फेज डिस्प्ले तकनीक का उद्देश्य फेज कैप्सिड प्रोटीन के विशिष्ट स्थान पर विदेशी लक्ष्य जीन को प्रविष्ट कराना और फेज के सामान्य कार्य को प्रभावित किए बिना, फेज की सतह पर विदेशी जीन को अभिव्यक्त करना है। कई दौर की स्क्रीनिंग के बाद, अंततः प्रबल विशिष्टता और उच्च जैविक गतिविधि वाला लक्ष्य प्रोटीन प्राप्त किया गया।

इस तकनीक का उपयोग करके उच्च क्षमता वाले एंटीबॉडी लाइब्रेरी तैयार किए जा सकते हैं। स्क्रीनिंग चक्र संक्षिप्त है, संचालन प्रक्रिया सरल है, और अनुप्रयोगों की सीमा व्यापक है, जिससे लक्षित पेप्टाइड्स या प्रोटीन के लिए इष्टतम अनुक्रमों की पहचान संभव हो पाती है। वायरस-संबंधी अनुप्रयोगों में, शोधकर्ता बड़े एंटीबॉडी लाइब्रेरी की स्क्रीनिंग करके ऐसे एंटीबॉडी खोज सकते हैं जो महत्वपूर्ण वायरल एपिटोप्स से जुड़ते हैं। यह प्रक्रिया वायरस के प्रवेश, प्रतिकृतिकरण या प्रतिरक्षा से बचने के तंत्र को बाधित कर सकती है, जिससे रोग उपचार का आधार तैयार होता है।

फेज डिस्प्ले तकनीक का उपयोग हाइब्रिडोमा तकनीक की तुलना में अधिक व्यापक रूप से किया जाता है, जो विशिष्ट प्रतिरक्षाजनों के विरुद्ध एंटीबॉडी की एक छोटी मात्रा के उत्पादन तक सीमित है। इसके विपरीत, फेज डिस्प्ले तकनीक विभिन्न प्रतिरक्षा प्रजातियों से प्राप्त एंटीबॉडी का एक संपूर्ण संग्रह प्रस्तुत कर सकती है।

फेज डिस्प्ले प्रौद्योगिकी के अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला है, जिसमें रोगजनक सूक्ष्मजीवों के रिसेप्टर्स की जांच, प्रोटीन इंटरैक्शन का अध्ययन, कोशिकाओं के बीच सिग्नल ट्रांसमिशन को ट्रैक करना, पशु रोगों का निदान करना और अन्य क्षेत्रों के अलावा टीके विकसित करना शामिल है।

फेज डिस्प्ले तकनीक कई फायदे प्रदान करती है और इसे विभिन्न क्षेत्रों में लागू किया जा सकता है। हालाँकि, फेज डिस्प्ले विधि का उपयोग करके पुनः संयोजक एंटीबॉडी विकसित करने में मुख्य चुनौती इस प्रक्रिया से जुड़ी जटिलता और लागत है। इस दृष्टिकोण के लिए वांछित एंटीबॉडी की पहचान और विशेषताएँ निर्धारित करने हेतु उत्परिवर्तन, क्लोनिंग और अभिव्यक्ति सहित आणविक जीव विज्ञान तकनीकों के साथ-साथ प्रतिरक्षाविज्ञानी, जैवरासायनिक और जैवभौतिक विश्लेषणों का एकीकरण आवश्यक है।

प्रतिजन प्रस्तुतीकरण एक अत्यंत महत्वपूर्ण कड़ी है। प्रतिजन प्रस्तुतीकरण की विधियों में मुख्यतः प्रत्यक्ष लेपित प्रतिजन प्रस्तुतीकरण, अप्रत्यक्ष लेपित प्रतिजन प्रस्तुतीकरण, संपूर्ण कोशिका स्क्रीनिंग द्वारा प्रतिजन प्रस्तुतीकरण, लिपोसोम, नैनो-फॉस्फोलिपिड डिस्क और वीएलपी द्वारा प्रतिजन प्रस्तुतीकरण शामिल हैं।

