एप्टामर अनुसंधान सेवा
ग्राहकों की विभिन्न विश्लेषण आवश्यकताओं के अनुसार, अल्फा लाइफटेक के पास ग्राहकों के चयन के लिए विभिन्न प्रकार की एप्टामर विश्लेषण रणनीतियाँ हैं।
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एप्टामर अनुसंधान सेवा
एप्टामर का परिचय
एप्टामर एकल-स्ट्रैंडेड न्यूक्लिक एसिड (जैसे डीएनए या आरएनए) अणु होते हैं जिन्हें सिंथेटिक ऑलिगोन्युक्लियोटाइड्स की लाइब्रेरी से इन विट्रो में स्क्रीन किया जाता है, जिसमें SELEX स्क्रीनिंग नामक प्रक्रिया द्वारा यादृच्छिक रूप से निर्दिष्ट अनुक्रम होते हैं, जिसमें पुनरावृत्त चयन के कई दौर शामिल होते हैं। अल्फा लाइफटेक के स्वामित्व वाली एप्टामर विकास सेवाओं के मुख्य घटकों में एप्टामर लाइब्रेरी निर्माण, एप्टामर SELEX स्क्रीनिंग, एप्टामर SELEX अनुक्रमण, एप्टामर अनुक्रम विश्लेषण और अन्य एप्टामर विश्लेषण शामिल हैं।
SELEX अनुक्रमण में एप्टामर SELEX स्क्रीनिंग और उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण का संयोजन किया जाता है। एप्टामर SELEX अनुक्रमण के माध्यम से, लक्ष्य से बंधे एप्टामर के विशिष्ट अनुक्रम को कुशलतापूर्वक निर्धारित किया जा सकता है, जो बाद के एप्टामर अनुक्रम विश्लेषण और अनुप्रयोग के लिए बुनियादी डेटा प्रदान करता है।
वैज्ञानिक अनुसंधान, रोग उपचार, बायोसेंसर निर्माण, दवा खोज और पर्यावरण निगरानी में एप्टामर्स का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। हालाँकि, इन विट्रो में जांचे गए ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड एप्टामर्स विवो में आसानी से विघटित हो गए और यहाँ तक कि विषाक्तता भी प्रदर्शित करते हैं। इसलिए, जांचे गए एप्टामर्स को अनुकूलित करने के बाद, एप्टामर विकास की सफलता का मूल्यांकन करने के लिए इन विट्रो विश्लेषण की आवश्यकता होती है। ग्राहकों की विभिन्न विश्लेषण आवश्यकताओं के अनुसार, अल्फा लाइफटेक के पास ग्राहकों के लिए चुनने के लिए कई प्रकार की एप्टामर विश्लेषण रणनीतियाँ हैं।
चित्र 1 एप्टामर विश्लेषण का आरेख। संदर्भ स्रोत:थेवेंद्रन आर, सिटार्टन एम. 2022. एप्टामर्स की बंधन आत्मीयता का अनुमान लगाने के लिए परख.
