Plataforma de Desenvolvemento Aptamer

Os aptámeros son oligonucleótidos monocatenarios (ADN, ARN ou XNA) coa propiedade de alta afinidade e alta especificidade que se unen especificamente a moléculas diana como anticorpos, e úsanse amplamente para o desenvolvemento de biosensores, diagnóstico e terapéutica.

A plataforma de aptamer proporcionada por Alpha Lifetech inclúe dúas categorías: plataforma de síntese de aptámeros, que inclúe principalmente o servizo de síntese de biblioteca de aptámeros SELEX e o servizo de desenvolvemento de aptámeros (ADN, ARN ou XNA), e a plataforma de cribado de aptámeros que inclúe servizos de cribado baseados na tecnoloxía SELEX para proteínas, péptidos, células, moléculas pequenas, ións metálicos e outros servizos de optimización e identificación de aptámeros.

Plataforma de síntese Aptamer

Servizo de síntese da biblioteca de aptamer SELEX

O servizo de síntese da biblioteca de aptámeros de SELEX consiste principalmente na construción dunha biblioteca que conteña un gran número de secuencias aleatorias de oligonucleótidos monocatenarios mediante síntese química in vitro segundo as moléculas diana. A construción de bibliotecas é o punto de partida da tecnoloxía SELEX, que proporciona abundantes secuencias candidatas para o proceso de selección posterior construíndo enormes bibliotecas aleatorias e aumenta a posibilidade de examinar aptámeros de alta afinidade.

A síntese da biblioteca divídese principalmente nos seguintes pasos:

Pasos	Detalles Tecnolóxicos
Identificar as moléculas obxectivo	Identificar as moléculas diana que deben ser examinadas para detectar aptámeros, que poden ser proteínas, ácidos nucleicos, moléculas pequenas, ións metálicos, etc.
Deseño de secuencias aleatorias	Deseñouse a lonxitude da secuencia aleatoria, a composición da base e outros parámetros segundo as características das moléculas diana e os requisitos de cribado. Normalmente, as secuencias aleatorias teñen entre decenas e centos de bases de lonxitude.
Síntese de secuencias fixas	Deséñanse e sintetizan fragmentos de oligonucleótidos con secuencias fixas (como as secuencias de cebadores da PCR) nos dous extremos, que se utilizarán no proceso de amplificación e cribado posterior.

A biblioteca sintetizada aínda necesita ser procesada máis para o control de calidade. Determinouse a concentración da biblioteca para garantir a súa aplicabilidade no proceso de selección posterior. Verificáronse a diversidade e precisión das secuencias aleatorias na biblioteca mediante a secuenciación e outros métodos para garantir que a calidade da biblioteca cumpriu os requisitos de selección.

A través dos pasos anteriores, pódese sintetizar unha biblioteca de aptámeros SELEX de alta calidade e moi diversa, que pode proporcionar abundantes secuencias candidatas para o proceso de selección posterior.

Servizos de desenvolvemento de aptámeros (ADN, ARN ou XNA)

Os aptámeros adoitan referirse a aptámeros de ácidos nucleicos. Os aptámeros de ácidos nucleicos inclúen aptámeros de ADN, aptámeros de ARN e aptámeros de XNA, que son aptámeros de ácidos nucleicos modificados químicamente. A técnica SELEX úsase amplamente para o desenvolvemento de aptámeros. O fluxo de traballo básico dos servizos de desenvolvemento de aptamer inclúe a construción de bibliotecas, a unión de obxectivos, illamento e purificación, amplificación, varias roldas de selección e identificación de secuencias. Durante moitos anos, centrámonos na construción de bibliotecas e unha rica experiencia no desenvolvemento de aptamers. Comprometémonos a ofrecer ao cliente mellores servizos.

