Seirbheis Leasachaidh Antibodies Monoclonal
Faodaidh Alpha Lifetech ro-innse epitope, co-chur peptide, abairteachadh phròtain, cinneasachadh antibody polyclonal no monoclonal a bharrachd air glanadh antibody bho chultar cealla, lionn ascites no serum slàn a thoirt seachad.
CUIR FIOS THUGAINNSeirbheis Leasachaidh Antibodies Monoclonal
Alpha Lifetech Inc.faodaidh e ro-innse epitope, co-chur peptide, abairt pròtain, cinneasachadh antibody polyclonal, no monoclonal a thoirt seachad a bharrachd air glanadh antibody bho chultar cealla, lionn ascites no serum slàn.
Alpha Lifetech Inc.Tha eòlas againn air diofar sheirbheisean loidhne-chealla seasmhach a thoirt do luchd-ceannach, a’ gabhail a-steach ceallan hybridoma, loidhnichean cealla deasachaidh genome, loidhnichean cealla knockdown, agus loidhnichean cealla overexpression. Bidh sinn a’ feuchainn ri seirbheisean loidhne-chealla gnàthaichte adhartach a thabhann do gach neach-dèiligidh agus tha na seirbheisean againn dearbhte agus earbsach.
Ro-innleachd Leasachaidh Antibodies
1. Dealbhadh agus ullachadh antigen
Faodaidh na h-antigens seo a bhith nan pròtainean, peptidean, no moileciuilean eile. Feumaidh dealbhadh immunogens dòigh-obrach fharsaing a bhios ag amalachadh eòlas air structar antigen, immunology, agus siostaman lìbhrigidh. Tha teicneòlas dealbhaidh antigen aig Alpha Lifetech as urrainn immunogens a dhealbhadh do luchd-ceannach a tha feumach air.
Bidh Alpha Lifetech a’ toirt seachad toraidhean pròtain ath-chuingealaichte do luchd-ceannach airson taghadh. Tha measgachadh de shiostaman abairt pròtain againn, leithid siostam abairt E. coli, siostam abairt beirm, siostam abairt bhiastagan baculovirus, siostam abairt mamalan, msaa., gus na pròtainean ath-chuingealaichte a dh’ fheumas tu airson rannsachadh a thoirt gu buil.
2. Banachdach bheathaichean
Faodaidh Alpha Lifetech immunogens a thoirt do luchd-ceannach, agus tha beathaichean dìonach leithid luchagan, coineanaich, caoraich, alpacas, mucan-mara, hamstairean, msaa. rim faighinn dhut airson taghadh.
3. Modhan cinneasachaidh antibodies monoclonal
●Riochdachadh Mabs le teicneòlas Hybridoma
Is e cealla hibrid a th’ ann an hybridoma a thèid a thoirt gu buil le bhith a’ co-aonadh dà sheòrsa cealla, is iad sin loidhne cealla myeloma luchaige agus ceallan plasma (lymphocyte B), anns am faod an cealla heterozygous antibodies leantainneach a thoirt gu buil an aghaidh an antigen a tha fo cheist in vitro. Tha trì pàirtean ann an cinneasachadh loidhne cealla hybridoma: dealbhadh antigen (haptens, moileciuilean beaga, agus peptides), banachdach bheathaichean, co-aonadh cealla, agus sgrìonadh clòn dearbhach. Le bhith a’ cleachdadh modhan-obrach banachdach sònraichte, bidh sinn a’ faighinn èifeachdas co-aonadh cealla air leth àrd (1-10 hybridomas gach mìle cealla B) agus titers antibody àrd, a’ meudachadh ar n-ìre soirbheachais ann an deuchainnean anailis às dèidh sin a tha a’ toirt a-steach sgrìonadh bith-cheimiceach, deuchainnean stèidhichte air cealla in-vitro, agus sgrùdaidhean bheathaichean.
