एप्टामर अनुसंधान सेवा
ग्राहकों की विभिन्न विश्लेषण आवश्यकताओं के अनुसार, अल्फा लाइफटेक के पास ग्राहकों के लिए चुनने हेतु कई प्रकार की एप्टामर विश्लेषण रणनीतियाँ उपलब्ध हैं।
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एप्टामर अनुसंधान सेवा
एप्टामर का परिचय
एप्टामर एकल-स्ट्रैंडेड न्यूक्लिक एसिड (जैसे डीएनए या आरएनए) अणु होते हैं, जिन्हें यादृच्छिक रूप से निर्धारित अनुक्रमों वाले सिंथेटिक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड की लाइब्रेरी से इन विट्रो में SELEX स्क्रीनिंग नामक प्रक्रिया द्वारा छांटा जाता है, जिसमें पुनरावृत्ति चयन के कई चरण शामिल होते हैं। अल्फा लाइफटेक के स्वामित्व वाली एप्टामर विकास सेवाओं के मुख्य घटकों में एप्टामर लाइब्रेरी निर्माण, एप्टामर SELEX स्क्रीनिंग, एप्टामर SELEX अनुक्रमण, एप्टामर अनुक्रम विश्लेषण और अन्य एप्टामर विश्लेषण शामिल हैं।
SELEX अनुक्रमण, एप्टामर SELEX स्क्रीनिंग और उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण का संयोजन है। एप्टामर SELEX अनुक्रमण के माध्यम से, लक्ष्य से बंधे एप्टामर के विशिष्ट अनुक्रम को कुशलतापूर्वक निर्धारित किया जा सकता है, जो बाद में एप्टामर अनुक्रम विश्लेषण और अनुप्रयोग के लिए मूलभूत डेटा प्रदान करता है।
एप्टामर्स का व्यापक रूप से वैज्ञानिक अनुसंधान, रोग उपचार, बायो सेंसर निर्माण, औषधि खोज और पर्यावरण निगरानी में उपयोग किया जाता है। हालांकि, इन विट्रो में जांचे गए ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड एप्टामर्स इन विवो में आसानी से विघटित हो जाते हैं और यहां तक कि विषाक्तता भी प्रदर्शित करते हैं। इसलिए, जांचे गए एप्टामर्स को अनुकूलित करने के बाद, एप्टामर विकास की सफलता का मूल्यांकन करने के लिए इन विट्रो विश्लेषण आवश्यक है। ग्राहकों की विभिन्न विश्लेषण आवश्यकताओं के अनुसार, अल्फा लाइफटेक ग्राहकों को चुनने के लिए कई प्रकार की एप्टामर विश्लेषण रणनीतियाँ प्रदान करता है।
चित्र 1. एप्टामर विश्लेषण का आरेख। संदर्भ स्रोत:थेवेंद्रन आर, सिटार्टन एम. 2022. एप्टामर्स की बंधन आत्मीयता का अनुमान लगाने के लिए परख.
