पशु टीकाकरण मंच

पशु प्रतिरक्षण मंच मुख्य रूप से ऊंट परिवार के जानवरों (अल्पाका, लियामा और ऊंट) का प्रतिरक्षण करता है, जिससे नैनोबॉडी उत्पादन की नींव रखी जाती है।

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पशु टीकाकरण मंच

अल्फा लाइफटेक के पशु स्रोत पूरी तरह से प्रमाणित हैं, जिनके पास निरीक्षण और संगरोध परमिट, स्पष्ट आनुवंशिक पृष्ठभूमि, टीकाकरण की आवृत्ति और टीकाकरण अंतरालों का विस्तृत रिकॉर्ड है, जिससे एंटीबॉडी उत्पादन के लिए सुविधाजनक सेवाएं उपलब्ध होती हैं। यह मुख्य रूप से ऊंट परिवार के पशुओं (अल्पाका, लियमा और ऊंट) का टीकाकरण करता है, जो नैनोबॉडी उत्पादन की नींव रखता है। इसके अतिरिक्त, यह ग्राहकों की आवश्यक टीकाकरण आवृत्ति और प्रतिरक्षाजनकता आवश्यकताओं के अनुसार सामान्य पशुओं (जैसे न्यूजीलैंड के सफेद खरगोश, चूहे और अन्य पशु) का भी टीकाकरण कर सकता है, उन्हें पीबीएमसी में परिवर्तित कर सकता है और उनका उपयोग आगे के प्रयोगों (जैसे मोनोक्लोनल एंटीबॉडी, पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी विकास आदि) के लिए कर सकता है। ग्राहक अपने स्वयं के प्रतिरक्षाजनक प्रदान कर सकते हैं, और हम उन पर सख्त गुणवत्ता नियंत्रण करेंगे। यदि ग्राहक वायरल प्रतिरक्षाजनक प्रदान करते हैं, तो उन्हें निष्क्रिय करना आवश्यक है और हम सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए निष्क्रियता परीक्षण करेंगे। साथ ही, हम ग्राहकों की आवश्यकताओं के अनुसार संबंधित प्रतिरक्षाजनक भी अनुकूलित कर सकते हैं।

पशु टीकाकरण का परिचय

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी, पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी और नैनोबॉडी जैसे पशु-व्युत्पन्न एंटीबॉडी के उत्पादन में, पहला चरण पशुओं को प्रतिरक्षित करना और आगे एंटीबॉडी उत्पादन की तैयारी के लिए संबंधित बी कोशिकाएं, एंटीबॉडी या पीबीएमसी प्राप्त करना है। इससे बुनियादी वैज्ञानिक अनुसंधान को बढ़ावा मिलता है, नैदानिक निदान उपकरण विकसित होते हैं और नई दवाओं की खोज और विकास में सहायता मिलती है। ऊंट, अल्पाका, लियामा और ऊंट परिवार के अन्य ऊंटों से प्रतिरक्षात्मक रक्त संग्रह और पीबीएमसी निष्कर्षण के माध्यम से नैनोबॉडी (एकल डोमेन एंटीबॉडी) लाइब्रेरी का उत्पादन किया जा सकता है। खरगोश और अन्य पशुओं को प्रतिरक्षित करके उनके शरीर से एंटीबॉडी निकाली जा सकती हैं। शुद्धिकरण के बाद, इनका उपयोग पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के उत्पादन के लिए किया जा सकता है। चूहों, चूहों आदि का उपयोग प्रतिरक्षात्मक रूप से निकाली गई बी कोशिकाओं को मायलोमा कोशिकाओं के साथ संलयन करके मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के उत्पादन के लिए किया जा सकता है। प्रतिरक्षण से पहले, 3R सिद्धांतों (प्रतिस्थापन, कमी, परिशोधन) पर ध्यान देना चाहिए, जिससे उपयोग किए जाने वाले पशुओं की संख्या को आवश्यक न्यूनतम तक कम किया जा सकता है, प्रायोगिक प्रक्रियाओं में सुधार किया जा सकता है और पशुओं की पीड़ा को कम किया जा सकता है। उचित प्रायोगिक डिजाइन, उपयुक्त एंटीबॉडी का चयन और सख्त सत्यापन प्रक्रियाओं का भी पालन किया जाना चाहिए।