एप्टामर अनुसंधान सेवा का परिचय
एप्टामर स्थिरता विश्लेषण
न्यूक्लिऐस क्षरण प्रयोग
एप्टामर को विभिन्न प्रकार के न्यूक्लिऐस (जैसे कि डीएनएस, आरएनस, आदि) के साथ विशिष्ट परिस्थितियों में इनक्यूबेट करके एप्टामर के क्षरण को देखा जाता है, ताकि इसकी क्षरण-रोधी क्षमता का मूल्यांकन किया जा सके। व्यावहारिक अनुप्रयोगों में एप्टामर की स्थिरता और स्थायित्व निर्धारित करने के लिए यह लाभदायक है।
फ्लोरोसेंट लेबलिंग विधि
एप्टामर की स्थिरता का मूल्यांकन एप्टामर पर फ्लोरोफोर को लेबल करके और लक्ष्य के साथ बंधने से पहले और बाद में फ्लोरोसेंस सिग्नल के परिवर्तनों को देखकर अप्रत्यक्ष रूप से किया जाता है। उदाहरण के लिए, जब एप्टामर किसी लक्ष्य से बंधता है, तो उसकी संरचना बदल सकती है, जिसके परिणामस्वरूप फ्लोरोसेंस सिग्नल में वृद्धि या कमी हो सकती है।
थर्मल स्थिरता विश्लेषण
एप्टामर की ऊष्मीय स्थिरता का आकलन विभिन्न तापमानों पर इसके गलनांक (Tm मान) में परिवर्तन को मापकर किया जाता है। एप्टामर का गलनांक जितना अधिक होगा, उसकी ऊष्मीय स्थिरता उतनी ही बेहतर होगी।
गतिशील स्थिरता विश्लेषण
एप्टामर और लक्ष्य के बीच बंधन और वियुग्मन प्रक्रिया की वास्तविक समय में निगरानी करने, गतिशील पैरामीटर (जैसे बंधन दर स्थिरांक, पृथक्करण दर स्थिरांक, आदि) प्राप्त करने, एप्टामर और लक्ष्य के बीच अंतःक्रिया तंत्र को और अधिक समझने, तथा इसकी गतिशील स्थिरता का मूल्यांकन करने के लिए सतही प्लाज्मोन अनुनाद (एसपीआर) और अन्य प्रौद्योगिकियों का उपयोग किया गया।
संरचनात्मक स्थिरता विश्लेषण
एप्टामर की त्रि-आयामी संरचना और इसकी संरचनात्मक स्थिरता का विश्लेषण करने के लिए एक्स-रे क्रिस्टलोग्राफी, परमाणु चुंबकीय अनुनाद (एनएमआर) और अन्य संरचनात्मक जीव विज्ञान तकनीकों का उपयोग किया गया।
एप्टामर विशिष्ट विश्लेषण
एप्टामर बंधन परख
एप्टामर बंधन परख द्वारा आत्मीयता का आकलन एप्टामर और लक्ष्य अणु के बीच बंधन स्थिरांक को मापने के लिए किया जाता है, जैसे कि पृथक्करण स्थिरांक Kd। कम Kd मान उच्च आत्मीयता को इंगित करता है। एप्टामर बंधन परख उच्च बंधन क्षमता वाले दवा उम्मीदवारों को स्क्रीन कर सकता है, और फिर बाद में फार्माकोडायनामिक्स और फार्माकोकाइनेटिक्स अध्ययन आयोजित कर सकता है।
रिवर्स स्क्रीनिंग प्रयोग
रिवर्स स्क्रीनिंग परख एक स्क्रीनिंग विधि है जो बड़ी संख्या में उम्मीदवार अणुओं से गैर-लक्ष्य अणुओं को जल्दी से बाहर निकालने के लिए है। रिवर्स स्क्रीनिंग को उन अणुओं को बाहर करने के लिए डिज़ाइन किया गया है जिनमें यह गुण या कार्य नहीं है। रिवर्स स्क्रीनिंग की कुंजी उचित रिवर्स स्क्रीनिंग मार्कर या स्थितियों का चयन करना है जो स्क्रीनिंग प्रक्रिया के दौरान गैर-लक्ष्य अणुओं की पहचान करने और उन्हें हटाने में सक्षम बनाते हैं। इस प्रयोग में, गैर-लक्ष्य अणुओं का चयन बहुत महत्वपूर्ण है। यह सुनिश्चित किया जाना चाहिए कि चुने गए गैर-लक्ष्य अणु उन पदार्थों के प्रतिनिधि हैं जो एप्टामर स्क्रीनिंग में हस्तक्षेप कर सकते हैं और संभावित हस्तक्षेप करने वाले कारकों को यथासंभव पूरी तरह से कवर किया गया है।
