntoediening, en fysiologyske yndikatoaren en patologyske feroarings fan bisten wurde waarnommen om de biologyske aktiviteit en feiligens fan 'e aptameren yn vivo te evaluearjen.