इम्युनोजेन का वर्गीकरण - नैनोबॉडी उत्पादन

प्रतिरक्षाजनकों के प्रकार	उदाहरण	इम्यूनोजेन तैयारी	नोट्स
प्रोटीन इम्यूनोजेन	एंजाइम, प्रोटीन, जीवाणु विष और अन्य पदार्थ	विभिन्न प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणालियों का चयन करें: ई. कोलाई, यीस्ट, कीट कोशिकाएं, स्तनधारी कोशिकाएं और कोशिका-मुक्त प्रणाली	तापमान, समय, पीएच और समावेशन निकायों जैसे कारकों पर ध्यान दें जो प्रोटीन अभिव्यक्ति को प्रभावित करते हैं।
न्यूक्लिक एसिड इम्यूनोजेन्स	डीएनए, आरएनए	डीएनए इम्यूनोजेन: प्लास्मिड डीएनए का निर्माण करें, लक्षित जीनों के लिए उपयुक्त अभिव्यक्ति वैक्टर को क्लोन करें, प्लास्मिड डीएनए को बढ़ाने के लिए कोशिकाओं को कल्चर करें और उच्च शुद्धता वाले प्लास्मिड डीएनए को निकालें। आरएनए इम्यूनोजेन: क्षरण को रोकने के लिए हैट संरचना और पॉलीए टेल जोड़ना आवश्यक है	डीएनए इम्युनोजेन तैयार करते समय, उपयुक्त मेजबान कोशिकाओं पर ध्यान देना चाहिए, और आरएनए इम्युनोजेन तैयार करते समय, आरएनए के क्षरण को रोकने पर ध्यान देना चाहिए।
वायरल इम्यूनोजेन	संपूर्ण वायरस निष्क्रिय टीका, सबयूनिट टीका, वायरल वेक्टर टीका (एडेनोवायरस, लेंटिविरस, आदि), mRAN टीका।	संपूर्ण वायरस निष्क्रिय वैक्सीन तैयार करते समय, सुरक्षा बढ़ाने के लिए वायरस को पहले निष्क्रिय किया जाता है। निष्क्रियता पूर्ण हुई है या नहीं, यह निर्धारित करने के लिए विषाक्तता परीक्षण किया जाता है। सबयूनिट वैक्सीन में केवल वायरस की सतह पर मौजूद प्रोटीन को ही प्रतिजन के रूप में आवश्यक होता है और प्रतिरक्षा प्रभावशीलता को ध्यान में रखना पड़ता है।	प्रतिरक्षात्मक प्रभाव प्रदान करने के लिए सहायक पदार्थों को मिलाना आवश्यक है, निष्क्रिय किए जाने वाले वायरस पर ध्यान दिया जाना चाहिए, प्रतिरक्षात्मक प्रभाव सुनिश्चित करने के लिए उपयुक्त वायरस टाइटर्स की आवश्यकता होती है, और तैयारी प्रक्रिया की सुरक्षा को सख्ती से नियंत्रित किया जाना चाहिए।

पशुओं के टीकाकरण की प्रक्रिया या समयरेखा

पशु चयन और प्रतिजन तैयारी

पशुओं का चयन: स्वस्थ समूहों से सही उम्र और स्वस्थ शारीरिक बनावट वाले अल्पाका का चयन करें, और यह सुनिश्चित करने के लिए रक्त परीक्षण और रोग जांच करें कि उनमें कोई संक्रामक रोग या अन्य स्वास्थ्य समस्याएं न हों।

इम्यूनोजेन की तैयारी: प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करने में इम्यूनोजेन महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं और इसके लिए लक्षित एंटीबॉडी की आवश्यकताओं के आधार पर उपयुक्त प्रोटीन, पेप्टाइड या अन्य उपयुक्त पदार्थों का चयन आवश्यक होता है।

अल्पाका को एक साथ 1-3 प्रतिजनों से प्रतिरक्षित किया जा सकता है, जिसमें प्रति टीकाकरण कुल प्रतिजन की मात्रा 1-2 मिलीग्राम और आयतन 2 मिलीलीटर से कम होता है। टीकाकरण से पहले, प्रतिजन और सहायक पदार्थ को 1:1 के अनुपात में पायसीकृत करके एक समान मिश्रण बनाया जाता है, जिसे 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित किया जाता है।