एप्टामर अनुसंधान सेवा का परिचय
एप्टामर स्थिरता विश्लेषण
न्यूक्लिएज़ निम्नीकरण प्रयोग
विशिष्ट परिस्थितियों में विभिन्न प्रकार के न्यूक्लिएज़ (जैसे डीएनएज़, आरएनएज़, आदि) के साथ एप्टामर को इनक्यूबेट करके, एप्टामर के अपघटन का अवलोकन किया जाता है, जिससे इसकी अपघटन-रोधी क्षमता का मूल्यांकन किया जा सके। यह व्यावहारिक अनुप्रयोगों में एप्टामर की स्थिरता और स्थायित्व निर्धारित करने में लाभकारी है।
फ्लोरोसेंट लेबलिंग विधि
एप्टामर की स्थिरता का मूल्यांकन अप्रत्यक्ष रूप से एप्टामर पर फ्लोरोफोरस को लेबल करके और लक्ष्य के साथ जुड़ने से पहले और बाद में प्रतिदीप्ति संकेत में होने वाले परिवर्तनों का अवलोकन करके किया जाता है। उदाहरण के लिए, जब कोई एप्टामर लक्ष्य से जुड़ता है, तो उसकी संरचना में परिवर्तन हो सकता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रतिदीप्ति संकेत में वृद्धि या कमी हो सकती है।
तापीय स्थिरता विश्लेषण
विभिन्न तापमानों पर एप्टामर के गलनांक (Tm मान) में परिवर्तन को मापकर इसकी ऊष्मीय स्थिरता का आकलन किया जाता है। एप्टामर का गलनांक जितना अधिक होगा, उसकी ऊष्मीय स्थिरता उतनी ही बेहतर होगी।
गतिशील स्थिरता विश्लेषण
एप्टामर और लक्ष्य के बीच बंधन और वियोजन प्रक्रिया की वास्तविक समय में निगरानी करने, गतिशील मापदंडों (जैसे बंधन दर स्थिरांक, पृथक्करण दर स्थिरांक, आदि) को प्राप्त करने, एप्टामर और लक्ष्य के बीच अंतःक्रिया तंत्र को और अधिक समझने और इसकी गतिशील स्थिरता का मूल्यांकन करने के लिए सरफेस प्लास्मोन रेजोनेंस (एसपीआर) और अन्य तकनीकों का उपयोग किया गया।
संरचनात्मक स्थिरता विश्लेषण
एप्टामर की त्रि-आयामी संरचना और इसकी संरचनात्मक स्थिरता का विश्लेषण करने के लिए एक्स-रे क्रिस्टलोग्राफी, परमाणु चुंबकीय अनुनाद (एनएमआर) और अन्य संरचनात्मक जीव विज्ञान तकनीकों का उपयोग किया गया था।
एप्टामर विशिष्ट विश्लेषण
एप्टामर बाइंडिंग परख
एप्टामर और लक्ष्य अणु के बीच बंधन स्थिरांक (जैसे कि वियोजन स्थिरांक Kd) को मापने के लिए एप्टामर बंधन परख करके आत्मीयता का आकलन किया जाता है। Kd का कम मान उच्च आत्मीयता को दर्शाता है। एप्टामर बंधन परख उच्च बंधन क्षमता वाले औषधीय उम्मीदवारों को छांटने में मदद कर सकता है, और फिर आगे के फार्माकोडायनामिक्स और फार्माकोकाइनेटिक्स अध्ययन किए जा सकते हैं।
रिवर्स स्क्रीनिंग प्रयोग
रिवर्स स्क्रीनिंग परख एक ऐसी स्क्रीनिंग विधि है जिससे बड़ी संख्या में संभावित अणुओं में से गैर-लक्षित अणुओं को शीघ्रता से अलग किया जा सकता है। रिवर्स स्क्रीनिंग का उद्देश्य उन अणुओं को बाहर करना है जिनमें यह गुण या कार्य नहीं होता है। रिवर्स स्क्रीनिंग की कुंजी उपयुक्त रिवर्स स्क्रीनिंग मार्कर या ऐसी स्थितियों का चयन करना है जो स्क्रीनिंग प्रक्रिया के दौरान गैर-लक्षित अणुओं की पहचान करने और उन्हें हटाने में सक्षम बनाती हैं। इस प्रयोग में, गैर-लक्षित अणुओं का चयन अत्यंत महत्वपूर्ण है। यह सुनिश्चित किया जाना चाहिए कि चयनित गैर-लक्षित अणु उन पदार्थों का प्रतिनिधित्व करते हों जो एप्टामर स्क्रीनिंग में बाधा डाल सकते हैं और संभावित बाधा डालने वाले कारकों को यथासंभव पूरी तरह से शामिल किया गया हो।
