Plataforma de desenvolvemento de Aptamer

Os aptámeros son oligonucleótidos monocatenarios (ADN, ARN ou XNA) cunha alta afinidade e especificidade que se unen especificamente a moléculas diana como os anticorpos, e utilízanse amplamente para o desenvolvemento de biosensores, diagnóstico e terapias.

A plataforma de aptámeros proporcionada por Alpha Lifetech inclúe dúas categorías: a plataforma de síntese de aptámeros, que inclúe principalmente o servizo de síntese da biblioteca de aptámeros SELEX e o servizo de desenvolvemento de aptámeros (ADN, ARN ou XNA), e a plataforma de cribado de aptámeros, que inclúe servizos de cribado baseados na tecnoloxía SELEX para proteínas, péptidos, células, pequenas moléculas, ións metálicos e outras moléculas diana, así como servizos posteriores de análise e optimización de aptámeros e identificación.

Plataforma de síntese de aptámeros

Servizo de síntese da biblioteca de aptámeros SELEX

O servizo de síntese de bibliotecas de aptámeros SELEX consiste principalmente na construción dunha biblioteca que conteña un gran número de secuencias aleatorias de oligonucleótidos monocatenarios mediante síntese química in vitro segundo os moleculares diana. A construción da biblioteca é o punto de partida da tecnoloxía SELEX, que proporciona abundantes secuencias candidatas para o proceso de selección posterior mediante a construción de enormes bibliotecas aleatorias e aumenta a posibilidade de seleccionar aptámeros de alta afinidade.

A síntese de bibliotecas divídese principalmente nos seguintes pasos:

Pasos	Detalles da tecnoloxía
Identificar moléculas diana	Identificar as moléculas diana que cómpre analizar para detectar aptámeros, que poden ser proteínas, ácidos nucleicos, pequenas moléculas, ións metálicos, etc.
Deseño de secuencias aleatorias	A lonxitude da secuencia aleatoria, a composición de bases e outros parámetros foron deseñados segundo as características das moléculas diana e os requisitos de selección. Normalmente, as secuencias aleatorias teñen unha lonxitude de entre decenas e centos de bases.
Síntese de secuencias fixas	Deséñanse e sintetízanse fragmentos de oligonucleótidos con secuencias fixas (como as secuencias dos cebadores de PCR) en ambos os extremos, que se utilizarán no proceso posterior de amplificación e cribado.

A biblioteca sintetizada aínda precisa ser procesada para o control de calidade. Determinouse a concentración da biblioteca para garantir a súa aplicabilidade no proceso de selección posterior. A diversidade e a precisión das secuencias aleatorias da biblioteca verificáronse mediante secuenciación e outros métodos para garantir que a calidade da biblioteca cumpría os requisitos de selección.

Mediante os pasos anteriores, pódese sintetizar unha biblioteca de aptámeros SELEX de alta calidade e moi diversa, que pode proporcionar abundantes secuencias candidatas para o proceso de cribado posterior.

Servizos de desenvolvemento de aptámeros (ADN, ARN ou XNA)

Os aptámeros adoitan referirse a aptámeros de ácidos nucleicos. Os aptámeros de ácidos nucleicos inclúen aptámeros de ADN, aptámeros de ARN e aptámeros de XNA, que son aptámeros de ácidos nucleicos modificados quimicamente. A técnica SELEX emprégase amplamente para o desenvolvemento de aptámeros. O fluxo de traballo básico dos servizos de desenvolvemento de aptámeros inclúe a construción de bibliotecas, a unión a dianas, o illamento e a purificación, a amplificación, as múltiples roldas de cribado e a identificación de secuencias. Durante moitos anos, centrámonos na construción de bibliotecas e temos unha ampla experiencia no desenvolvemento de aptámeros. Comprometémonos a ofrecer mellores servizos aos clientes.

