Aptamer Undersykstsjinst

Ynlieding ta Aptamer

Aptameren binne ienstrengige nukleïnezuurmolekulen (lykas DNA of RNA) dy't yn vitro screene wurde út in bibleteek fan synthetyske oligonukleotiden mei willekeurich tawiisde sekwinsjes troch in proses neamd SELEX-screening, dat meardere rûndes fan iterative seleksje omfettet. De wichtichste komponinten fan aptamerûntwikkelingstsjinsten dy't eigendom binne fan Alpha Lifetech omfetsje aptamerbibleteekkonstruksje, aptamer SELEX-screening, aptamer SELEX-sekwinsjearring, aptamer-sekwinsje-analyze en oare aptamer-analyze.

SELEX-sekwinsjearring kombinearret aptamer SELEX-screening en hege-trochput-sekwinsjearring. Troch aptamer SELEX-sekwinsjearring kin de spesifike sekwinsje fan 'e aptamer dy't oan it doel bûn is effisjint bepaald wurde, wêrtroch basisgegevens levere wurde foar lettere aptamer-sekwinsje-analyze en tapassing.

Aptameren binne in soad brûkt yn wittenskiplik ûndersyk, syktebehanneling, biosensorkonstruksje, ûntdekking fan medisinen en miljeumonitoring. De oligonukleotid-aptameren dy't yn vitro screene waarden, waarden lykwols maklik yn vivo ôfbrutsen en fertoane sels toksisiteit. Dêrom is, nei it optimalisearjen fan 'e screene aptameren, in vitro-analyze fereaske om it súkses fan 'e aptamerûntwikkeling te evaluearjen. Neffens de ferskate analysebehoeften fan klanten hat Alpha Lifetech in ferskaat oan aptamer-analysestrategyen foar klanten om út te kiezen.

Fig.1 Diagram fan aptameranalyse. Referinsjeboarne:Thevendran R, Citartan M. 2022. Tests om de bindingsaffiniteit fan aptameren te skatten.

Ynlieding ta Aptamer Undersykstsjinst

Aptamer Stabiliteitsanalyse

Eksperimint mei nuklease-ôfbraak

Troch it ynkubearjen fan de aptamer mei ferskate soarten nukleasen (lykas DNase, RNase, ensfh.) ûnder spesifike omstannichheden, wurdt de degradaasje fan 'e aptamer waarnommen, om sa syn anty-degradaasjefermogen te evaluearjen. Dit is foardielich om de stabiliteit en duorsumens fan 'e aptamer yn praktyske tapassingen te bepalen.

Fluoreszinte labelmetoade

De stabiliteit fan 'e aptamer wurdt yndirekt evaluearre troch de fluoroforen op 'e aptamer te labeljen en de feroaringen fan it fluoreszinsjesignaal foar en nei binding mei it doelwyt te observearjen. Bygelyks, as in aptamer oan in doelwyt bindt, kin syn konformaasje feroarje, wat resulteart yn in fersterke of fermindere fluoreszinsjesignaal.

Termyske stabiliteitsanalyse

De termyske stabiliteit fan 'e aptamer wurdt beoardiele troch it mjitten fan 'e feroaring fan syn smelttemperatuer (Tm-wearde) by ferskate temperatueren. Hoe heger de smelttemperatuer fan 'e aptamer, hoe better syn termyske stabiliteit.

Dynamyske stabiliteitsanalyse

Surface plasmon resonance (SPR) en oare technologyen waarden brûkt om it bining- en ûntkoppelingsproses tusken de aptamer en it doel yn realtime te kontrolearjen, dynamyske parameters te krijen (lykas biningsnelheidskonstante, dissosiaasjesnelheidskonstante, ensfh.), it ynteraksjemeganisme tusken de aptamer en it doel fierder te begripen, en syn dynamyske stabiliteit te evaluearjen.