●Riochdachadh Mabs le teicneòlas taisbeanaidh phage
Tha taisbeanadh phage a’ tabhann dòigh eile airson antibodies monoclonal a chruthachadh. Tha B-lymphocytes air an sgaradh bho fhuil bheathaichean agus tha an mRNA aca air a thoirt a-mach. Tro PCR, tha an mRNA seo air a thionndadh gu cDNA, a bhios ag àrdachadh a h-uile earrann VH agus VL. Tha na h-earrannan seo an uairsin air an clònadh a-steach do vectar, mar as trice mar phìosan caochlaideach aon-slabhraidh (scFv), còmhla ri pròtain PIII bacteriophage. Às deidh sin, tha an togail seo air a chleachdadh gus E. coli a ghlacadh, agus mar thoradh air an sin tha leabharlann air a chruthachadh anns a bheil timcheall air 10^10 ceallan tro bhith a’ toirt a-steach phage cuideachaidh. Tha E. coli an uairsin comasach air am bacteriophage a leigeil ma sgaoil anns a bheil na h-earrannan VH agus VL mar phàirt den chòta aige. Às deidh seo, faodar earrannan VH agus VL sònraichte a tha ag amas air an antigen a tha fo cheist a thaghadh agus an cleachdadh gus E. coli ath-shìoladh leis a’ bacteriophage. Tha ceallan anns a bheil am plasmid an uairsin air an sgaradh agus air an sreath.
4. Sgrìonadh co-aonaidh
●Co-aonadh Cealla agus Taghadh
Tha na ceallan-B a chaidh a bhuain an uair sin air an co-aonadh le ceallan myeloma, is iad sin ceallan aillseach as urrainn iomadachadh gu bràth ann an cultar. Mar as trice, thèid an co-aonadh a choileanadh le bhith a’ cleachdadh dòigh leithid co-aonadh polyethylene glycol (PEG).
Às dèidh an co-aonadh, thèid na ceallan hibridoma a chur ann am meadhan roghnach a leigeas leis na hibridomaichean a-mhàin mairsinn. Mar as trice bidh aminopterin anns a’ mheadhan, a chuireas casg air fàs cheallan myeloma neo-cho-aonaichte.
●Sgrìonadh agus Clùnadh
Bithear a’ sgrìonadh nan ceallan hybridoma a thig às a sin airson cinneasachadh antibodies sònraichte don antigen targaid. Mar as trice bithear a’ dèanamh seo le bhith a’ cleachdadh dhòighean leithid deuchainn immunosorbent ceangailte ri enzyme (ELISA), Western blot, immunoprecipitation, agus flow cytometry.
Cho luath ‘s a thèid ceallan hybridoma a bhios a’ dèanamh an antibody aithneachadh, thèid an clònadh gus sluagh de cheallan co-ionann a chruthachadh. Nì seo cinnteach gu bheil an antibody a bhios gach cealla hybridoma a’ dèanamh co-ionann.
5. Dearbhadh Gnìomhachd Antibody
Bidh Alpha Lifetech a’ toirt seachad dearbhadh gnìomhachail antibody, leithid Western blotting, immunohistochemistry, no deuchainnean gnìomhachail, gus antibodies monoclonal a chomharrachadh agus sònrachas, dàimh agus gnìomhachd antibody a dhearbhadh.
6. Leasachadh antibodies
Glanadh antibodies bho supernatant cultar a’ cleachdadh dhòighean leithid cromagrafaidheachd càirdeas pròtain A no pròtain G, agus faodaidh Alpha Lifetech cuideachd dòighean atharrachaidh antibody a thoirt seachad gus càirdeas antibody a leasachadh.
7. Riochdachadh antibodies
Faodaidh Alpha Lifetech measadh a dhèanamh air antibodies a tha freagarrach airson tagraidhean sgrìonaidh àrd-toraidh agus cinneasachadh air sgèile mhòr.
- 1
Ciamar a thaghas tu an hybridoma fusion ceart?
Rè a’ phròiseis co-thàthaidh, thèid sìol a chur ann an 10-15 truinnsearan microtiter 96-tobar leis a’ mheasgachadh hibrid co-thàthaidh. Thèid meadhan taghaidh HAT-IMDM a thoirt do gach truinnsear agus thèid a chumail ann an goireadair dà-ogsaid charboin aig 37 ceum Celsius. 9-14 latha às dèidh a’ cho-thàthaidh, thèid deuchainn a dhèanamh air na supernatants hibrid airson làthaireachd an antibody sònraichte a tha fo cheist.
- 2
Ciamar a leasaicheas tu èifeachdas taghaidh?
