Tsjinst foar analyse fan proteïne-proteïne-ynteraksje

Alpha Lifetech kin klanten ek proteïne-assays, proteïne-ynteraksje-analyze, proteïne-proteïne-ynteraksje-assay (CO-IP, Western Blot, Chromatin-immunopresipitaasje-assay) en proteïnefunksje-assay leverje om te foldwaan oan de eksperimintele behoeften fan ferskate klanten.

KONTAKT MEI ÚS OPNIMME

Tsjinst foar analyse fan proteïne-proteïne-ynteraksje

Alpha Lifetech is al in protte jierren djip dwaande mei proteïne-assays en hat in solide platfoarm boud foar proteïnefunksje-assays, en in ferskaat oan technyske middels behearske om proteïne-ynteraksje te ferifiearjen, wat wittenskiplik ûndersyk of projektûndersykstiid kin besparje, wylst stabile resultaten wurde levere.

Ynlieding ta proteïne-proteïne-ynteraksje-assay

Proteïnen binne de meast krityske útfierende molekulen yn elke foarm fan libben dy't reagearje op 'e ynstruksjes opslein yn genetysk materiaal. Faker dogge proteïnen har wurk troch te fungearjen as rolspilers dy't ynteraksje hawwe mei oare proteïnen, wat dúdliker is as de funksje fan in proteïne ûndersocht wurdt yn 'e echte kontekst fan in sel. It identifisearjen fan 'e ynteraksjes tusken proteïnen is tige wichtich foar it biogemysk ûndersyk fan in yndividueel proteïne. Proteïne-ynteraksje-analyze fan gewoane soarten is as folget:

Ko-immunopresipitaasje-assay

It prinsipe fan 'e ko-immunopresipitaasjemetoade is om it doelprotein, spesifike antistof, en magnetyske kralen fan proteïne A/G te mingen foar ynkubaasje, it supernatant fan it net-bûne proteïne wurdt fuortsmiten troch de adsorpsje fan 'e magnetyske kralen op it magnetyske rek, en de magnetyske kralen wurde wosken om it proteïne en oare ûnreinheden te ferwiderjen, útsein as se spesifyk bûn binne.

Fig.1 Skematysk diagram fan Co-IP-assays.(Referinsjeboarne: Ko-immunopresipitaasje-assay - PubMed (nih.gov))

Pull-down Assay

De pull-down assay is om it bekende proteïne op 'e magnetyske kraal te fixearjen en de stof ta te foegjen dy't detektearre wurde moat. It eluent wurdt detektearre foar de adsorpsje fan ynteraksje-proteïnen.

Yn 1988 suverden Smith et al. GST-fúzjeproteïne, dat waard tapast yn pull-down-assays en wurdt Gst-pulldown neamd, dat is om in GST-tag ta te foegjen oan it doelproteïne, it ynteraksjeproteïne te fangen fia GSH, de bining te eluearjen en it te ferifiearjen fia WB-assays.

Fig.2 Skematysk diagram fan GST pull-down assays.(Referinsjeboarne: GST Pull-Down Assay om PIF4-binding yn vitro te bestudearjen - PubMed (nih.gov) )

Syn útwreiding is om metaalionen lykas nikkel of kobalt as medium te brûken, it proteïne te suverjen troch affiniteitschromatografy, en de bining te eluearjen fia in WB-eksperimint foar ferifikaasje.

Derneist binne der DNA Pull-down (Protein dna binding assay), RNA Pull-down (Protein RNA ynteraksje assay), en lytse molekule pull-down assays.

DNA Pull-down (Protein dna binding assay) is in in vitro-metoade foar it bepalen fan 'e DNA-binding fan proteïne. Oft spesifike proteïnen bine oan doel-DNA waard detektearre troch WB-assays; ûnbekende DNA-fragminen bûn oan proteïnen, hokker DNA-fragminen bekend binne troch MS-deteksje.