प्रत्यक्ष लेप विधि अपेक्षाकृत सरल है, लेकिन प्रतिजन संरचना को बदलना आसान है, जबकि अप्रत्यक्ष लेप प्रक्रिया जटिल है, लेकिन यह प्रतिजन संरचना को बनाए रख सकती है और प्रस्तुति दक्षता में सुधार कर सकती है। कोशिका स्क्रीनिंग विवो में वास्तविक दृश्य का अनुकरण कर सकती है, लेकिन इसमें अविशिष्ट बंधन की समस्या है। नैनो-फॉस्फोलिपिड डिस्क का आकार छोटा, वितरण दक्षता उच्च और स्थिरता अच्छी होती है; वीएलपी को प्रतिजन के साथ संलयित या प्रतिजन के साथ लपेटा जाता है, जिसमें उच्च प्रतिरक्षाजनकता और अच्छी सुरक्षा होती है, और यह एक मजबूत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को ट्रिगर कर सकता है।

यदि सांद्रता बहुत कम है, तो फेज के साथ बंधन की संभावना कम हो जाएगी, जिसके परिणामस्वरूप स्क्रीनिंग दक्षता कम हो जाएगी। इसके विपरीत, अत्यधिक उच्च सांद्रता अविशिष्ट बंधन की संभावना को बढ़ा सकती है, पृष्ठभूमि संकेत को बढ़ा सकती है, और सकारात्मक क्लोनों की पहचान में बाधा डाल सकती है।

उच्च तापमान, तीव्र अम्ल और क्षार से बचने के लिए सौम्य स्थिरीकरण विधि अपनाई जा सकती है। प्रतिजन संरचना को होने वाले नुकसान को कम करने के लिए अप्रत्यक्ष लेप विधि और बायोटिन-स्ट्रेप्टाविडिन प्रणाली का उपयोग किया गया। यदि प्रतिजन एक झिल्ली प्रोटीन है, तो इसे अक्षुण्ण कोशिकाओं की सतह पर प्रदर्शित किया जा सकता है या इसकी प्राकृतिक झिल्ली प्रोटीन संरचना को बनाए रखने के लिए नैनो-डिस्क जैसे झिल्ली वातावरण का अनुकरण करने के लिए उपयोग किया जा सकता है।

एलिसा, वेस्टर्न ब्लॉटिंग (डब्ल्यूबी) और इम्यूनोफ्लोरेसेंस (आईएफ) जैसे नियमित प्रयोगों के अलावा, सरफेस प्लास्मोन रेजोनेंस (एसपीआर) और बायो-लेयर इंटरफेरोमेट्री (बीएलआई) डिटेक्शन तकनीकों को एंटीबॉडी और एंटीजन के बंधन और पृथक्करण प्रक्रियाओं की वास्तविक समय में निगरानी करने के लिए नियोजित किया जा सकता है, जिससे आत्मीयता और गतिज मापदंडों का निर्धारण संभव हो जाता है।

फेज डिस्प्ले का उपयोग एंटीबॉडी उत्पादक प्रजातियों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए उच्च-आत्मीयता मोनोक्लोनल एंटीबॉडी उत्पन्न करने के लिए किया जा सकता है, जिसमें मानव, चूहे, खरगोश, मुर्गियां, ऊंट, अल्पाका, गाय, कुत्ते, भेड़, बंदर और शार्क शामिल हैं, लेकिन इन्हीं तक सीमित नहीं हैं।