प्रतिस्पर्धी अवरोध प्रयोग
एप्टामर और लक्ष्य अणु के बंधन तंत्र में अत्यधिक प्रतिस्पर्धी अणुओं (जैसे लक्ष्य अणु के समान संरचना वाले अणु) को जोड़ने से, एप्टामर और लक्ष्य अणु की बंधन क्षमता में परिवर्तन देखा जाता है। यदि लक्ष्य अणु को बांधने की एप्टामर की क्षमता में उल्लेखनीय कमी आती है, तो यह दर्शाता है कि एप्टामर में उच्च विशिष्टता है।
कुछ मामलों में, प्रतिस्पर्धी अवरोध प्रयोगों का उपयोग रिवर्स स्क्रीनिंग प्रयोगों के भाग के रूप में या उनके सहायक के रूप में किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, दवा स्क्रीनिंग प्रक्रिया में, दवा के अणु की लक्ष्य प्रोटीन से जुड़ने की क्षमता का मूल्यांकन प्रतिस्पर्धी अवरोध प्रयोगों द्वारा किया जा सकता है, और फिर रिवर्स स्क्रीनिंग प्रयोगों का उपयोग उन यौगिकों को हटाने के लिए किया जा सकता है जो सामान्य कोशिकाओं या ऊतकों से बहुत मजबूती से जुड़े होते हैं।
एप्टामर साइटोटॉक्सिसिटी विश्लेषण
एप्टामर की साइटोटॉक्सिसिटी के विश्लेषण के लिए कई प्रकार की प्रायोगिक विधियाँ मौजूद हैं, जिन्हें कोशिका के जीवित रहने, प्रसार या कार्य पर एप्टामर के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।
| तरीकों | विस्तृत परिचय | फ़ायदा | नुकसान |
|---|---|---|---|
| एमटीटी पता लगाने की विधि | एमटीटी परख जीवित कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में एंजाइम गतिविधि पर आधारित एक विधि है। जीवित कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में मौजूद सक्सिनेट डीहाइड्रोजनेज एंजाइम बाह्य एमटीटी को जल में अघुलनशील नीले-बैंगनी क्रिस्टल फोर्माज़ान में अपचयित कर कोशिका में जमा कर देता है, जबकि मृत कोशिकाओं में यह कार्य नहीं होता। इन क्रिस्टलों को डाइमिथाइल सल्फोक्साइड (डीएमएसओ) में घोलकर और एंजाइमोमीटर पर विशिष्ट तरंग दैर्ध्य (जैसे 490 एनएम या 570 एनएम) पर अवशोषण का पता लगाकर जीवित कोशिकाओं की संख्या का अप्रत्यक्ष रूप से अनुमान लगाया जा सकता है और इस प्रकार एप्टामर की विषाक्तता का आकलन किया जा सकता है। | उच्च संवेदनशीलता, किफायती और सुविधाजनक | अत्यधिक कार्यभार और कार्बनिक विलायकों के उपयोग से कोशिकाओं को नुकसान हो सकता है; केवल अंतिम प्रायोगिक परिणाम ही प्राप्त किए जा सकते हैं, और विषाणु विषाक्तता की संपूर्ण प्रक्रिया को नहीं देखा जा सकता है। |
| CCK-8 का पता लगाने की विधि | सेल काउंटिंग किट-8 (CCK-8) एक उच्च संवेदनशीलता वाली, गैर-रेडियोधर्मी रंगमापी विधि है। CCK-8 में WST-8 होता है, जो जीवित कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में डीहाइड्रोजिनेज एंजाइम द्वारा अपचयित होकर अत्यधिक जल-घुलनशील नारंगी रंग का मेज़ान डाई उत्पन्न करता है। उत्पादित मेज़ान डाई की मात्रा जीवित कोशिकाओं की संख्या से रैखिक रूप से संबंधित होती है, और 450 एनएम तरंगदैर्ध्य पर मेज़ान डाई के प्रकाश अवशोषण मान को मापकर जीवित कोशिकाओं की संख्या को अप्रत्यक्ष रूप से दर्शाया जा सकता है, जिससे एप्टामर की विषाणुता का मूल्यांकन किया जा सकता है। | सरल संचालन, कोशिकाओं को धोने की आवश्यकता नहीं, तीव्र पहचान, विस्तृत रैखिक पहचान सीमा, उच्च संवेदनशीलता, अच्छी पुनरावृत्ति क्षमता, कम विषैलापन | अभिकर्मक की उच्च कीमत; कभी-कभी यह बताना मुश्किल होता है कि अवशोषण में कमी जीवित कोशिकाओं की संख्या में कमी के कारण है या कोशिका डीहाइड्रोजिनेज की गतिविधि में कमी के कारण। |
