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एफिनिटी मापन प्लेटफ़ॉर्म

ऑक्टेट और बायकोर-टी2000 प्लेटफॉर्म पर आधारित, अल्फा लाइफटेक विश्वसनीय एफिनिटी निर्धारण सेवाएं प्रदान कर सकती है।

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एफिनिटी मापन प्लेटफ़ॉर्म

ऑक्टेट और बायकोर-टी2000 प्लेटफॉर्म पर आधारित, अल्फा लाइफटेक विश्वसनीय एफिनिटी निर्धारण सेवाएं प्रदान कर सकती है। हम एंटीबॉडी, कोशिकाएं, प्रोटीन, छोटे अणु आदि जैसे कई नमूनों के लिए एफिनिटी निर्धारण प्रदान कर सकते हैं। एफिनिटी निर्धारण के लिए विभिन्न विधियां उपलब्ध हैं, जिनमें सरफेस प्लाज्मा रेजोनेंस (एसपीआर) और बायो-लेयर इंटरफेरेंस (बीएलआई) एफिनिटी निर्धारण शामिल हैं।

अल्फा लाइफटेक के पास एक पेशेवर और सटीक एफिनिटी निर्धारण प्लेटफॉर्म है जो ELISA को एफिनिटी निर्धारण के साथ जोड़ता है, जिससे दुनिया भर के ग्राहकों को पेशेवर, कुशल, तीव्र और सटीक एफिनिटी निर्धारण परिणाम मिलते हैं। हम ग्राहकों को चुनने के लिए दो तरीके प्रदान करते हैं: तीव्र एफिनिटी निर्धारण और सटीक एफिनिटी निर्धारण। तीव्र एफिनिटी निर्धारण एक ही सांद्रता पर एफिनिटी का निर्धारण करता है, जबकि सटीक एफिनिटी निर्धारण विभिन्न सांद्रताओं की एफिनिटी को माप सकता है। इसका उपयोग विभिन्न छोटे अणु यौगिकों, पेप्टाइड्स, प्रोटीन, ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स और ऑलिगोमर्स, साथ ही लिपिड, बैक्टीरियोफेज, वायरस और कोशिकाओं के बीच अंतःक्रियाओं के अध्ययन में किया जाता है। एफिनिटी मापन प्लेटफॉर्म एफिनिटी ड्रग परीक्षण और स्क्रीनिंग, एंटीबॉडी की खोज के लिए आधार तैयार कर सकता है और आगे के अनुसंधान को सुगम बना सकता है।

बंधन आत्मीयता का परिचय

अंतर-आणविक अंतःक्रियाओं, एफिनिटी ड्रग एसेज़ और ड्रग स्क्रीनिंग के मूल्यांकन में एफिनिटी महत्वपूर्ण है। अंतर-आणविक अंतःक्रियाओं को समीकरण L + R = LR द्वारा वर्णित किया जा सकता है, जहाँ L मुक्त लिगैंड्स को, R अबद्ध रिसेप्टर्स को और LR बद्ध लिगैंड-रिसेप्टर कॉम्प्लेक्स को दर्शाता है। बंधन अभिक्रियाएँ अंतर-आणविक अंतःक्रियाओं को परिभाषित करती हैं, जहाँ अभिक्रिया के दौरान बद्ध और अबद्ध अवस्थाओं के बीच गतिशील आदान-प्रदान होता है जब तक कि संतुलन प्राप्त नहीं हो जाता। इसे अभिक्रिया के दो दर स्थिरांक, Kon (बंधन दर स्थिरांक) और Koff (वियोजन दर स्थिरांक) द्वारा वर्णित किया जा सकता है। Kd मान, जो बंधन स्थिरांक (Ka) का व्युत्क्रम है, Koff/Kon है, जो अभिक्रिया एफिनिटी के लिए एक महत्वपूर्ण स्थिरांक है। इसलिए, दो अणुओं के बीच बंधन जितना मजबूत होगा, एफिनिटी उतनी ही अधिक होगी। Kd मान जितना कम होगा, एफिनिटी उतनी ही अधिक होगी। इस समीकरण को अर्ध-लघुगणकीय ग्राफ पर एक S-आकार के वक्र के रूप में दर्शाया जा सकता है, जिसमें x-अक्ष (लघुगणकीय पैमाने के अक्ष पर) पर लिगैंड सांद्रता और y-अक्ष पर आंशिक सीमा होती है। बिंदीदार रेखा 0.5 बंधन अंश के Kd (1 nM) पर लिगैंड सांद्रता को दर्शाती है।
आत्मीयता परख
चित्र 1: कोशिका सतह रिसेप्टर से बंधे लिगैंड की विभिन्न सांद्रताओं का सिग्मॉइडल बंधन वक्र। (संदर्भ स्रोत: हंटर एस.ए., कोचरन जे.आर. प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रियाओं की आत्मीयता निर्धारित करने के लिए कोशिका-बंधन परख: प्रौद्योगिकियाँ और विचार।)