माउस एंटीबॉडी लाइब्रेरी की निर्माण तकनीक सुस्थापित, लागत-प्रभावी और कम प्रयोगात्मक अवधि वाली है, जो इसे प्रारंभिक एंटीबॉडी स्क्रीनिंग और बुनियादी अनुसंधान के लिए उपयुक्त बनाती है। खरगोश एंटीबॉडी में माउस एंटीबॉडी की तुलना में व्यापक एपिटोप पहचान रेंज के साथ, मजबूत आत्मीयता और विशिष्टता प्रदर्शित होती है। मानव एंटीबॉडी को सीधे मानव एंटीबॉडी लाइब्रेरी से प्राप्त किया जा सकता है, जिससे संभावित प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं से बचा जा सकता है जो मानव शरीर में विषम एंटीबॉडी के प्रशासन के दौरान हो सकती हैं। यह दृष्टिकोण दवा अनुसंधान और विकास में, विशेष रूप से चिकित्सीय एंटीबॉडी के निर्माण में, महत्वपूर्ण महत्व रखता है।

पशु प्रतिरक्षाजनों को आम तौर पर प्रोटीन एंटीजन, पॉलीपेप्टाइड एंटीजन, न्यूक्लिक एसिड एंटीजन और रोगजनक-संबंधित एंटीजन में विभाजित किया जाता है, जिनमें से रोगजनक-संबंधित एंटीजन में वायरस एंटीजन (पूर्ण वायरस कण, वायरस प्रोटीन, वायरस गैर-संरचनात्मक प्रोटीन, आदि), जीवाणु एंटीजन (पूर्ण जीवाणु अर्क, कोशिका दीवार घटक, स्रावित प्रोटीन, विष, आदि) और परजीवी एंटीजन शामिल हैं।

प्रतिरक्षा प्रतिजनों को पुनः संयोजक प्रोटीनों से प्रतिस्थापित करके और अग्नि-निवारक विषाणु कणों को विषाणुओं के संरचनात्मक प्रोटीनों से प्रतिस्थापित करके प्रतिरक्षाजनों को समायोजित करें। प्रायोगिक डिज़ाइन को समायोजित करें और प्रतिरक्षा खुराक को संशोधित करें।

प्रतिजनों को वाहक प्रोटीन, जैसे गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन, के साथ युग्मित करके प्रतिरक्षाजनकता को बढ़ाया जा सकता है। इसके अतिरिक्त, फ्रायंड सहायक और एल्युमीनियम सहायक सहित प्रतिरक्षा सहायकों का उपयोग जीवित कोशिकाओं में निवास समय को बढ़ाने और प्रतिरक्षा कोशिकाओं की सक्रियता और प्रसार को प्रोत्साहित करने के लिए किया जा सकता है, जिससे प्रतिरक्षाजनकता में सुधार होता है।

फेज एंटीबॉडी लाइब्रेरी, विविध फेज एंटीबॉडी का एक संग्रह है, जो एंटीबॉडी से परिवर्तनशील क्षेत्र जीनों के एक पूरे समूह को फेज वेक्टर में एकत्रित करके और उन्हें फेज की सतहों पर अभिव्यक्त करके बनाया जाता है। इस प्रक्रिया के परिणामस्वरूप एक फेज एंटीबॉडी लाइब्रेरी का निर्माण होता है।

फेज डिस्प्ले की सामान्य प्रक्रिया में कई प्रमुख चरण शामिल होते हैं: प्रतिरक्षित पशुओं से परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (PBMC) को निकालना, कुल RNA को अलग करके उसे पूरक DNA (cDNA) में प्रतिलेखन करना, पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (PCR) तकनीक का उपयोग करके लक्ष्य जीन का प्रवर्धन करना, लक्ष्य जीन को एक फेज वेक्टर में क्लोन करना, और वेक्टर को अभिव्यक्ति के लिए एक मेज़बान कोशिका में रूपांतरित करना। इस प्रक्रिया के परिणामस्वरूप एक फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी का निर्माण होता है, जो उच्च-सम्बन्धी एंटीबॉडी की शीघ्रता से पहचान कर सकती है। इसके बाद, यह लाइब्रेरी टीकों, चिकित्सीय दवाओं और नैदानिक ​​अभिकर्मकों के विकास के लिए एक मूल्यवान संसाधन के रूप में काम कर सकती है।