प्रतिस्पर्धी निषेध प्रयोग
एप्टामर और लक्ष्य अणु के बंधन तंत्र में अत्यधिक प्रतिस्पर्धियों (जैसे लक्ष्य अणु के समान संरचना वाले अणु) को जोड़ने से एप्टामर और लक्ष्य अणु की बंधन क्षमता में परिवर्तन देखा जाता है। यदि एप्टामर की लक्ष्य अणु को बांधने की क्षमता काफी कम हो जाती है, तो यह दर्शाता है कि एप्टामर में उच्च विशिष्टता है।
कुछ मामलों में, प्रतिस्पर्धी अवरोध प्रयोगों को रिवर्स स्क्रीनिंग प्रयोगों के भाग के रूप में या सहायक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, दवा स्क्रीनिंग प्रक्रिया में, दवा अणु की लक्ष्य प्रोटीन से बंधने की क्षमता का मूल्यांकन प्रतिस्पर्धी अवरोध प्रयोगों द्वारा किया जा सकता है, और फिर रिवर्स स्क्रीनिंग प्रयोगों का उपयोग उन यौगिकों को हटाने के लिए किया जा सकता है जो सामान्य कोशिकाओं या ऊतकों से बहुत मजबूती से बंधे होते हैं।
एप्टामर साइटोटॉक्सिसिटी विश्लेषण
एप्टामर साइटोटॉक्सिसिटी विश्लेषण के लिए कई प्रकार की प्रयोगात्मक विधियां हैं, जो कोशिका अस्तित्व, प्रसार या कार्य पर एप्टामर के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए तैयार की गई हैं।
| तरीकों | विस्तृत परिचय | फ़ायदा | नुकसान |
|---|---|---|---|
| एमटीटी पता लगाने की विधि | एमटीटी परख जीवित कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में एंजाइम गतिविधि पर आधारित एक विधि है। जीवित कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में सक्सिनेट डिहाइड्रोजनेज बहिर्जात एमटीटी को पानी में अघुलनशील नीले-बैंगनी क्रिस्टल फॉर्मेज़न में कम कर सकता है और इसे कोशिका में जमा कर सकता है, जबकि मृत कोशिकाओं का ऐसा कोई कार्य नहीं होता है। डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (DMSO) द्वारा इन क्रिस्टल को घोलना और एक एंजाइमोलेटर पर विशिष्ट तरंग दैर्ध्य (जैसे 490nm या 570nm) पर अवशोषण का पता लगाना अप्रत्यक्ष रूप से जीवित कोशिकाओं की संख्या को दर्शा सकता है और इस प्रकार एप्टामर की साइटोटॉक्सिसिटी का आकलन कर सकता है। | उच्च संवेदनशीलता, मितव्ययिता और सुविधा | भारी कार्यभार, कार्बनिक सॉल्वैंट्स कोशिकाओं को नुकसान पहुंचा सकते हैं; केवल अंतिम प्रयोगात्मक परिणाम प्राप्त किए जा सकते हैं, और साइटोटॉक्सिसिटी की पूरी प्रक्रिया को नहीं देखा जा सकता है |
| सीसीके-8 पता लगाने की विधि | सेल काउंटिंग किट-8 (CCK-8) एक उच्च-संवेदनशीलता, गैर-रेडियोधर्मी वर्णमिति पहचान विधि है। CCK-8 में WST-8 होता है, जिसे जीवित कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में डिहाइड्रोजनेज द्वारा कम किया जाता है ताकि अत्यधिक पानी में घुलनशील नारंगी मिथाइल ज़ैन ईंधन का उत्पादन किया जा सके। उत्पादित मेज़न डाई की मात्रा जीवित कोशिकाओं की संख्या से रैखिक रूप से संबंधित है, और जीवित कोशिकाओं की संख्या को 450nm की तरंग दैर्ध्य पर मेज़न डाई के प्रकाश अवशोषण मूल्य को मापकर अप्रत्यक्ष रूप से दर्शाया जा सकता है, ताकि एप्टामर की साइटोटॉक्सिसिटी का मूल्यांकन किया जा सके। | सरल ऑपरेशन, कोशिकाओं को धोने की आवश्यकता नहीं, तेजी से पता लगाने, विस्तृत रैखिक पता लगाने की सीमा, उच्च संवेदनशीलता, अच्छी पुनरावृत्ति, थोड़ा साइटोटोक्सिसिटी | उच्च अभिकर्मक मूल्य; कभी-कभी यह बताना मुश्किल होता है कि कम अवशोषण जीवित कोशिकाओं की संख्या में कमी के कारण है या स्वयं कोशिका डिहाइड्रोजनेज की गतिविधि में कमी के कारण है |