आत्मीयता निर्धारित करने की विधियाँ

एलिसा बंधन आत्मीयता परख

एंटीबॉडी एफिनिटी के अध्ययन के लिए व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली तकनीक ELISA विधि पर आधारित है, जो अपनी सुविधा, गति, सरलता, उच्च संवेदनशीलता और मजबूत विशिष्टता के लिए जानी जाती है। इसमें अभिकर्मकों (जैसे एंटीबॉडी और एंटीजन) की कम मात्रा का उपयोग किया जाता है और शुद्धिकरण अभिकर्मकों की आवश्यकता के बिना एंटीबॉडी एफिनिटी को मापा जा सकता है। एंटीजन को एक ठोस सतह पर स्थिर करके और प्राथमिक एंटीबॉडी का उपयोग करके इसका पता लगाकर, लेबल की गई द्वितीयक एंटीबॉडी प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रिया करती है और एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसोरबेंट परख (ELISA) रीडर में डेटा को पढ़ और विश्लेषण करती है।
एलिसा
चित्र 2: लक्षित पेप्टाइडों के बंधन का मूल्यांकन करने के लिए ELISA जैसी परीक्षण विधियाँ। (संदर्भ स्रोत: हाजीकरिमलू, मरियम, एट अल., 2022. एसएआरएस-कोव-2 सतह प्रोटीन एस का पता लगाने वाले पेप्टाइड्स को तेजी से डिजाइन करने के लिए एक कम्प्यूटेशनल दृष्टिकोण।)

सरफेस प्लास्मोन रेजोनेंस (एसपीआर) बंधन आत्मीयता परख

एसपीआर तकनीक मुख्य रूप से अपवर्तनांक में परिवर्तन का पता लगाती है। प्रकाश की पारंपरिक प्रकाशीय घटनाओं और अनुनाद घटना की सहायता से, जैव अणुओं के बीच परस्पर क्रिया का पता लगाने के लिए एक जैव संवेदन विश्लेषण तकनीक विकसित की जा सकती है, जिससे जैव संवेदन चिप्स पर लिगैंड और विश्लेषकों के बीच परस्पर क्रिया का पता लगाया जा सके। जैविक प्रतिक्रियाओं के दौरान एसपीआर कोणों में गतिशील परिवर्तनों की निगरानी करके जैव अणुओं के बीच बंधन और परस्पर क्रिया के विशिष्ट संकेत प्राप्त किए जा सकते हैं।
एसपीआर
चित्र 3: H10/AGR2 बंधन का सतही प्लाज्मा अनुनाद (SPR) विश्लेषण। (संदर्भ स्रोत: गैरी, कैरोलिना, एट अल., 2018. एंटीरियर ग्रेडिएंट होमोलॉग 2 (एजीआर2) के खिलाफ एक नए पेप्टाइड की पहचान, लक्षण वर्णन और अनुप्रयोग।)

