Platfoarm foar ûntwikkeling fan bispesifyk antistoffen

Alpha Lifetech kin klanten kwaliteitsfersekere antistofûntdekking en rekombinante proteïneprodukten en -tsjinsten leverje. Wy kinne antistoffen tariede mei hege effektiviteit, sterke spesifisiteit en goede stabiliteit. Alpha Lifetech hat in ferskaat oan antistofsuveringsynstruminten en apparatuer, dy't antistofsuveringstsjinsten kinne leverje út ferskate boarnen lykas monoklonale antistoffen fan kninen, skiep, kip en mûs, lykas ek affiniteitssuveringstsjinsten foar proteïne A/G en antistofskiedings- en suveringstsjinsten. Basearre op 'e wiidweidige platfoarmsysteemkonstruksje fan it antistofûntdekkingsplatfoarm, proteïneplatfoarm, ensfh., dekke wy de upstream- en downstreamtsjinsten fan antistofproduksje, en kinne wy technyske tsjinsten leverje fan antistoftarieding, bispesifike antistofsuvering en antistofskieding en suvering, antistofsekwinsjering, antistoffalidaasje, ensfh., dy't kinne wurde brûkt foar bispesifike antistofterapy.

Monoklonale antistoffen ferwize nei immunoglobulinen produsearre troch ien B-sel dy't in hege spesifisiteit hawwe foar antigenen of epitopen. De produksje fan monoklonale antistoffen waard oarspronklik taret mei hybridomatechnology om mûsantistoffen te produsearjen. Spesifyk, troch miltsellen fan immunisearre mûzen te fusearjen mei myelomasellen fan minsken of mûzen, wurde hybridomasellen foarme, dy't spesifike antistoffen ôfskiede. De generearre mûsmonoklonale antistoffen wurde benammen brûkt yn bistûndersyk en syktediagnoaze nei suveringstsjinsten. It minsklik lichem sil lykwols in ymmúnreaksje produsearje op frjemde mûsproteinen, dus d'r binne wichtige beheiningen yn 'e klinyske tapassing fan' e produksje fan mûsmonoklonale antistoffen. Letter brûkten minsken "humanisaasje" om monoklonale antistoffen fan mûzen te meitsjen, en brûkten se genetyske yngenieurstechnology om mûsantistoffen te modifisearjen om in konstante regio fan minsklik immunoglobuline te hawwen om har immunogeniteit te ferminderjen. Dit type antistof is ek bekend as humanisearre monoklonale antistof. Derneist wurdt it brûken fan minsklike sellen om monoklonale antistoffen te produsearjen neamd tarieding fan folsleine minsklike monoklonale antistoffen. Monoklonale antistoffen wurde breed brûkt yn biomedyske en klinyske tapassingen. Yn medysk ûndersyk kinne monoklonale antistoffen brûkt wurde as immunomodulatoren, terapeutyske monoklonale antistoffen kinne brûkt wurde foar kankergemoterapy en behanneling fan firale ynfeksjes, en de ûntwikkeling fan monoklonale antistofkonjugaten wurdt benammen brûkt foar kankerbehanneling.

Ynlieding ta bispesifyk antistof

Yn 1960 waard it konsept fan bispesifike antistoffen foarsteld. Bispesifike antistoffen, ek wol bekend as bispesifike monoklonale antistoffen, binne keunstmjittich synthetisearre antistoffen mei gebrûk fan genetyske technyktechnology. As in yngenieurde keunstmjittige antistof hearre bispesifike antistoffen meastal ta de IgG-subklasse en befetsje se in antigeen-binend fragmint dat rjochte is op 'e CD3-subeenheid. Bispesifike antistoffen hawwe twa spesifike antigeen-binende plakken dy't tagelyk twa ferskillende antigenen, of twa ferskillende epitopen fan in antigeen, kinne bine en werkenne. Yn ferliking mei monoklonale antistoffen hawwe bispesifike antistoffen in ekstra spesifike antigeen-binende plak, en hawwe dêrtroch in sterkere spesifisiteit en rjochtingsfermogen, dy't tumorsellen krekter kinne rjochtsje en off-target-toksisiteit ferminderje kinne. Bispesifike antistoffen kinne tagelyk meardere biologyske funksjes útfiere, lykas it rekrutearjen fan ymmúnsellen, it blokkearjen fan sinjaalpaden en it direkt deadzjen fan tumorsellen. Iere bispesifike antistoffen waarden benammen taret troch gemyske konjugaasje of selfúzje, mar dizze metoade kin stadich foarútgong hawwe fanwegen de willekeurige kombinaasje en muoite by it isolearjen fan 'e doelkombinaasje. Mei de trochgeande ûntwikkeling fan genetyske technyktechnology binne in soad nije technologyplatfoarms ûntwikkele, lykas knopen yn gatten (KIH), CrossMab, DVD Ig, ensfh. Dizze platfoarms lossen problemen lykas swiere keten- en lichte ketenmismatches effektyf op, en ferbetterje de uniformiteit en opbringst fan bispesifike antistoffen.

