एंटीबॉडी एफिनिटी मैचुरेशन सर्विस

अल्फा लाइफटेक इंक.हम उत्परिवर्तन और चयन तकनीकों का उपयोग करके एंटीबॉडी एफिनिटी मैचुरेशन सेवा प्रदान कर सकते हैं। एफिनिटी मैचुरेशन सेवा की प्रक्रियाओं में हम आमतौर पर scFv को एंटीबॉडी प्रारूप के रूप में उपयोग करते हैं और एक मोनोवैलेंट डिस्प्ले फागेमिड सिस्टम का उपयोग करते हैं, जिसका उपयोग एंटीजन-बाइंडिंग स्क्रीनिंग के दौरान एवीडिटी प्रभावों को कम करने के लिए किया जाता है। हमारी पेशेवर टीम सिंगल-डोमेन एंटीबॉडी के लिए भी एफिनिटी मैचुरेशन सेवाएं प्रदान कर सकती है।

अल्फा लाइफटेक इंक.हम वैश्विक ग्राहकों की विविध आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए व्यापक सेवाएं प्रदान करने पर गर्व महसूस करते हैं। हमारा उद्देश्य विभिन्न ग्राहकों की मांगों को समझना और उन्हें पूरा करना तथा अनुसंधान कार्य में आने वाली किसी भी समस्या में सहायता करना है।

एफिनिटी मैचुरेशन क्या है?

एफिनिटी मैचुरेशन वह प्रक्रिया है जिसके द्वारा एंटीबॉडी विशिष्ट एंटीजन के प्रति अपनी एफिनिटी बढ़ाने के लिए बार-बार उत्परिवर्तन और चयन से गुजरती हैं। मुख्य रूप से द्वितीयक लिम्फोइड अंगों के जर्मिनल सेंटर में होने वाली इस प्रक्रिया में, बी कोशिकाएं टी कोशिकाओं और फॉलिक्युलर डेंड्रिटिक कोशिकाओं के प्रभाव में सोमैटिक हाइपरम्यूटेशन और चयन से गुजरती हैं।
एफिनिटी मैचुरेशन प्रक्रिया के दौरान, कम एफिनिटी वाले सतही इम्युनोग्लोबुलिन रिसेप्टर्स वाली बी कोशिकाएं एंटीजन के संपर्क में आने से सक्रिय हो जाती हैं और उनमें प्रसार और विभेदन होता है। सोमैटिक हाइपरम्यूटेशन एफिनिटी मैचुरेशन के माध्यम से, इम्युनोग्लोबुलिन जीन के वेरिएबल क्षेत्र में यादृच्छिक न्यूक्लियोटाइड प्रतिस्थापन होते हैं, जिससे विभिन्न एंटीबॉडी वेरिएंट का उत्पादन होता है। सोमैटिक हाइपरम्यूटेशन के बाद, उत्परिवर्तित इम्युनोग्लोबुलिन रिसेप्टर्स वाली बी कोशिकाओं पर एंटीजन-प्रेरित चयन किया जाता है। बढ़ी हुई एंटीजेनिक एफिनिटी वाली एंटीबॉडी का उत्पादन करने वाली बी कोशिकाओं को प्राथमिकता से रखा जाता है और उन्हें प्रसार करने की अनुमति दी जाती है, जबकि कम या अपरिवर्तित एफिनिटी वाली बी कोशिकाएं एपोप्टोसिस से गुजरती हैं। उत्परिवर्तन और चयन की यह पुनरावृत्ति प्रक्रिया बी कोशिका क्लोन के उत्पादन की ओर ले जाती है, जो एंटीजन के लिए उत्तरोत्तर उच्च एफिनिटी वाली एंटीबॉडी का उत्पादन करती हैं।

एंटीबॉडी एफिनिटी मैचुरेशन सर्विस

पीसीआर-आधारित विधियों के मुख्य लाभ यह हैं कि उत्परिवर्तन को प्रवर्धित खंड पर सटीक रूप से लक्षित किया जाता है; त्रुटि दर को नियंत्रित करना आसान है और यह विधि त्वरित और स्थापित करने में आसान है तथा इसमें किसी भी प्रकार के हानिकारक रसायनों का उपयोग नहीं होता है। यह सर्वविदित है कि टैग डीएनए पॉलीमरेज़ डीएनए की प्रतिकृति कम सटीकता के साथ करता है, जिसका मुख्य कारण 3' से 5' दिशा में प्रूफरीडिंग गतिविधि का अभाव है।अल्फा लाइफटेक काएंटीबॉडी इंजीनियरिंग प्लेटफॉर्म सब-लाइब्रेरी निर्माण के दौरान मुख्य रूप से CDR क्षेत्रों में उत्परिवर्तन करने के लिए त्रुटि-प्रवण PCR विधि का उपयोग करता है। सब-लाइब्रेरी की आनुवंशिक विविधता बढ़ाने के लिए, हम अक्सर संपूर्ण VH और VL खंडों में पूरी तरह से यादृच्छिक स्थानों पर उत्परिवर्तन उत्पन्न करते हैं। त्रुटि-प्रवण PCR द्वारा उत्परिवर्तित एंटीबॉडी जीन लाइब्रेरी के निर्माण के बाद, उच्च-आत्मीयता वाले वेरिएंट (scFv एंटीबॉडी की आत्मीयता 10^8 - 10^10 M तक पहुँच सकती है) का चयन या तो विलयन में पैनिंग द्वारा या ऑफ-रेट-निर्भर चयन के लिए अनुकूलित धुलाई स्थितियों के साथ स्थिर प्रतिजन पर किया जाता है।
  