बायो लेयर इंटरफेरेंस (बीएलआई) बाइंडिंग एफिनिटी एसे

बायोफिल्म इंटरफेरेंस तकनीक एक लेबल-मुक्त, वास्तविक समय की निगरानी करने वाली ऑप्टिकल पहचान तकनीक है जिसका उपयोग मुख्य रूप से अंतर-आणविक अंतःक्रियाओं के व्यापक मात्रात्मक विश्लेषण और प्रोटीन सांद्रता निर्धारण के लिए किया जाता है। यह तकनीक नमूने पर बायोफिल्म की मोटाई में होने वाले परिवर्तनों का प्रत्यक्ष पता लगाने के लिए एक प्रोब-आधारित बायोसेन्सर का उपयोग करती है। इंटरफेरेंस स्पेक्ट्रम के विस्थापन परिवर्तनों का पता लगाकर, सेंसर सतह पर परस्पर क्रिया करने वाले जैव-आणविकों के बीच बंधन और वियोजन का पता लगाया जाता है, और इंटरफेरेंस स्पेक्ट्रम का वास्तविक समय विस्थापन (nm) प्रदर्शित किया जाता है।
बनना
चित्र 4: aLDRG और चिटिनोलिगोसैकेराइड्स के बीच बायोलियर इंटरफेरोमेट्री (BLI) परख। (संदर्भ स्रोत: ली, बिंग, 2023. कवक सहजीवन में भाग लेने वाले आर्मिलारिया एसपी. 541 के राइजोमॉर्फ और हाइफे के बीच तुलनात्मक ट्रांसक्रिप्टोम की विशेषताएं, लाइसएम डोमेन पर जोर देते हुए।)

बीएलआई और एसपीआर प्रौद्योगिकी की तुलना

प्रौद्योगिकी का नाम बीएलआई (बायो-लेयर इंटरफेरोमेट्री) एसपीआर (सतह प्लाज्मा अनुनाद)
सिद्धांत यह सेंसर की सतह पर परावर्तित प्रकाश के व्यतिकरण पैटर्न में होने वाले परिवर्तनों को मापता है और जैव परत की प्रकाशीय मोटाई में परिवर्तन के माध्यम से आणविक अंतःक्रियाओं का पता लगाता है। यह वास्तविक समय में बंधन वक्र (प्रत्यक्ष माप) प्रदान करता है। यह सेंसर चिप की सतह के पास अपवर्तनांक में होने वाले संकेतों के परिवर्तन का पता लगाकर आणविक अंतःक्रियाओं को मापता है (यह परिवर्तन तब होता है जब प्रकाश सोने और कांच की सतह से टकराता है, जिससे अपवर्तनांक में परिवर्तन होता है)। डेटा को अनुनाद कोण में परिवर्तन के रूप में दर्शाया जाता है (अप्रत्यक्ष माप)।
उत्पादक Sartorius जीई
यंत्र फोर्टेबायो बायोसेन्सर ओपन एसपीआर उपकरण
प्रणाली फोर्टेबायो ऑक्टेट सिस्टम (आणविक अंतःक्रिया विश्लेषण के लिए) ट्रेसड्रॉवर (स्वीडन की रिजव्यू इंस्ट्रूमेंट्स द्वारा विकसित)
लाभ
1. व्यापक नमूना अनुकूलता, उत्कृष्ट स्थिरता, विशेष रूप से छोटे अणुओं का पता लगाने के लिए (नमूने की शुद्धता और बफर स्थितियों के लिए विशिष्ट आवश्यकताएं कम कठोर होती हैं)। एसएसए चिप्स बंधन अध्ययनों के लिए किफायती हैं।
2. एसपीआर की तुलना में तेज़ थ्रूपुट और कम प्रायोगिक समय।
1. लंबा विकास इतिहास, जो बीएलआई की तुलना में उच्च संवेदनशीलता प्रदान करता है।
2. विशिष्ट अनुप्रयोगों के लिए अधिक सटीकता और मजबूती, जैसे कि उच्च आत्मीयता और विशिष्टता डेटा के साथ दुर्लभ या मूल्यवान प्रोटीन का पता लगाना।
नुकसान
1. डेटा की सटीकता एसपीआर की तुलना में थोड़ी कम है।
2. उपकरण के सावधानीपूर्वक रखरखाव की आवश्यकता है।
3. एसएसए चिप की लागत अपेक्षाकृत अधिक है।
1. अत्यंत छोटे अणुओं का पता लगाने के लिए बफर की स्थितियाँ चुनौतीपूर्ण हो सकती हैं, जिससे पता लगाने में विफलता का जोखिम बढ़ जाता है।
2. चिप्स आमतौर पर बीएलआई में उपयोग की जाने वाली चिप्स की तुलना में अधिक महंगी होती हैं।
3. लंबे समय तक चलने वाले प्रयोगों के दौरान नमूने का वाष्पीकरण एक समस्या हो सकती है।
चिप प्रकार एसएसए चिप
एनटीए चिप