प्रतिरक्षात्मक अल्पाका

अल्पाका के कान का खाली नंबर नोट करें और टीकाकरण प्रयोग शुरू करें। अल्पाका की गर्दन के पास दोनों तरफ स्थित लसीका ग्रंथियों में इंजेक्शन लगाएं, प्रत्येक तरफ 2 बिंदु हों और प्रत्येक बिंदु पर लगभग 0.4 मिलीलीटर पायसीकृत एंटीजन इंजेक्ट करें। टीकाकरण के बाद, आधे घंटे तक निगरानी करें ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि अल्पाका को कोई असुविधा न हो। टीकाकरण हर 2 सप्ताह में कम से कम 4 बार किया जाना चाहिए।

रक्त संग्रह

5-7 दिनों के अंतराल पर 4 बार टीकाकरण करने के बाद, अल्पाका की गर्दन की नस से 50 मिलीलीटर रक्त एकत्र करें।

सीरम पृथक्करण

प्रत्येक एंटीजन टीकाकरण से पहले प्रतिरक्षा मूल्यांकन के लिए रक्त के नमूने एकत्र किए जाते हैं, प्रत्येक बार 5 मिलीलीटर रक्त लिया जाता है; उसी दिन, रक्त को 25 डिग्री सेल्सियस पर पहले से ठंडा किए गए सेंट्रीफ्यूज का उपयोग करके 400 xg पर 30 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। सीरम की ऊपरी परत को अलग करके बाद में एंटीबॉडी टाइटर परीक्षण के लिए संग्रहीत किया जाता है।

अलग लिम्फोसाइट

सबसे पहले 15 मिलीलीटर सेल पृथक्करण विलयन डालें, फिर धीरे-धीरे 15 मिलीलीटर रक्त को 50 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में डालें। रक्त और पृथक्करण विलयन के मिश्रण को रोकने के लिए रक्त डालते समय सावधानी बरतें और धीरे-धीरे डालें। 25°C पर पहले से ठंडा किए गए सेंट्रीफ्यूज में 400 xg पर 30 मिनट तक सेंट्रीफ्यूज करें, और ऊपरी सीरम को एक नई सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में -80°C पर संग्रहित करें; एक पिपेट का उपयोग करके रुई के आकार की मध्य परत की प्रतिरक्षा कोशिकाओं को एक नई 50 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में निकालें। प्रत्येक ट्यूब में कमरे के तापमान पर 10 मिलीलीटर पीबीएस बफर डालें, 25°C पर 400 xg पर 20 मिनट तक सेंट्रीफ्यूज करें। सुपरनैटेंट को हटा दें, प्रत्येक ट्यूब में कमरे के तापमान पर 5 मिलीलीटर पीबीएस बफर डालें, धीरे से अच्छी तरह मिलाएं, हीमोसाइटोमीटर का उपयोग करके कोशिकाओं की संख्या की गणना करें, और फिर 25°C पर 400 xg पर 20 मिनट तक सेंट्रीफ्यूज करें। सुपरनेटेंट को हटा दें और आरएनएआइसो प्लस द्वारा प्राप्त लिम्फोसाइट्स को कोशिकाओं की संख्या के आधार पर घोलकर 10^7/एमएल सेल लाइसैट प्राप्त करें, जिसे -80 ℃ पर संग्रहित किया जाता है।

चित्र 1: विभिन्न एंटीबॉडी खोज रणनीतियों और उनमें शामिल प्रायोगिक चरणों का योजनाबद्ध निरूपण। (चित्र स्रोत: लॉस्टसेन, एंड्रियास एच. एट अल.)