एंटीबॉडी लाइब्रेरी के स्रोत के अनुसार, फेज एंटीबॉडी लाइब्रेरी को इम्यून फेज एंटीबॉडी लाइब्रेरी और नेटिव फेज एंटीबॉडी लाइब्रेरी में वर्गीकृत किया जा सकता है। इन दोनों प्रकारों के बीच मुख्य अंतर यह है कि क्या जानवरों को टीका लगाया गया है। इसके अतिरिक्त, नेटिव एंटीबॉडी लाइब्रेरी अर्ध-संश्लेषण या संश्लेषण के माध्यम से उत्पन्न की जा सकती हैं।

एंटीबॉडी लाइब्रेरी की गुणवत्ता के मूल्यांकन के लिए दो प्राथमिक सूचकांक हैं: भंडारण क्षमता और विविधता। उच्च विविधता के साथ एक बड़ी भंडारण क्षमता, उच्च आत्मीयता और विशिष्टता दोनों के साथ एंटीबॉडी की प्रभावी स्क्रीनिंग सुनिश्चित करती है।

जैविक निक्षालन की प्रक्रिया में, प्रदर्शन लाइब्रेरी को निश्चित लक्ष्यों के साथ संवर्धित किया जाता है और फिर गैर-प्रतिक्रियाशील फेजों को हटाने के लिए अच्छी तरह से धोया जाता है। संयुग्मों को आमतौर पर एक अम्लीय या उच्च-नमक घोल का उपयोग करके निक्षालित किया जाता है और बाद में संवर्धन के लिए उपयुक्त मेज़बान कोशिकाओं में प्रवर्धित किया जाता है। 3 से 5 चरणों की जाँच के बाद, उच्च आत्मीयता वाले प्रतिरक्षी प्राप्त होते हैं।

फेज स्क्रीनिंग विधियों में मुख्य रूप से सॉलिड-फ़ेज़ पैनिंग, लिक्विड-फ़ेज़ स्क्रीनिंग और सेल-आधारित स्क्रीनिंग शामिल हैं। उपयुक्त स्क्रीनिंग विधि के चयन में लक्ष्य अणुओं की विशेषताओं, स्क्रीनिंग प्रक्रिया के उद्देश्यों और प्रयोगशाला के वातावरण को ध्यान में रखना चाहिए।

सकारात्मक स्क्रीनिंग, लक्ष्य प्रोटीन से जुड़ने वाले फेज एंटीबॉडी की स्क्रीनिंग के लिए सबसे बुनियादी तरीका है। नकारात्मक स्क्रीनिंग गैर-विशिष्ट एंटीबॉडी को खत्म करने का काम करती है। फेज एंटीबॉडी स्क्रीनिंग प्रक्रिया के दौरान, लक्ष्य एंटीजन लेबल, पदार्थों, या लक्ष्य एंटीजन से संरचनात्मक समानता वाले अन्य एंटीजन के हस्तक्षेप के कारण गैर-विशिष्ट एंटीबॉडी की पहचान हो सकती है। ऐसे मामलों में, नकारात्मक स्क्रीनिंग स्क्रीनिंग प्रक्रिया की दक्षता बढ़ा सकती है।

एंटीबॉडी सत्यापन की विधियों में आमतौर पर एलिसा, वेस्टर्न ब्लॉटिंग (WB), फ्लो साइटोमेट्री, इम्यूनोप्रेसिपिटेशन (IP), इम्यूनोफ्लोरेसेंस (IF), इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री और कई अन्य प्रयोगात्मक तकनीकें शामिल हैं। अल्फा लाइफटेक के पास एंटीबॉडी का पता लगाने का व्यापक अनुभव है और उसके पास एक पेशेवर प्रयोगात्मक टीम है, जो बाद के प्रयोगों में एंटीबॉडी की प्रभावशीलता सुनिश्चित करती है।