आत्मीयता मापन का दायरा

एफिनिटी निर्धारण में एंटीजन-एंटीबॉडी (मजबूत एंटीजन-एंटीबॉडी, कमजोर एंटीजन-एंटीबॉडी), प्रोटीन-प्रोटीन, प्रोटीन-पेप्टाइड, प्रोटीन-लघु अणु और प्रोटीन डीएनए/आरएनए (एप्टामर) शामिल हो सकते हैं। केडी मापते समय, मोलर सांद्रता में से किसी एक का पता होना आवश्यक है। जब लघु अणु बंधते हैं, तो उनका आणविक भार 150 डाल्टन से कम नहीं हो सकता।
प्रकार दायरा सावधानियां
1. प्रतिजन-प्रतिजन 10^-6 से 10^-12 अधिकांश एंटीबॉडी के Kd मान 10^-6-10^-7 से 10^-9 की सीमा में होते हैं। आमतौर पर यह माना जाता है कि उच्च-आत्मीयता वाले एंटीबॉडी 10^-9 के भीतर होते हैं, जबकि कम आत्मीयता वाले एंटीबॉडी 10^-12 के भीतर होते हैं।
2. प्रोटीन - छोटे अणु 10^-4 से 10^-5
छोटे अणुओं और प्रोटीनों का KD 10^-4 और 10^-5 के बीच होता है, जबकि 10^-3 और 10^-7 सामान्य होते हैं और 10^-10 तक नहीं पहुंच सकते।
सहसंयोजक छोटे अणु 10^-10 तक पहुंच सकते हैं।
3. एविडिन-बायोटिन 10^-14 एफिनिटी आसानी से गैर-विशिष्ट बंधन से गुजर सकती है, और स्ट्रेप्टाविडिन या डीग्लाइकोसिलेटेड एफिनिटी का उपयोग किया जा सकता है।
4. डीएनए-प्रोटीन 10^-8 से 10^-10 उच्च गुणवत्ता और संपूर्ण डीएनए; इलेक्ट्रोफोरेसिस के प्रभाव से बचने के लिए सावधानी बरतें।

आत्मीयता निर्धारण के लिए नमूना आवश्यकताएँ

नमूना आवश्यकताएं
1. बड़े अणु का नमूना प्रोटीन > 50 µg, एंटीबॉडी > 100 µg, बायोटिनयुक्त प्रोटीन > 200 µg; बायोटिन रहित प्रोटीन > 2 mg, शुद्धता की आवश्यकता > 90%, बफर घोल: PBS, HEPBS। इसमें इमिडाज़ोल समूह नहीं होने चाहिए; गुणवत्ता नियंत्रण आवश्यक है।
2. छोटे अणु का नमूना
मात्रा > 1 मिलीग्राम, पाउडर या तरल रूप में। तरल पदार्थ पानी या डीएमएसओ में घुलनशील होना चाहिए। इसमें ग्लिसरॉल, इमिडाज़ोल, ट्रेहलोज़ या अन्य लवण नहीं होने चाहिए; बफर में ट्रिस जैसे अमीनो समूह वाले अभिकर्मकों से बचने का प्रयास करें। आमतौर पर पीबीएस, एचईपीपीएस आदि का उपयोग करें, जिनमें कार्बनिक अभिकर्मक न हों।