ग्राहक प्रतिरक्षा कारक उपलब्ध कराते हैं - सख्त गुणवत्ता नियंत्रण

प्रतिरक्षाजनकों के प्रकार	मांग	गुणवत्ता नियंत्रण विधि
पेप्टाइड / छोटे अणु के नमूने	विघटन की स्थितियाँ (मुख्यतः इस बात पर निर्भर करती हैं कि क्या वे फ़ेज को निष्क्रिय कर देंगे), आणविक संरचना/पेप्टाइड अनुक्रम, संश्लेषण रिपोर्ट (HPLC/MS/HNMR)	एचपीएलसी/एमएस पहचान
प्रोटीन के नमूने	एसडीएस-पेज/डब्ल्यूबी, पुनर्गठन की शर्तें, बफर, लेबल जानकारी, कुल मात्रा (20-50 मिलीग्राम), सांद्रता, शुद्धता, आदि।	एसडीएस-पेज/डब्ल्यूबी
कोशिका के नमूने	कोशिका का प्रकार (प्राथमिक कोशिकाएँ/जीन संशोधित कोशिकाएँ), कोशिका का स्वरूप (ताज़ा/जमे हुए पिघले हुए), वृद्धि का प्रकार (आसंजक/निलंबित), संवर्धन माध्यम की आवश्यकताएँ, प्रदान की गई कोशिकाओं की संख्या, स्क्रीनिंग लक्ष्यों की स्थिर अभिव्यक्ति सुनिश्चित करने के लिए जीन संशोधित कोशिकाएँ (ग्राहक के अनुरूप प्राथमिक एंटीबॉडी), पुनर्प्राप्ति दर निर्धारित करने के लिए जमे हुए पिघले हुए कोशिकाएँ।	मुख्य रूप से जीन-संपादित कोशिकाओं को लक्षित करते हुए, ग्राहक द्वारा आपूर्ति किए गए प्राथमिक एंटीबॉडी का उपयोग करके लक्ष्य अभिव्यक्ति की ELISA पहचान (हमारी कंपनी HRP सेकेंडरी एंटीबॉडी प्रदान करती है) और फ्लो साइटोमेट्री डिटेक्शन (हमारी कंपनी फ्लोरोसेंट सेकेंडरी एंटीबॉडी प्रदान कर सकती है) के लिए किया जाता है।

पशु प्रतिरक्षा के अनुप्रयोग क्या हैं?

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पशुओं के टीकाकरण द्वारा पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी का उत्पादन किया जा सकता है, बी कोशिकाओं को मायलोमा कोशिकाओं के साथ फ्यूज करके मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उत्पादन किया जा सकता है, और विभिन्न एंटीबॉडी खंड रूपों जैसे नैनोबॉडी, फैब खंड, एससीएफवी एंटीबॉडी खंड आदि का उत्पादन करने के लिए ऊंट स्रोतों (अल्पाका, ऊंट, अल्पाका, आदि) से पीबीएमसी को निकाला जा सकता है।
पशुओं की रोग प्रतिरोधक क्षमता बढ़ाने के लिए क्या सावधानियां बरतनी चाहिए?

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ऊंट से प्राप्त पशुओं में नैनोएंटीबॉडी उत्पन्न करने के लिए 5-6 बार टीकाकरण करना आवश्यक है। टीकाकरण से पहले नियंत्रण के रूप में रक्त के नमूने एकत्र किए जाने चाहिए, प्रत्येक टीकाकरण के बीच 2 सप्ताह का अंतराल होना चाहिए। चौथे टीकाकरण के बाद, सकारात्मक रक्त और गैर-प्रतिरक्षित नकारात्मक रक्त को ELISA परीक्षण के लिए एकत्र किया जाना चाहिए ताकि टाइटर का निर्धारण किया जा सके। यदि टाइटर 10^6 से कम है, तो टीकाकरण की संख्या तब तक बढ़ाई जानी चाहिए जब तक कि टाइटर उचित स्तर तक न पहुंच जाए। अन्य पशु टीकाकरणों जैसे खरगोश टीकाकरण (खरगोश टीकाकरण के लिए इष्टतम या सामान्य प्रोटीन एंटीजन स्तर 50-1000 मिलीग्राम है), चूहे टीकाकरण (चूहे टीकाकरण के लिए इष्टतम या सामान्य प्रोटीन एंटीजन स्तर 5-50 मिलीग्राम है, जिसके लिए कोशिका होने पर 10^6 कोशिकाओं की आवश्यकता होती है, और न्यूक्लिक एसिड या कार्बोहाइड्रेट के लिए 10-50 मिलीग्राम की आवश्यकता होती है), बकरी टीकाकरण (बकरी टीकाकरण के लिए इष्टतम या सामान्य प्रोटीन एंटीजन स्तर 250-5000 मिलीग्राम है), आदि के लिए, प्रतिरक्षाजनकों की खुराक, सुरक्षा और प्रभावकारिता पर ध्यान दिया जाना चाहिए।
रोग प्रतिरोधक क्षमता वाले जानवरों का चयन कैसे करें?