Fig. 1 Fereinfâldige skematyske oersjoch fan 'e foarstelde wurkingsmeganismen foar bispesifike antistoffen (bsAbs) yn klinyske proeven foar onkology.(Boarne fan ôfbylding: In oersjoch fan bispesifike antistoffen en antistofkonstruksjes yn onkology en klinyske útdagings - ScienceDirect)

Bispesifike antistoffen produksjetechnology

De wichtichste metoaden foar bispesifike antistofproduksje omfetsje gemyske koppeling, hybridoma fan fjouwer boarnen, en tarieding fan antistoffen mei genetyske technyk. Dêrûnder keppelet de gemyske koppelingmetoade twa yntakte IgG- of twa F(ab')2-antistoffragminen yn bispesifike antistoffen mei gebrûk fan gemyske koppelingsmiddels lykas ftalimide en dithioacylbenzoësoer. Dizze metoade is ienfâldich en maklik te betsjinjen, mar it kin de antigeenbindingsplak beskeadigje, de antistofaktiviteit ferminderje, en it koppelingsmiddel sels hat ek in beskate mjitte fan karsinogeniteit. De hybridomametoade fan fjouwer boarnen is basearre op 'e fúzje fan somatyske sellen fan twa ferskillende hybridomasellinen om de oerienkommende mûs-IgG út te drukken. Troch genetyske technyktechnology kinne antistoffen genetysk modifisearre wurde om bispesifike antistoffen te foarmjen. Twa ferskillende monoklonale antistoffen waarden konstruearre, en de Fab-fragminen of swiere keten- en lichte ketenfariabele regio's fan 'e twa antistoffen waarden apart splitst. Troch crosslinking-reaksje of ketenrekombinaasjetechnology waarden de twa fragminen kombineare om in bispesifike antistof te foarmjen. Hoewol de kompleksiteit fan genetyske technyktechnology relatyf heech is, is it op it stuit de meast brûkte metoade foar bispesifike antistofproduksje om de struktuer en funksje fan antistoffen oan te passen. By it útfieren fan bispesifyk antistofûntwerp kin it prinsipe fan antistofkrúsreaktiviteit brûkt wurde, mar antistofkrúsreaktiviteit kin net-spesifike reaksjes feroarsaakje, dus it sil soarchfâldich beskôge wurde yn 'e praktyske tapassing fan bispesifyk antistofûntwerp, lykas bispesifyk antistofterapy.

Bispesifike antistoffen suvering

Bispesifike antistofsuvering is it proses fan it isolearjen en suverjen fan doelwitantistoffen mei hege suverens. Twa metoaden, sintrifugaasje en djippe filtraasje, wurde brûkt om guon oplosbere ûnreinheden te ferwiderjen. De doelwitbispesifike antistof wurdt yn earste ynstânsje fongen troch affiniteitschromatografy. Foar IgG-like bispesifike antistoffen wurdt proteïne A-affiniteitschromatografy brûkt, wylst foar net-IgG-like bispesifike antistoffen affiniteitschromatografy op basis fan lichte keten brûkt wurde kin. Dêrnei wurdt de antistof in bepaalde perioade ûnder lege pH-omstannichheden ynkubearre, wêrtroch't de proteïnestruktuer op it oerflak fan 'e firusomhulsel fersteurd wurdt, wêrtroch't it fermogen om sellen te ynfektearjen ferlern giet. Tuskenlizzende djippe filtraasje wurdt útfierd om ûnreinheden lykas gasthearselproteinen (HCP) fierder te ferwiderjen. De suverens fan antistoffen wurdt ferbettere troch metoaden lykas ionútwikselingschromatografy, en alle oerbleaune firussen wurde fuorthelle troch nanofiltraasje- of ultrafiltraasjetechniken. Uteinlik wurdt it monster konsintrearre en ferfongen troch in geskikte formulearringsbuffer.

Workflow foar bispesifike antistoffenproduksjetsjinst

Stappen	Tsjinstynhâld	Tiidline
Gensynteze	Generaasje fan maksimaal 3 ferskillende ûntwerpskema's fan sekwinsjes, de novo generaasje fan rekombinante antistof-DNA-plasmiden	2-3 wiken
Lytsskalige test	Produksje fan bispesifike antistofproteinen → Ekspresje op lytse skaal yn sûchdiersellinen → Falidaasje troch SDS-PAGE → Bindinganalyse mei rekombinante proteïneantigenen troch ELISA → Fergeliking fan klonen mei âlderlike antistoffen	5-6 wiken
Identifisearje	Ekspresje fan 'e earste twa folsleine bispesifike antistoffen → Bindinganalyse troch ELISA → ELISA-evaluaasje fan antistoffen erkend troch anti-mûsantistoffen	1 wike
Antistofproduksje	Produksje fan antistoffen op grutte skaal	3-4 wiken

Us foardielen

Wy dekke de upstream- en downstreamtsjinsten fan antistofproduksje, en kinne technyske tsjinsten leverje fan antistoftarieding, bispesifike antistofsuvering en antistofskieding en suvering, antistofsekwinsjearring, antistoffalidaasje, ensfh., dy't brûkt wurde kinne foar bispesifike antistofterapy.

Hege ekspresje

Hege proteïne-ekspresje yn CHO-sellen.
Stabile opslach

>2 wiken yn serum by 37 °C.
Gjin oplosberensprobleem

>30 mg/ml
Stabile sel Lnes

In protte stabile sellinen mei tumorantigenen binne ûntwikkele om in protte bispesifike antistoffen te falidearjen