Strukturele stabiliteitsanalyse

Röntgenkristallografy, kearnmagnetyske resonânsje (NMR) en oare strukturele biologyske techniken waarden brûkt om de trijediminsjonale struktuer fan 'e aptameer en syn strukturele stabiliteit te analysearjen.

Aptamer Spesifike Analyse

Aptamer-bindingsassay

Affiniteit wurdt beoardiele troch in aptamerbindingstest út te fieren om de bindingskonstante tusken de aptamer en it doelmolekule te mjitten, lykas de dissosiaasjekonstante Kd. In legere Kd-wearde jout in hegere affiniteit oan. In aptamerbindingstest kin medisynkandidaten mei in hege bindingsfermogen útsizze en dan folgjende farmakodynamyske en farmakokinetyske stúdzjes útfiere.

Omkearde screening eksperimint

In reverse screening-assay is in screeningmetoade om net-doelmolekulen fluch út te sluten fan in grut oantal kandidaatmolekulen. Reverse screening is ûntworpen om molekulen út te sluten dy't dizze eigenskip of funksje net hawwe. De kaai ta reverse screening is it selektearjen fan passende reverse screening-markers of omstannichheden dy't it mooglik meitsje om net-doelmolekulen te identifisearjen en te ferwiderjen tidens it screeningproses. Yn dit eksperimint is de seleksje fan net-doelmolekulen tige wichtich. Der moat foar soarge wurde dat de selektearre net-doelmolekulen fertsjintwurdigjend binne foar stoffen dy't aptamer-screening kinne bemuoie en dat mooglike bemuoiende faktoaren sa folslein mooglik behannele wurde.

Kompetitive ynhibysje-eksperimint

Troch it tafoegjen fan tefolle konkurrinten (lykas molekulen mei in ferlykbere struktuer as it doelmolekule) oan it bindingssysteem fan 'e aptamer en it doelmolekule, wurdt de feroaring yn it bindingsfermogen fan 'e aptamer en it doelmolekule waarnommen. As it fermogen fan 'e aptamer om oan it doelmolekule te binen signifikant fermindere is, jout dat oan dat de aptamer in hege spesifisiteit hat.

Yn guon gefallen kinne kompetitive ynhibysje-eksperiminten brûkt wurde as ûnderdiel fan of as in oanfolling op reverse screening-eksperiminten. Bygelyks, yn it medisynscreeningproses kin it fermogen fan it medisynmolekule om te binen oan it doelprotein evaluearre wurde troch kompetitive ynhibysje-eksperiminten, en dan kinne reverse screening-eksperiminten brûkt wurde om dy ferbiningen te ferwiderjen dy't te sterk bûn binne oan normale sellen of weefsels.

Aptamer Cytotoxiciteitsanalyse

Der binne ferskate eksperimintele metoaden foar aptamer-cytotoxiciteitsanalyse, dy't ûntworpen binne om de effekten fan aptameren op seloerlibbing, proliferaasje of funksje te evaluearjen.