वैज्ञानिकों नेअल्फा लाइफटेक इंक.यादृच्छिक उत्परिवर्तन उत्पन्न करने के लिए कई उत्परिवर्तन रणनीतियों में से एक के रूप में एस्चेरिचिया कोलाई म्यूटेटर स्ट्रेन mutAD5TM का उपयोग किया जाता है, जिससे पुनर्योजित एंटीबॉडी खंडों की आत्मीयता और अभिव्यक्ति को संशोधित किया जा सके। उच्च उत्पादन स्तर वाले एंटीबॉडी खंडों के लिए चयन स्थितियों को संशोधित किया जा सकता है। एस्चेरिचिया कोलाई म्यूटेटर कोशिकाओं में वृद्धि की स्थितियों को डीएनए के प्रति किलोबेस में एक यादृच्छिक बिंदु उत्परिवर्तन उत्पन्न करने के लिए समायोजित किया जा सकता है, जो लगभग scFv खंड प्रति एक कोडन परिवर्तन के बराबर है। उत्परिवर्तन, प्रदर्शन और चयन के कई चक्रों के बाद, हम आत्मीयता स्थिरांक को 10^5 - 10^6 M से 10^8 - 10^10 M तक बढ़ा सकते हैं।

एफिनिटी मैचुरेशन रणनीतियों में सुधार करें

एंटीबॉडी की कुछ निश्चित स्थितियों को एक निश्चित विविधता पर यादृच्छिक किया जा सकता है (जैसे कि सभी 20 अमीनो एसिड के साथ पूर्ण यादृच्छिकीकरण या निश्चित प्रतिशत पर चयनित अमीनो एसिड के साथ पक्षपाती यादृच्छिकीकरण) ताकि उनकी आत्मीयता में सुधार हो सके। एंटीबॉडी की आत्मीयता में सुधार के लिए हमारे पास दो रणनीतियाँ हैं: पहली, साइट-डायरेक्टेड म्यूटाजेनेसिस द्वारा कॉम्प्लीमेंटेरिटी-डिटरमाइनिंग रीजन्स (सीडीआर) में सीमित स्थानों पर उत्परिवर्तन किए जाते हैं; दूसरी, रैंडम म्यूटाजेनेसिस द्वारा संपूर्ण वी-कोडिंग क्षेत्रों में उत्परिवर्तन किए जाते हैं। इन दोनों विधियों का उपयोग करके, एंटीबॉडी के संरक्षित अमीनो-एसिड अनुक्रमों या संपूर्ण फ्रेमवर्क क्षेत्र को अन्य अमीनो एसिड द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है, जो हमारी पेप्टाइड लाइब्रेरी स्कैनिंग तकनीकों के साथ मिलकर, रुचि के एंटीबॉडी की आत्मीयता को अत्यधिक उच्च स्तर तक बढ़ा सकता है।

फेज डिस्प्ले-एंटीबॉडी एफिनिटी

scFv उत्परिवर्ती पुस्तकालय के निर्माण के बाद, दो स्क्रीनिंग रणनीतियाँ उपलब्ध हैं: बायोपैनिंग और ठोस-प्रतिजन छँटाई। पहली रणनीति में, उच्च-आत्मीयता वाले एंटीबॉडी को अलग करने के लिए सब्सट्रेट की अवक्षेपण सांद्रता का उपयोग किया जाता है, क्योंकि कम-आत्मीयता वाले उत्परिवर्ती धुल जाते हैं, जिससे उच्च-आत्मीयता वाले फ़ेज कण शेष रह जाते हैं। दूसरी रणनीति में विलयन में एक लेबलयुक्त प्रतिजन का उपयोग किया जाता है, संतुलन स्थिरांक (Kd) के आधार पर चयन किया जाता है, और बंधन गतिकी के आधार पर चयन किया जाता है। यह चयन विधि बेहतर Kd वाले एंटीबॉडी वेरिएंट को अलग करती है।

यदि आपके कोई प्रश्न हों, तो कृपया किसी भी समय हमसे संपर्क करने में संकोच न करें।