Cad is Innealtóireacht Antashubstainte ann?

Le cabhair ó innealtóireacht antasubstainte, d'fhéadfaí méid móilíneach, cógas-chinéitic, imdhíon-ghineacht, cleamhnas ceangailteach, sainiúlacht agus feidhm éifeachtóra na n-antasubstaintí a mhodhnú. Tar éis antasubstaintí a shintéisiú, de bharr saincheangal na n-antasubstaintí tá siad thar a bheith luachmhar i ndiagnóis agus i gcóireáil chliniciúil. Trí innealtóireacht antasubstainte, is féidir leo freastal ar riachtanais luathfhorbairt drugaí agus diagnóisic.

Is é cuspóir na hinnealtóireachta antashubstaintí feidhmeanna an-sonracha, cobhsaí a dhearadh agus a tháirgeadh nach féidir le antasubstaintí nádúrtha a bhaint amach, ag leagan an bhunsraith do tháirgeadh antasubstaintí teiripeacha.

Is féidir le Alpha Lifetech, lena thaithí tionscadail fhairsing in innealtóireacht antashubstainte, seirbhísí antashubstainte monaclónacha agus polachlónacha saincheaptha a sholáthar le haghaidh ilspeicis, chomh maith le seirbhísí tógála agus scagtha leabharlainne antasubstainte taispeána phage. Is féidir le Alpha Lifetech antasubstaintí bithchosúla ardchaighdeáin agus táirgí próitéine athchuingeacha, chomh maith le seirbhísí comhfhreagracha, a sholáthar do chustaiméirí chun antasubstaintí éifeachtacha, an-sonrach agus cobhsaí a tháirgeadh. Trí úsáid a bhaint as córais chuimsitheacha antashubstainte, ardáin phróitéin agus taispeána phage, cuirimid seirbhísí ar fáil a chlúdaíonn táirgeadh antashubstainte in aghaidh an tsrutha agus anuas, lena n-áirítear seirbhísí teicniúla amhail daonnú antashubstainte, íonú antasubstainte, seicheamhú antasubstaintí, agus bailíochtú antasubstainte.

Tá baint ag céim cheannródaíoch na hinnealtóireachta antasubstainte le dhá theicneolaíocht:

--Teicneolaíocht DNA athchuingreach

-- Teicneolaíocht hibrideach

Tá baint ag forbairt tapa na hinnealtóireachta antasubstainte le trí theicneolaíocht thábhachtach:

--Teicneolaíocht chlónála géine agus imoibriú slabhra polaiméaráise

-- Slonn próitéine: Déantar próitéiní athchuingeacha a tháirgeadh trí chórais slonn cosúil le giosta, víris slat-chruthach, agus plandaí

-- Dearadh struchtúrach ríomhchuidithe

Rinneadh an chéad ghlúin d'antasubstaintí a dhaonnú le haghaidh táirgeadh antasubstaintí chimeric, áit a raibh réigiún athraitheach na n-antasubstaintí monaclónacha luiche nasctha le réigiún leanúnach na móilíní IgG daonna. Rinneadh an réigiún ceangailteach antaigin (CDR) den antashubstaint mhonaclónach luiche dara glúin a trasphlandú isteach i IgG daonna. Ach amháin sa réigiún CDR, is beagnach antasubstaintí daonna iad na hantasubstaintí eile go léir, agus rinneadh iarrachtaí chun freagraí antasubstainte frith-luiche daonna (HAMA) a astú nuair a úsáidtear antasubstaintí clón luiche le haghaidh cóireála daonna.