Metoaden	Detaillearre ynlieding	Foardiel	Neidiel
MTT-deteksjemetoade	MTT-assay is in metoade basearre op enzymaktiviteit yn mitochondria fan libbene sellen. De succinaatdehydrogenase yn 'e mitochondria fan libbene sellen kin eksogene MTT ferminderje ta de wetterûnoplosbere blau-pearse kristal Formazan en it yn 'e sel ôfsette, wylst deade sellen gjin sokke funksje hawwe. It oplossen fan dizze kristallen mei dimethylsulfoxide (DMSO) en it detektearjen fan absorbânsje by spesifike golflingten (lykas 490 nm of 570 nm) op in enzymoleter kin yndirekt it oantal libbene sellen reflektearje en sa de cytotoxiciteit fan 'e aptameer beoardielje.	Hege gefoelichheid, ekonomy en gemak	Swiere wurkdruk, organyske oplosmiddels kinne skea oan sellen feroarsaakje; Allinnich de definitive eksperimintele resultaten kinne wurde krigen, en it folsleine proses fan cytotoxiciteit kin net wurde besjoen
CCK-8 Deteksjemetoade	Seltellingskit-8 (CCK-8) is in heechgefoelige, net-radioaktive kolorimetryske deteksjemetoade. CCK-8 befettet WST-8, dat troch dehydrogenase yn 'e mitochondria fan libbene sellen redusearre wurdt om heech wetteroplosbere oranje methylzan-brânstof te produsearjen. De hoemannichte mezan-kleurstof dy't produsearre wurdt is lineêr relatearre oan it oantal libbene sellen, en it oantal libbene sellen kin yndirekt werjûn wurde troch de ljochtabsorpsjewearde fan Mezan-kleurstof te mjitten by de golflingte fan 450 nm, om de cytotoxiciteit fan 'e aptameer te evaluearjen.	Ienfâldige operaasje, gjin needsaak om sellen te waskjen, rappe deteksje, breed lineêr deteksjeberik, hege gefoelichheid, goede werhelberens, lege cytotoxiciteit	Hege reagenspriis; It is soms lestich te sizzen oft de fermindere absorbânsje te tankjen is oan in ôfname fan it oantal libbene sellen of in ôfname fan 'e aktiviteit fan 'e seldehydrogenase sels
LDH-deteksjemetoade	LDH (laktaatdehydrogenase) is in enzyme dat stabyl is yn it cytoplasma fan sellen, en as it selmembraan skansearre is, wurdt LDH bûten de sel frijlitten. LDH kin molksûr katalysearje om pyruvaat te foarmjen, en reagearje mei INT (tetrazoliumsâlt) om in pearse kristallijne stof te foarmjen. Troch it mjitten fan syn absorbânsje by in spesifike golflingte (lykas 490 nm), kin de mjitte fan selskade werjûn wurde, en dan kin de cytotoxiciteit fan 'e aptameer evaluearre wurde.	It reflektearret direkt it stjertesifer fan sellen, en hat minder skea oan sellen, en d'r is gjin radioaktive isotoopfersmoarging	De needsaak om de sellen faak út 'e ynkubator te heljen, de operaasje is yngewikkelder; Allinnich de definitive eksperimintele resultaten kinne wurde krigen, en it folsleine proses fan cytotoxiciteit kin net wurde besjoen
Realtime analyse fan live selôfbylding	Mei help fan in real-time live cell imaging analyzer waard it ynstrumint yn 'e ynkubator pleatst om it heule proses fan 'e selgroeisyklus yn real-time te observearjen en op te nimmen. De cytotoxiciteit fan aptameren kin wurde evaluearre troch it analysearjen fan 'e morfologyske feroarings en groeikurven fan sellen. Dizze metoade kin fideo- en kwantifisearre resultaten fan cytotoxyske prosessen leverje, wylst de selgroeiomjouwing stabyl bliuwt.	It kin it cytotoksyske proses yn realtime kontrolearje, net-destruktive ôfbylding, de ynterferinsje en skea oan sellen ferminderje; Sawol fideo- as kwantifisearre resultaten binne beskikber foar yngeande analyze.	De apparatuerkosten binne heech en fereaskje profesjonele operaasjefeardigens en gegevensanalysefeardigens

KACHI

Foardiel fan Aptamer Undersykstsjinst

Totale kwaliteitskontrôle

Optimalisearre Aptameren mei hegere stabiliteit

Ekonomysk en effisjint. Mear konkurrearjende priis, bettere tsjinst

Wiidweidige ûndersykssites en meardere ûndersyksmetoaden

Profesjonele pre-sales advys en nei-sales stipe tsjinsten

Rike ûnderfining yn aptameranalyse

R&D-team op heech nivo

Oanpaste aptamer-relatearre tsjinsten

Werom nei de side fan it Aptamer-ûntwikkelingsplatfoarm

As jo fragen hawwe, nim dan gerêst kontakt mei ús op.

Leave Your Message

Featured Service

0102