Proceso tecnolóxico SELEX

O proceso SELEX consta de varias roldas, cada unha das cales consiste nos seguintes pasos clave:

Biblioteca e vinculación de destino

A biblioteca de ácidos nucleicos construída mestúrase con moléculas diana específicas (como proteínas, compostos de moléculas pequenas, etc.), de xeito que as secuencias de ácidos nucleicos da biblioteca teñan a oportunidade de unirse ás moléculas diana.

Illamento de moléculas non unidas

As secuencias de ácidos nucleicos que non están unidas á molécula diana sepáranse da mestura mediante métodos específicos como a cromatografía de afinidade, a separación por esferas magnéticas, etc.

Amplificación de moléculas de unión

A secuencia de ácido nucleico unida a unha molécula diana amplifícase, normalmente mediante a tecnoloxía de reacción en cadea da polimerase (PCR). Para a fase de cribado posterior, as secuencias amplificadas usaranse como biblioteca de partida.

Figura 1: Proceso de selección SELEX

Plataforma de cribado de aptámeros

Servizo de cribado de aptámeros

Alpha Lifetech ofrece unha ampla gama de servizos especializados de cribado de aptámeros aplicando diversas metodoloxías SELEX para diferentes tipos das súas moléculas:

Tipos de obxectivo	Detalles técnicos
Cribado de aptámeros de proteínas mediante SELEX	O principal obxectivo da selección de aptámeros de proteínas é analizar aptámeros que poden unirse especificamente ás moléculas proteicas diana. Estes aptámeros son máis sinxelos de sintetizar, máis estables e menos susceptibles aos factores ambientais.
Cribado de aptámeros peptídicos por SELEX	Os aptámeros peptídicos son unha clase de secuencias peptídicas curtas con alta especificidade e afinidade, que poden unirse especificamente a substancias diana e mostran unha ampla gama de potencial de aplicación no campo biomédico. Mediante un proceso de cribado específico, os aptámeros peptídicos que poden unirse especificamente a moléculas diana son cribados a partir dun gran número de bibliotecas de secuencias peptídicas aleatorias.
Cribado de aptámeros específicos de células (Cell-SELEX)	Prepáranse como dianas células diana ou moléculas específicas na superficie celular. As dianas poden ser células enteiras, receptores na membrana celular, proteínas ou outras moléculas pequenas.
Cribado de aptámeros de moléculas pequenas mediante Capture SELEX	A captura de SELEX é unha técnica de cribado in vitro para a cribado de aptámeros de moléculas pequenas, que é unha variante da SELEX. A captura de SELEX é especialmente axeitada para a cribado de aptámeros de moléculas pequenas diana, que normalmente teñen menos grupos funcionais e son difíciles de inmobilizar directamente en soportes de fase sólida.
Servizos SELEX baseados en animais vivos	O servizo de cribado baseado en animais vivos é unha técnica experimental amplamente utilizada nos campos da biociencia, a medicina e a biotecnoloxía, que emprega animais vivos como modelos experimentais para cribar e avaliar moléculas, medicamentos, terapias ou procesos biolóxicos específicos. Os servizos están deseñados para simular o ambiente fisiolóxico do corpo humano para predicir e avaliar con maior precisión a eficacia e a seguridade dos resultados experimentais no corpo humano.

Servizo de optimización de Aptamer

A hidrofilicidade, a alta perda de afinidade durante a produción e a rápida excreción de aptámeros limitan a súa aplicación. Na actualidade, exploráronse diversos métodos de optimización para mellorar o rendemento dos aptámeros.

Tamén dispoñemos de diversas maneiras de optimizar o aptámero, que consisten no truncamento, modificacións e conxugación co grupo axeitado (tiol, carboxilo, amina, fluoróforo, etc.).

Servizo de análise de caracterización de aptámeros

O servizo de análise de caracterización de aptámeros refírese ao servizo profesional de avaliación do rendemento, resolución da estrutura e verificación funcional do aptámero obtido para garantir que o aptámero cumpre os requisitos de capacidade de unión específica, estabilidade e especificidade. Inclúe principalmente análise de afinidade e especificidade, avaliación da estabilidade e verificación da función biolóxica.