 

Chun leabharlann taispeána phage a thógáil, is é an chéad chéim ná antasubstaintí ionchódaithe géinte a fháil, ar féidir iad a leithlisiú ó chealla B ainmhithe imdhíonta (tógáil leabharlainne imdhíonachta), a bhaintear go díreach ó ainmhithe neamh-imdhíonta (tógáil leabharlainne nádúrtha), nó fiú le chéile in vitro le blúirí géine antasubstainte (tógáil leabharlainne sintéiseach). Ansin, déantar na géinte a aimpliú trí PCR, a chuirtear isteach i plasmids, agus a chuirtear in iúl i gcórais óstacha oiriúnacha (léiriú giosta (Pichia pastoris de ghnáth), léiriú prokaryotic (E. coli de ghnáth), léiriú cille mamaigh, léiriú cille plandaí, agus léiriú cille feithidí atá ionfhabhtaithe le víris slat-chruthach). Is é an ceann is coitianta ná an córas léirithe E. coli, a chomhtháthaíonn seicheamh antasubstainte ionchódaithe ar leith ar an phage agus a ionchódaíonn ceann de na próitéiní bhlaosc phage (pIII nó pVIII). An comhleá géine de, Agus ar taispeáint ar an dromchla na bacteriophages. Is é croílár na teicneolaíochta seo ná leabharlann taispeána phage a thógáil, a bhfuil an buntáiste aige thar leabharlanna nádúrtha sa mhéid is go bhféadfadh ceangal sonrach a bheith aici. Ina dhiaidh sin, déantar antasubstaintí a bhfuil sainiúlacht antaigin acu a scagadh trí phróiseas roghnúcháin bitheolaíochta, socraítear sprioc-antaiginí, nitear ar shiúl phages neamhcheangailte arís agus arís eile, agus nitear phages faoi cheangal le haghaidh breis saibhrithe. Tar éis trí bhabhta nó níos mó de athrá, tá sainiúlacht ard agus antasubstaintí ard-chleamhnas scoite amach.

Fig 3: Tógáil agus Scagadh Leabharlann antashubstainte

Is féidir teicneolaíocht athchuingreach DNA a úsáid chun blúirí antashubstainte a ghiniúint. Ní féidir antasubstaintí Fab a hidrolyzed ar dtús ach le próitéas gastric chun 2 blúirí (Fab ') a tháirgeadh, a dhíleáitear ansin ag papain chun blúirí Fab aonair a ghiniúint. Tá an blúire Fv comhdhéanta de VH agus VL, a bhfuil droch-chobhsaíocht acu mar gheall ar easpa bannaí disulfide. Dá bhrí sin, tá VH agus VL nasctha le chéile trí pheptíde gearr de 15-20 aimínaigéid chun antasubstaint blúire inathraithe slabhra aonair (scFv) a fhoirmiú le meáchan móilíneach de thart ar 25KDa.

Léirigh staidéar ar struchtúr antasubstainte i gCamelidae (Camel, LIama, agus Alpaca) nach bhfuil ach slabhraí troma agus slabhraí éadroma ag antasubstaintí, agus mar sin tugtar antasubstaintí slabhra trom orthu (hcAb). Tugtar antasubstaintí fearainn aonair nó nana-chomhábhair nó VHH ar an bhfearann ​​​​athróg d'antasubstaintí slabhra troma, le méid 12-15 kDa. Mar mhonaiméirí, níl aon bhannaí disulfide acu agus tá siad an-chobhsaí, le cleamhnas an-ard d'antaiginí.

Fig 5: Antashubstaint Slabhra Trom agus VHH/ Nana-dhuine

Úsáideann slonn saor ó chealla an slonn DNA nádúrtha nó sintéiseach chun sintéis próitéine in vitro a bhaint amach, go hiondúil ag baint úsáide as an gcóras slonn E. coli. Táirgeann sé próitéiní go tapa agus seachnaíonn sé an t-ualach meitibileach agus citotocsaineach ar chealla nuair a tháirgeann sé líon mór próitéiní in-athchuingreach in vivo. Is féidir leis próitéiní atá deacair a shintéisiú a tháirgeadh freisin, mar iad siúd atá deacair a mhodhnú tar éis aistriúchán nó próitéiní membrane a shintéisiú.