एंटीबॉडी मानवीकरण विकास प्लेटफार्म
मानवीकृत एंटीबॉडी मानव प्रतिरक्षा प्रणाली से न्यूनतम या नगण्य प्रतिक्रिया उत्पन्न करती हैं। कॉग्निटिव मार्केट रिसर्च के अनुसार, वैश्विक एंटीबॉडी मानवीकरण बाजार का आकार 2024 में 92.5 मिलियन अमेरिकी डॉलर था और 2024 से 2031 तक 13.00% की चक्रवृद्धि वार्षिक वृद्धि दर (CAGR) से बढ़ेगा। अल्फा लाइफटेक के पास एक परिपक्व एंटीबॉडी मानवीकरण प्लेटफॉर्म है, जिसमें मानवीकृत एंटीबॉडी के लिए 98% से अधिक की सफलता दर है। हमारे पास कई मानवीकरण रणनीतियाँ हैं, जिनमें CDR ग्राफ्टिंग, SDR ग्राफ्टिंग, चेन शफलिंग, फेज डिस्प्ले आदि शामिल हैं, जिन्हें आपकी प्रायोगिक आवश्यकताओं के अनुसार चुना जा सकता है। हम न केवल चूहों, खरगोशों, अल्पाका, ऊंट आदि जैसी विभिन्न प्रजातियों से एंटीबॉडी का मानवीकरण प्रदान कर सकते हैं, बल्कि scFv, Fab और नैनोबॉडी जैसे विभिन्न रूपों में एंटीबॉडी का मानवीकरण भी कर सकते हैं। हमारे पास एंटीबॉडी उत्पादन, शुद्धिकरण और सत्यापन सेवाएं प्रदान करने के लिए पेशेवर तकनीकी कर्मी हैं, जिनमें माउस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी उत्पादन, काइमेरिक एंटीबॉडी उत्पादन, मानवीकृत एंटीबॉडी अभिव्यक्ति और शुद्धिकरण, और मानवीकृत एंटीबॉडी लक्षण वर्णन और विश्लेषण शामिल हैं। उच्च सफलता दर, उच्च शुद्धता और कम प्रतिरक्षाजनकता के साथ, हम मानवीकृत एंटीबॉडी उत्पादन की गारंटी देते हैं।
एंटीबॉडी मानवीकरण का परिचय
मोनोक्लोनल एंटीबॉडी थेरेपी का उपयोग ऑटोइम्यून बीमारियों, कैंसर और अन्य रोगों के उपचार के लिए किया जा सकता है। मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उत्पादन चूहों या अन्य जानवरों को प्रतिरक्षित करके किया जाता है। मोनोक्लोनल एंटीबॉडी उत्पादन के बाद के चरणों में रोगों के उपचार के लिए उपयोग किए जाने पर, गैर-मानव एंटीबॉडी की प्रतिरक्षाजनकता को नजरअंदाज नहीं किया जा सकता है। मानवीकरण का मुख्य सिद्धांत गैर-मानव संरचना अवशेषों, जैसे कि अतिपरिवर्तनीय पूरकता-निर्धारण क्षेत्रों (सीडीआर), को मानव संरचना में एकीकृत करना है, जिससे ऐसे अनुक्रम उत्पन्न होते हैं जो प्रतिरक्षाजनकता को रोकते हुए मूल एंटीबॉडी विशेषताओं को बनाए रखते हैं। चिकित्सीय एंटीबॉडी की खोज के लिए माउस प्रतिरक्षण और उसके बाद माउस अनुक्रम मानवीकरण दो मुख्य मार्ग हैं, जो मुख्य रूप से कई चरणों से गुजरते हैं: माउस एंटीबॉडी उत्पादन, मोनोक्लोनल एंटीबॉडी काइमेराइजेशन, काइमेरिक म्यूरिन ह्यूमन मोनोक्लोनल एंटीबॉडी और पूर्णतः मानवीकृत मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का विकास। वर्तमान में, अनुसंधान में मुख्य रूप से ट्रांसजेनिक चूहे (मानव बी सेल जीन को चूहों में स्थानांतरित करना), यीस्ट या फेज डिस्प्ले तकनीक का उपयोग करके उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग, सीडीआर ग्राफ्टिंग (मानव अनुक्रमों में पैतृक सीडीआर सम्मिलित करना), प्रत्यारोपण-विशिष्ट निर्धारण अवशेष (एसडीआर), फ्रेमवर्क शफलिंग और अन्य विधियां शामिल हैं।