एफिनिटी मापन प्लेटफॉर्म के लाभ

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एकाधिक नमूना विश्लेषण

अल्फा लाइफटेक एंटीबॉडी, कोशिकाओं, प्रोटीन और अन्य जैव-अणुओं सहित विभिन्न नमूनों के लिए एफिनिटी एसेज़ प्रदान कर सकता है।
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परिपक्व प्रौद्योगिकी प्लेटफार्म

हमारे पास एसपीआर बाइंडिंग एसे, बीएलआई बाइंडिंग एसे और एलिसा बाइंडिंग एसे जैसी उन्नत प्रौद्योगिकियां हैं।
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लचीले प्रोजेक्ट चयन

ग्राहक त्वरित संबंध निर्धारण और सटीक संबंध निर्धारण के बीच चयन कर सकते हैं।
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उच्च परिशुद्धता परिणाम

हमारी पेशेवर तकनीकी टीम कुशल, सटीक और विश्वसनीय संबंध निर्धारण परिणाम सुनिश्चित कर सकती है।

केस स्टडीमामला

बीएलआई रैपिड एफिनिटी एसे एंटीबॉडी और एप्टामर एफिनिटी एसे

SA प्रोब विशिष्टता वाले बायोटिनिलेटेड एप्टामर्स को कैप्चर करें और उन्हें घोलें। नमूने को घोलकर एक निश्चित सांद्रता तक पतला करें, प्रोब-विशिष्ट कैप्चर किए गए टारगेट 1-5 एप्टामर्स को ठोस करें, और सिग्नल संतृप्ति के बाद, उन्हें नमूने से बांधें। फिर उन्हें 96-वेल प्लेट में डालें।
एफिनिटी एसे-अल्फा लाइफटेकबाइंडिंग परख-अल्फा लाइफटेक

चित्र 5: 96-वेल प्लेट नमूनों के लिए पहचान स्थितियों का वितरण। B उस बफर को दर्शाता है जिसका उपयोग सेंसरों के संतुलन और पृथक्करण के लिए किया जाता है। L: बायोटिन लक्ष्य 1-5 एप्टामर, 221: नमूना।
डेटा की स्थिरता और सटीकता सुनिश्चित करने के लिए ड्रिलिंग पर ध्यान दें, और परिणाम प्राप्त करने के लिए संबंधित प्रोग्राम सेट करें:
बीएलआई परिणाम-अल्फा लाइफटेक
चित्र 6: लक्ष्य 1, 2 और 3 एप्टामर और नमूनों के बीच अंतःक्रिया फिटिंग आरेख। (CH 1 \ 3 \ 5 ठोस किए गए लक्ष्य 1 \ 2 \ 3 एप्टामर प्रोब और नमूने के बीच अंतःक्रिया के संकेत और डेटा को दर्शाता है।)
बीएलआई परिणाम 2-अल्फा लाइफटेक
चित्र 7: लक्ष्य 4 और 5 एप्टामर और नमूनों के बीच अंतःक्रिया फिटिंग आरेख। (CH 1 \ 3 ठोस किए गए लक्ष्य 4 \ 5 एप्टामर प्रोब और नमूने के बीच अंतःक्रिया के संकेत और डेटा को दर्शाता है।)

परिणाम दर्शाते हैं

निम्नलिखित परिणाम प्राप्त हुए: फिटिंग के बाद टारगेट 1 एडेप्टर की नमूने के प्रति आत्मीयता 9.41 ^ -8 थी; फिटिंग के बाद टारगेट 2 एडेप्टर की नमूने के प्रति आत्मीयता 8.32 ^ -8 थी; फिटिंग के बाद टारगेट 3 एडेप्टर की नमूने के प्रति आत्मीयता 8.64 ^ -8 थी; फिटिंग के बाद टारगेट 4 एडेप्टर की नमूने के प्रति आत्मीयता 3.70 ^ -8 थी; फिटिंग के बाद टारगेट 5 एडेप्टर की नमूने के प्रति आत्मीयता 3.01 ^ -8 थी।
यदि आपके कोई प्रश्न हों, तो कृपया किसी भी समय हमसे संपर्क करने में संकोच न करें।

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