| एलडीएच पता लगाने की विधि | एलडीएच (लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज) एक एंजाइम है जो कोशिकाओं के कोशिका द्रव्य में स्थिर रहता है, और जब कोशिका झिल्ली क्षतिग्रस्त होती है, तो एलडीएच कोशिका के बाहर निकल जाता है। एलडीएच लैक्टिक एसिड को पाइरूवेट बनाने के लिए उत्प्रेरित कर सकता है, और आईएनटी (टेट्राजोलियम लवण) के साथ प्रतिक्रिया करके बैंगनी क्रिस्टलीय पदार्थ बना सकता है। एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य (जैसे 490nm) पर इसके अवशोषण को मापकर, कोशिका क्षति की डिग्री को दर्शाया जा सकता है, और फिर एप्टामर की साइटोटॉक्सिसिटी का मूल्यांकन किया जा सकता है। | यह कोशिकाओं की मृत्यु दर को सीधे दर्शाता है, और कोशिकाओं को कम नुकसान पहुंचाता है, और कोई रेडियोधर्मी आइसोटोप संदूषण नहीं होता है | कोशिकाओं को बार-बार इनक्यूबेटर से बाहर निकालने की आवश्यकता, ऑपरेशन अधिक जटिल है; केवल अंतिम प्रयोगात्मक परिणाम प्राप्त किए जा सकते हैं, और साइटोटॉक्सिसिटी की पूरी प्रक्रिया को नहीं देखा जा सकता है |
| वास्तविक समय लाइव सेल इमेजिंग विश्लेषण | वास्तविक समय लाइव सेल इमेजिंग विश्लेषक का उपयोग करते हुए, उपकरण को वास्तविक समय में सेल विकास चक्र की पूरी प्रक्रिया का निरीक्षण और रिकॉर्ड करने के लिए इनक्यूबेटर में रखा गया था। कोशिकाओं के रूपात्मक परिवर्तनों और विकास वक्रों का विश्लेषण करके एप्टामर्स की साइटोटॉक्सिसिटी का मूल्यांकन किया जा सकता है। यह विधि कोशिका वृद्धि वातावरण को स्थिर रखते हुए साइटोटॉक्सिक प्रक्रियाओं के वीडियो और मात्रात्मक परिणाम प्रदान कर सकती है। | यह वास्तविक समय में साइटोटोक्सिक प्रक्रिया की निगरानी कर सकता है, गैर-विनाशकारी इमेजिंग, कोशिकाओं में हस्तक्षेप और क्षति को कम कर सकता है; गहन विश्लेषण के लिए वीडियो और मात्रात्मक परिणाम दोनों उपलब्ध हैं। | उपकरण की लागत अधिक है और इसके लिए पेशेवर संचालन कौशल और डेटा विश्लेषण क्षमता की आवश्यकता होती है |
कच्ची
एप्टामर अनुसंधान सेवा का लाभ
कुल गुणवत्ता नियंत्रण
उच्च स्थिरता के साथ अनुकूलित एप्टामर्स
किफायती और कुशल। अधिक प्रतिस्पर्धी मूल्य, बेहतर सेवा
व्यापक शोध स्थल और बहुविध शोध पद्धतियाँ
व्यावसायिक बिक्री-पूर्व परामर्श और बिक्री-पश्चात सहायता सेवाएँ
एप्टामर विश्लेषण में समृद्ध अनुभव
उच्च स्तरीय अनुसंधान एवं विकास टीम
अनुकूलित एप्टामर संबंधित सेवाएं
यदि आपके कोई प्रश्न हों तो कृपया किसी भी समय हमसे संपर्क करें।
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2018-07-16 
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