चित्र 1: चूहे से प्राप्त एंटीबॉडी (हरे डोमेन) से पूर्णतः मानव एंटीबॉडी में एंटीबॉडी के मानवीकरण का योजनाबद्ध अवलोकन।
एंटीबॉडी मानवीकरण रणनीति
सीडीआर ग्राफ्टिंग
सीडीआर ग्राफ्टिंग, रिकॉम्बिनेंट डीएनए प्रौद्योगिकी पर आधारित स्तनधारी अभिव्यक्ति प्रणाली के माध्यम से प्राप्त की जाती है, और इसके मुख्य चरण इस प्रकार हैं:
(1) चूहों (या गैर-मानव स्रोतों) में संबंधित एंटीबॉडी विकसित करें, एंटीबॉडी को एन्कोड करने वाले डीएनए को अलग करें, और उन्हें अनुक्रमण के लिए वैक्टर में क्लोन करें (या सीधे एकल-कोशिका अनुक्रमण करें)।
(2) एंटीबॉडी सीडीआर के अनुरूप डीएनए अनुक्रम का निर्धारण करना और लक्ष्य बंधन विशिष्टता का निर्धारण करना;
(3) गैर-मानव सी.डी.आर. को प्रत्यारोपित करने और एक नया एंटीबॉडी जीन बनाने के लिए मानव फ्रेमवर्क क्षेत्र (.एफआर.) का चयन करें।
(4) लूप को स्थिर करने और अंतिम मानवीकृत एंटीबॉडी की आत्मीयता या संरचनात्मक अखंडता के नुकसान को रोकने के लिए रिकवरी उत्परिवर्तन उत्पन्न करने के लिए गैर-मानव सी.डी.आर. और मानव एफ.आर. के बीच संघर्षों का त्रि-आयामी विश्लेषण करें।

चित्र 2: पूरकता निर्धारण क्षेत्र (सीडीआर) ग्राफ्टिंग का योजनाबद्ध अवलोकन।
फ्रेमवर्क फेरबदल
उच्च-आत्मीयता वाले एंटीबॉडी प्राप्त करने के लिए फ्रेमवर्क शफलिंग, फेज डिस्प्ले तकनीक और फेज लाइब्रेरी स्क्रीनिंग तकनीक पर निर्भर करती है। मानव एंटीबॉडी हेवी चेन फ्रेमवर्क को एनकोड करने वाले ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स को टेम्पलेट के रूप में उपयोग किया जाता है, CDR क्षेत्रों को प्राइमर के रूप में एनकोड किया जाता है, और PCR उत्पाद को डीनेचर करने के लिए PCR प्रवर्धन किया जाता है ताकि सिंगल-स्ट्रैंडेड DNA प्राप्त हो सके। स्ट्रेप्टाविडिन से शुद्ध किए गए VL और VH जीन के सिंगल-स्ट्रैंडेड DNA को T4 DNA लाइगेज और रिस्ट्रिक्शन एंजाइम का उपयोग करके वैक्टर पर पुनर्निर्मित किया जाता है, बैक्टीरियोफेज के साथ इनक्यूबेट किया जाता है, और बैक्टीरियोफेज द्वारा प्रवर्धित किया जाता है, जिससे एक फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी का निर्माण होता है। संबंधित एंटीजन के साथ स्क्रीनिंग के तीन दौर किए जाते हैं, और अंत में ELISA और अन्य विधियों का उपयोग करके सकारात्मक क्लोनों का सत्यापन किया जाता है।

चित्र 3: पूरकता निर्धारण क्षेत्र (सीडीआर) ग्राफ्टिंग और फ्रेमवर्क (एफआर) शफलिंग मानवीकरण रणनीतियों का योजनाबद्ध चित्रण। (ए) सीडीआर ग्राफ्टिंग की मुख्य प्रक्रिया। (बी) एफआर शफलिंग की मुख्य प्रक्रिया। (संदर्भ स्रोत: वांग योंगमेई, एट अल., पीडी-1 माउस एंटीबॉडी के मानवीकरण में "फ्रेमवर्क शफलिंग" और "सीडीआर ग्राफ्टिंग" की तुलना।)
फेज डिस्प्ले
मानवीकृत एंटीबॉडी का उत्पादन जीवाणु फजी की सतह पर विशिष्ट एंटीबॉडी प्रदर्शित करने की विधि पर आधारित है, जो मुख्य रूप से मानव एंटीबॉडी फेज लाइब्रेरी के माध्यम से निर्मित होती है। लाइब्रेरी का स्रोत मानव परिधीय रक्त से पृथक किए गए पीबीएमसी हैं, जिनका उपयोग फेज लाइब्रेरी बनाने के लिए किया जाता है, और फिर उनमें से संबंधित अनुक्रमों को छांटा जाता है। इस अनुक्रम में संपूर्ण मानव अनुक्रम होता है, लेकिन उत्पादित एंटीबॉडी एंटीबॉडी खंड होते हैं, जैसे कि scFv, Fab और नैनोबॉडी।
एंटीबॉडी मानवीकरण सेवा कार्यप्रवाह
| सेवा चरण | क्यूसी मानक | समय |
|---|---|---|
| एंटीबॉडी अलगाव | शुद्धता >95% | 1-2 सप्ताह |
| अनुक्रम विश्लेषण | गैर-मानव अनुक्रमों की सटीक पहचान | 1 सप्ताह |
| सीडीआर ग्राफ्टिंग और फ्रेमवर्क ग्राफ्टिंग | सफल एकीकरण और अभिव्यक्ति | 2-3 सप्ताह |
| अभिव्यक्ति और शुद्धिकरण | उच्च उपज और शुद्धता | 2-3 सप्ताह |
| कार्यात्मक सत्यापन | आत्मीयता और विशिष्टता मूल्यांकन | 1 सप्ताह |
यदि आपके कोई प्रश्न हों, तो कृपया किसी भी समय हमसे संपर्क करने में संकोच न करें।
Leave Your Message
0102




2018-07-16 

