एप्टामर संश्लेषण की तकनीकी प्रक्रिया

मौलिक सिद्धांत और तकनीकी प्रक्रिया

न्यूक्लिक एसिड एप्टामर संश्लेषण प्रौद्योगिकी की प्रक्रिया यह है कि एकल-स्ट्रैंडेड ऑलिगोन्युक्लियोटाइड्स की एक लाइब्रेरी को इन विट्रो में रासायनिक रूप से संश्लेषित किया जाता है, लक्ष्य पदार्थ के साथ मिलाया जाता है, और मिश्रण में लक्ष्य पदार्थ और न्यूक्लिक एसिड का एक परिसर मौजूद होता है, जो न्यूक्लिक एसिड लक्ष्य पदार्थ से बंधता नहीं है उसे धोया जाता है, और न्यूक्लिक एसिड अणु जो लक्ष्य पदार्थ से बंधते हैं उन्हें अलग किया जाता है, और न्यूक्लिक एसिड अणुओं को स्क्रीनिंग के अगले दौर के लिए पीसीआर प्रवर्धन करने के लिए टेम्पलेट्स के रूप में उपयोग किया जाता है। बार-बार सेलेक्स स्क्रीनिंग और प्रवर्धन के माध्यम से, कुछ डीएनए या आरएनए अणु जो लक्ष्य पदार्थ से बंधते नहीं हैं या लक्ष्य पदार्थ के लिए कम या मध्यम आत्मीयता रखते हैं उन्हें धोया जाएगा, और एप्टामर, यानी लक्ष्य पदार्थ के लिए उच्च आत्मीयता वाले डीएनए या आरएनए को बहुत बड़ी यादृच्छिक लाइब्रेरी से अलग किया जाएगा, और उनकी शुद्धता SELEX प्रक्रिया के साथ बढ़ेगी, और अंततः वे लाइब्रेरी के एक बड़े हिस्से पर कब्जा कर लेंगे।

न्यूक्लिक एसिड एप्टामर्स की सेलेक्स स्क्रीनिंग की प्रक्रिया रासायनिक रूप से संश्लेषित यादृच्छिक ऑलिगोन्युक्लियोटाइड लाइब्रेरी की असेंबली से शुरू होती है। यादृच्छिक ऑलिगोन्युक्लियोटाइड लाइब्रेरी में बड़ी लाइब्रेरी क्षमता होती है। उच्च विविधता इसका महत्वपूर्ण लाभ है। सैद्धांतिक रूप से, यदि ऑलिगोन्युक्लियोटाइड में यादृच्छिक अनुक्रम में n बेस होते हैं, तो लाइब्रेरी क्षमता 4n होती है। यदि हम कृत्रिम संशोधन लाइब्रेरी पर विचार करते हैं, तो यह यादृच्छिक अनुक्रमों की विविधता को बढ़ाएगा। वर्तमान में, SELEX प्रयोगों में आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले ऑलिगोन्युक्लियोटाइड के यादृच्छिक अनुक्रमों की लंबाई आम तौर पर 30 बेस होती है, और लाइब्रेरी क्षमता 10^18 जितनी अधिक हो सकती है। उच्च-आत्मीयता वाले लिगैंड की सेलेक्स स्क्रीनिंग के लिए लाइब्रेरी क्षमता महत्वपूर्ण है। हालाँकि, चूँकि सिंथेटिक लाइब्रेरी की सांद्रता निश्चित है, इसलिए बहुत लंबे यादृच्छिक अनुक्रम लाइब्रेरी में प्रत्येक ऑलिगोन्युक्लियोटाइड की प्रचुरता को कम कर देंगे, जिससे किसी विशिष्ट एप्टामर के लिए सेलेक्स स्क्रीनिंग की संभावना कम हो जाएगी। आम तौर पर, सेलेक्स स्क्रीनिंग के पहले दौर में 10 ^ 13 ~ 10 ^ 15 की लाइब्रेरी क्षमता व्यावहारिक जरूरतों को पूरा कर सकती है।

चित्र 1 SELEX तकनीकी प्रक्रिया