Chan eil co-aonadh cheallan plasma leis na co-aoisean myeloma aca 100% èifeachdach. Fiù 's fo na suidheachaidhean as fheàrr agus an spreagadh as èifeachdaiche, bidh co-aonadh cheallan fhathast a' toirt a-mach measgachadh de cheallan neo-cho-shruthach agus co-shruthach a dh'fheumar a sgaradh. Gus èifeachdas a' phròiseis taghaidh a leasachadh, chan eil HGPRT, enzyme cudromach ann an slighe teasairginn niùclasaid, anns na ceallan myeloma a thathar a' cleachdadh airson co-aonadh. Chaidh am measgachadh an uairsin a chultarachadh ann am meadhan HAT, far nach robh ach ceallan leis an enzyme HGPRT, hybridomas a fhuair HGPRT bho cheallan plasma, beòthail.
- 3
Ciamar a nì thu sgrìonadh air loidhnichean cealla hybridoma airson gnìomhachd antibody?
’S e ceum deatamach a th’ ann am measadh seòrsachan hibrid. Mar as trice, thèid sgrìonadh supernatant hybridoma, clone, agus subclone a dhèanamh tro dheuchainn immunosorbent ceangailte ri enzyme (ELISA), deuchainn Western blot, agus seòrsachadh cealla gnìomhaichte fluorescence (FACS). Taghaidh sinn a h-uile sgrìonadh den supernatant a dhèanamh san obair-lann againn fhèin.
- 4
Thoir seachad stiùireadh mionaideach air mar a nì thu sgrìonadh air gnìomhachd antibodies?
Dh’fhaodadh gum bi eadar 500 agus 1,440 sampall de shupernates hybridoma a thèid a dhearbhadh agus bidh iad deiseil airson deuchainn ro làithean 9-14. Dh’fhaodadh sinn èirigh thairis air ùine trì gu còig latha no dh’fhaodadh sinn a bhith uile deiseil air an aon latha, agus mar sin tha e cudromach gum bi obair-lann an neach-dèiligidh ullaichte seachdainean ro-làimh le bhith ag obair air deuchainnean sgrìonaidh àrd-sgoile sònraichte a rèir roghainn.
- 5
Carson a dh’fheumar hibridomas dearbhach a fho-chlònadh?
Às dèidh do thobraichean dearbhach a bhith air an comharrachadh rè a’ chiad mhodh-obrach sgrìonaidh ELISA, chaidh hibridomas a ghluasad gu meud nas motha, i.e., truinnsearan 24-tobar, mar ullachadh airson a’ mhodh-obrachaidh fo-chlònaidh. Mar as trice, bithear a’ dèanamh fo-chlònadh hibridomas le dòigh caolachaidh cuibhrichte gus dèanamh cinnteach à aonaranachd monoclònan seasmhach. Tha an dòigh-obrach a’ toirt a-steach caolachadh chultaran hibridoma agus an sgaoileadh ann am truinnsearan 96-tobar gus monoclonalachd (aon chill gach tobar) a choileanadh. Bu chòir co-dhiù dà chaolachadh cuibhrichte a dhèanamh gus an cunnart bho bhith a’ leasachadh sluagh measgaichte hibridoma a lughdachadh.
- 6
Dè na buannachdan a tha ann bho bhith a’ cleachdadh teicneòlas hybridoma airson lorg antibodies?
Chaidh moladh a thoirt do loidhnichean cealla hibrid airson an comas antibodies a thoirt gu buil le àrd-chàirdeas, seasmhachd agus sònrachas anns an dòigh as èifeachdaiche a thaobh cosgais.
Seirbheis Riochdachaidh Antibodies Monoclonal Luchaige
Faodaidh Alpha Lifetech an t-seirbheis iomlan a thoirt do luchd-saidheans air feadh an t-saoghail a thaobh hybridoma luchagan. Tha na seirbheisean sin a’ gabhail a-steach dealbhadh/co-chur antigen, banachdach luchagan, co-aonadh cheallan, agus taghadh/feartan hybridoma, agus is urrainn dhuinn speisealachadh leis an seo anns gach pròiseact.
LEUGH TUILLEADH
Seirbheis Riochdachaidh Antibodies Monoclonal Coineanach
Tha bliadhnaichean de eòlas aig Alpha Lifetech ann an raon nan antibodies agus tha iad air àrd-ùrlar coileanta a thogail airson antibodies monoclonal coineanaich.
LEUGH TUILLEADH
2018-07-16 