| एलडीएच पता लगाने की विधि | एलडीएच (लैक्टेट डीहाइड्रोजिनेज) एक एंजाइम है जो कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म में स्थिर रहता है, और कोशिका झिल्ली के क्षतिग्रस्त होने पर, एलडीएच कोशिका के बाहर मुक्त हो जाता है। एलडीएच लैक्टिक एसिड को उत्प्रेरित करके पाइरुवेट बनाता है, और आईएनटी (टेट्राजोलियम लवण) के साथ प्रतिक्रिया करके बैंगनी क्रिस्टलीय पदार्थ बनाता है। एक विशिष्ट तरंगदैर्ध्य (जैसे 490 एनएम) पर इसके अवशोषण को मापकर, कोशिका क्षति की मात्रा का पता लगाया जा सकता है, और फिर एप्टामर की विषाक्तता का मूल्यांकन किया जा सकता है। | यह सीधे तौर पर कोशिकाओं की मृत्यु दर को दर्शाता है, कोशिकाओं को कम नुकसान पहुंचाता है और इसमें रेडियोधर्मी आइसोटोप का संदूषण नहीं होता है। | कोशिकाओं को बार-बार इनक्यूबेटर से बाहर निकालने की आवश्यकता के कारण प्रक्रिया अधिक जटिल हो जाती है; इससे केवल अंतिम प्रायोगिक परिणाम ही प्राप्त किए जा सकते हैं, और विषाणु विषाक्तता की पूरी प्रक्रिया को नहीं देखा जा सकता है। |
| वास्तविक समय में लाइव सेल इमेजिंग विश्लेषण | रियल-टाइम लाइव सेल इमेजिंग एनालाइज़र का उपयोग करते हुए, उपकरण को इनक्यूबेटर में रखा गया ताकि कोशिका वृद्धि चक्र की पूरी प्रक्रिया को वास्तविक समय में देखा और रिकॉर्ड किया जा सके। कोशिकाओं के आकारिकीय परिवर्तनों और वृद्धि वक्रों का विश्लेषण करके एप्टामर्स की साइटोटॉक्सिसिटी का मूल्यांकन किया जा सकता है। यह विधि कोशिका वृद्धि वातावरण को स्थिर रखते हुए साइटोटॉक्सिक प्रक्रियाओं के वीडियो और मात्रात्मक परिणाम प्रदान कर सकती है। | यह साइटोटॉक्सिक प्रक्रिया की वास्तविक समय में निगरानी कर सकता है, गैर-विनाशकारी इमेजिंग का उपयोग करता है, जिससे कोशिकाओं में हस्तक्षेप और क्षति कम होती है; गहन विश्लेषण के लिए वीडियो और मात्रात्मक दोनों परिणाम उपलब्ध हैं। | उपकरणों की लागत अधिक है और इसके संचालन में पेशेवर कौशल और डेटा विश्लेषण क्षमता की आवश्यकता होती है। |
कच्छी
एप्टामर अनुसंधान सेवा का लाभ
कुल गुणवत्ता नियंत्रण
उच्च स्थिरता वाले अनुकूलित एप्टामर
किफायती और कारगर। अधिक प्रतिस्पर्धी मूल्य, बेहतर सेवा।
व्यापक अनुसंधान स्थल और अनेक अनुसंधान विधियाँ
पेशेवर बिक्री-पूर्व परामर्श और बिक्री-पश्चात सहायता सेवाएं
एप्टामर विश्लेषण में व्यापक अनुभव
उच्च स्तरीय अनुसंधान एवं विकास टीम
अनुकूलित एप्टामर संबंधी सेवाएं
यदि आपके कोई प्रश्न हों, तो कृपया किसी भी समय हमसे संपर्क करने में संकोच न करें।
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2018-07-16 
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