RNA Pull-down (Protein RNA ynteraksje-assay) is in in vitro-metoade foar it bepalen fan RNA-binding oan aaiwiten. Oft spesifike aaiwiten bine oan doel-RNA waard detektearre troch WB-assays; Unbekende RNA-fragminen bûn oan aaiwiten, hokker RNA-fragminen bekend binne troch MS-deteksje.

SM-pull-down (lytse molekule pull-down assays) kinne doelwitproteinen fine dy't spesifyk bine oan lytse molekulen, en yn kombinaasje mei MS kinne lytse molekule-doelwitproteinen sekuer screene wurde, wat kin wurde ferdield yn 'e in vitro-labelingmetoade en biologyske ortogonale metoade.

WB-eksperimint

WB-eksperimint (ek wol bekend as Western Blot-eksperimint of Western blot), de essinsje is de spesifike reaksje fan antigen en antistof, it basisprinsipe is om denaturearre proteïnen te skieden troch SDS-polyacrylamidegelelektroforese en it oer te bringen nei in fêste-fazedrager (lykas PVDF-membraan, NC-membraan) fia membraanoerdracht (wiete of semi-droege rotaasje). Nei it blokkearjen (mei BSA, karnemelk, ensfh.) wurdt it primêre antistof tapast om spesifyk oan it proteïne te binen, en wurdt it fluoresceïne-labelde sekundêre antistof tafoege nei it waskjen fan 'e film. Troch it twadde antistof te binen mei it primêre antistof, kin it doelproteïne waarnommen wurde troch substraatkleurûntwikkeling en chemiluminescence. It wurdt oer it algemien brûkt om te bepalen oft in spesifyk proteïne útdrukt wurdt yn it stekproef en rûchwei it ekspresjenivo te analysearjen.

Fergeliking fan proteïne-proteïne-ynteraksjemetoade

De proteïne-pull-down-assays binne fergelykber mei de Co-IP-assays, dy't beide hearre ta de deteksje fan proteïne-ynteraksje-eksperiminten. It ferskil tusken de twa metoaden is dat de Co-IP-assays de ynteraksje-aaiwiten fan bekende aaiwiten krije, dy't in bepaalde autentisiteit hawwe, mar net kinne befestigje oft de ynteraksje-aaiwiten direkt of yndirekt ynteraksje hawwe. Pull-down-assays binne bedoeld om it ûnbekende aaiwyt te finen dat ynteraksje hat mei it bekende aaiwyt. It kin direkt befestigje oft it bekende aaiwyt ynteraksje hat mei it detektearre aaiwyt, mar kin de bindingssituaasje yn vivo net witte.

Ko-immunopresipitaasjetechnology wurdt brûkt om te analysearjen oft der in ynteraksje is tusken twa of mear proteïnen, basearre op immunopresipitaasje-eksperiminten. Yn ferliking mei oare proteïne-ynteraksje-analyze fan eksperimintele techniken (GST Pull-down, Western Blot, Chromatin immunopresipitaasje-assay, ensfh.), hat Co-IP-technology hegere spesifisiteit, gefoelichheid en hege werhelberens, wat de ynterferinsje fan net-spesifike binding kin foarkomme en de ynteraksje fan proteïnen yn 'e natuerlike steat kin reflektearje.

	BTW-neidielen	Ko-IP	WB
Foardiel	* Maklik te betsjinjen * Geskikt foar de suvering fan ferskate proteïnen	Foar yn vivo ynteraksje-analyze It kin identifisearre wurde mei downstream-proteïne	Sterke spesifisiteit Kwalitatyf en kwantitative yn vitro
Beperking	Miskien net-spesifike binding Fierdere falidaasje fan 'e ynteraksje is fereaske	Sterke ôfhinklikens fan antistoffen Net-spesifike binding kin foarkomme	Tiid-ynslinend Dreech te brûken foar proteïne-analyze op grutte skaal
Applikaasjefoarbyld	* Ynteraksjes identifisearje *Suvere proteïnekompleks	Stúdzje sinjaaltransduksje Syktemeganisme	Folgjende analyze fan proteïne-proteïne, proteïne-DNA, en proteïne-RNA-ynteraksjes