Proceso Tecnolóxico SELEX

O proceso SELEX consta de varias roldas, cada unha das cales consta dos seguintes pasos clave:

Biblioteca e encadernación de destino

A biblioteca de ácidos nucleicos construída mestúrase con moléculas diana específicas (como proteínas, compostos de moléculas pequenas, etc.), de xeito que as secuencias de ácidos nucleicos da biblioteca teñen a oportunidade de unirse ás moléculas diana.

Illamento de moléculas non unidas

As secuencias de ácidos nucleicos que non están unidas á molécula diana sepáranse da mestura mediante métodos específicos como a cromatografía de afinidade, a separación de perlas magnéticas, etc.

Amplificación de moléculas de unión

A secuencia de ácidos nucleicos unida a unha molécula diana amplifícase, normalmente mediante a tecnoloxía da reacción en cadea da polimerase (PCR). Para a fase de cribado posterior, as secuencias amplificadas utilizaranse como biblioteca de partida.

Figura 1: proceso de selección de SELEX

Plataforma de cribado Aptamer

Servizo de detección de Aptamer

Alpha Lifetech ofrece unha ampla gama de servizos especializados de cribado de aptámeros aplicando varias metodoloxías SELEX para diferentes tipos de moléculas:

Tipos de destino	Detalles técnicos
Cribado de aptámeros de proteínas por SELEX	O propósito principal do cribado de aptámeros de proteínas é cribar aptámeros que poden unirse especificamente ás moléculas de proteínas diana. Estes aptámeros son máis sinxelos de sintetizar, máis estables e menos susceptibles aos factores ambientais.
Cribado de aptámeros de péptidos por SELEX	Os aptámeros peptídicos son unha clase de secuencias peptídicas curtas con alta especificidade e afinidade, que poden unirse especificamente a substancias diana e mostrar unha ampla gama de potencial de aplicación no campo biomédico. Mediante un proceso de selección específico, os aptámeros peptídicos que poden unirse especificamente a moléculas diana son cribados a partir dunha gran cantidade de bibliotecas de secuencias peptídicas aleatorias.
Cribado de aptámeros específicos de células (Cell-SELEX)	As células diana ou moléculas específicas na superficie celular prepáranse como dianas. Os obxectivos poden ser células enteiras, receptores na membrana celular, proteínas ou outras moléculas pequenas.
Cribado de aptámeros de pequenas moléculas por Capture SELEX	Capture SELEX é unha técnica de cribado in vitro para o cribado de aptámeros de pequenas moléculas, que é unha variante de SELEX. Capture SELEX é especialmente axeitado para o cribado de aptámeros de dianas de moléculas pequenas, que normalmente teñen menos grupos funcionais e son difíciles de inmobilizar directamente sobre soportes de fase sólida.
Servizos SELEX baseados en animais vivos	O servizo de cribado en animais vivos é unha técnica experimental moi utilizada nos campos da biociencia, a medicina e a biotecnoloxía, que utiliza animais vivos como modelos experimentais para cribar e avaliar moléculas específicas, medicamentos, terapéuticos ou procesos biolóxicos. Os servizos están deseñados para simular o ambiente fisiolóxico do corpo humano para prever e avaliar con maior precisión a eficacia e seguridade dos resultados experimentais no corpo humano.

Servizo de optimización de Aptamer

A hidrofilia, a alta perda de afinidade durante a produción e a rápida excreción de aptámeros limitan a súa aplicación. Na actualidade, exploráronse unha variedade de métodos de optimización para mellorar o rendemento dos aptámeros.

Tamén temos unha variedade de formas de optimizar o aptámero consistente en truncamento, modificacións, conxugación ao grupo apropiado (tiol, carboxi, amina, fluoróforo, etc.).

Servizo de análise de caracterización de aptámeros

O servizo de análise de caracterización de aptámeros refírese ao servizo profesional de resolución de estruturas de avaliación do rendemento e verificación funcional do aptámero obtido para garantir que o aptámero cumpra os requisitos específicos de capacidade de unión, estabilidade e especificidade. Inclúe principalmente análise de afinidade e especificidade, avaliación da estabilidade e verificación da función biolóxica.