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ग्राहक की आवश्यकतानुसार एंटीबॉडी के प्रकार के आधार पर, यदि आपको नैनोबॉडी या अन्य एंटीबॉडी अंशों का उत्पादन करना है, तो आप टीकाकरण के लिए ऊंट से प्राप्त जानवरों (ऊंट, अल्पाका) का चयन कर सकते हैं। यदि आपको मोनोक्लोनल या पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी का उत्पादन करना है, तो आपको सीरम, एंटीजन और एंटीजन स्रोत की मात्रा के आधार पर संबंधित प्रजाति का चयन करना होगा। खरगोशों के लिए अधिकतम सीरम की मात्रा 500 मिलीलीटर है, जिसके लिए कम मात्रा में एंटीजन की आवश्यकता होती है और यह पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के उत्पादन के लिए प्राथमिक विकल्प है। चूहों के लिए अधिकतम सीरम की मात्रा 2 मिलीलीटर है, और चूहों के लिए अधिकतम सीरम की मात्रा 20 मिलीलीटर है, जो आमतौर पर मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के लिए सर्वोत्तम विकल्प है। बकरियों द्वारा उत्पादित एंटीबॉडी में उच्च आत्मीयता होती है, और अल्फा लाइफटेक आपकी आवश्यकताओं के अनुसार आपके लिए एक विशेष टीकाकरण योजना तैयार कर सकता है।
क्या एंटीजन को एडज्यूवेंट के साथ प्रयोग करना आवश्यक है? इनका चुनाव कैसे करें?

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सहायक पदार्थ दो प्रकार के होते हैं: तेल आधारित और जल आधारित। घुलनशील प्रतिजनों के प्रति प्रबल एंटीबॉडी प्रतिक्रिया उत्पन्न करने के लिए सहायक पदार्थों का उचित उपयोग अत्यंत महत्वपूर्ण है। सहायक पदार्थों के निरंतर स्राव से प्रतिजनों की कम खुराक का उपयोग किया जा सकता है, और एंटीबॉडी प्रतिक्रियाएँ अधिक समय तक बनी रहती हैं। पहला इंजेक्शन सहायक पदार्थ के साथ मिलाकर दिया जाना चाहिए। आमतौर पर, प्रतिरक्षाजनक की मात्रा कम होने पर फ्रायंड के सहायक पदार्थ का उपयोग करने की सलाह दी जाती है।
अल्पाका के टीकाकरण के लिए क्या सावधानियां बरतनी चाहिए?

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(1) अल्पाका का चयन और प्रतिरक्षा के लिए आवश्यक प्रतिजन सफल प्रतिरक्षण की कुंजी हैं। सुगठित ऊंट का चयन उचित नहीं है। अल्पाका से प्रतिरक्षण के बाद उपयुक्त एंटीबॉडी की स्क्रीनिंग के लिए प्रतिरक्षा प्रतिजनों की शुद्धता और सही संरचना महत्वपूर्ण है। प्रोटीन प्रतिजनों की शुद्धता सामान्यतः 90% से कम नहीं होती है।

(2) लिम्फोसाइटों का पृथक्करण: समय पर कोशिका पृथक्करण रक्त संग्रह के बाद हेमोलिसिस को प्रभावी ढंग से रोक सकता है ताकि सर्वोत्तम पृथक्करण प्रभाव प्राप्त किया जा सके।

(3) प्रतिरक्षा चक्र प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को प्रभावित कर सकता है: 1-2 सप्ताह का प्रतिरक्षा अंतराल अल्पाका को अधिकांश प्रतिजनों के प्रति अच्छी प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया देने की अनुमति देता है।

स्वतंत्र रूप से विकसित सहायक

हमारे अद्वितीय फॉर्मूला एडजुवेंट को अल्पाका की प्रतिरक्षा प्रणाली के लिए अनुकूलित किया गया है, जो पारंपरिक एडजुवेंट्स की तुलना में उच्च क्षमता और विशिष्टता प्रदान करता है।

टीकाकरण वितरण
मानक

हम निर्धारित समय के भीतर टीकाकरण पूरा करने, उच्च गुणवत्ता वाला सीरम प्रदान करने और विस्तृत रिपोर्ट के माध्यम से प्रत्येक चरण को दर्ज करने का वादा करते हैं।

परियोजना गुणवत्ता नियंत्रण

प्रत्येक परियोजना सख्त गुणवत्ता नियंत्रण प्रक्रियाओं से गुजरती है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि ग्राहकों को उच्च मानकों को पूरा करने वाली एंटीबॉडी की आपूर्ति की जाए।

स्पष्ट रूप सेअल्पाकापृष्ठभूमि

हमारे पास अल्पाका की एक स्वस्थ आबादी है जो विभिन्न टीकाकरण कार्यक्रमों के लिए सहायता प्रदान करती है।

यदि आपके कोई प्रश्न हों, तो कृपया किसी भी समय हमसे संपर्क करने में संकोच न करें।

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