एप्टामर संश्लेषण की तकनीकी प्रक्रिया

मौलिक सिद्धांत और तकनीकी प्रक्रिया

न्यूक्लिक अम्ल एप्टामर संश्लेषण तकनीक की प्रक्रिया यह है कि एकल-रज्जुक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स के एक संग्रह को इन विट्रो में रासायनिक रूप से संश्लेषित किया जाता है, लक्ष्य पदार्थ के साथ मिलाया जाता है, और इस मिश्रण में लक्ष्य पदार्थ और न्यूक्लिक अम्ल का एक संकुल मौजूद होता है। जो न्यूक्लिक अम्ल लक्ष्य पदार्थ से बंधता नहीं है उसे अलग कर दिया जाता है, और जो न्यूक्लिक अम्ल अणु लक्ष्य पदार्थ से बंधते हैं उन्हें पृथक कर दिया जाता है, और अगले दौर की स्क्रीनिंग के लिए पीसीआर प्रवर्धन करने हेतु न्यूक्लिक अम्ल अणुओं का उपयोग टेम्पलेट के रूप में किया जाता है। बार-बार सेलेक्स स्क्रीनिंग और प्रवर्धन के माध्यम से, कुछ डीएनए या आरएनए अणु जो लक्ष्य पदार्थ से बंधते नहीं हैं या जिनकी लक्ष्य पदार्थ के लिए कम या मध्यम आत्मीयता है, उन्हें धो दिया जाएगा, और एप्टामर, अर्थात, लक्ष्य पदार्थ के लिए उच्च आत्मीयता वाले डीएनए या आरएनए, बहुत बड़े यादृच्छिक संग्रह से अलग कर दिए जाएँगे, और उनकी शुद्धता सेलेक्स प्रक्रिया के साथ बढ़ेगी, और अंततः वे संग्रह के एक बड़े हिस्से पर कब्जा कर लेंगे।

न्यूक्लिक अम्ल एप्टामर्स की सेलेक्स स्क्रीनिंग की प्रक्रिया रासायनिक रूप से संश्लेषित यादृच्छिक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड लाइब्रेरी के संयोजन से शुरू होती है। यादृच्छिक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड लाइब्रेरी की लाइब्रेरी क्षमता बहुत अधिक होती है। उच्च विविधता इसका एक महत्वपूर्ण लाभ है। सैद्धांतिक रूप से, यदि किसी ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड में यादृच्छिक अनुक्रम में n क्षार होते हैं, तो लाइब्रेरी क्षमता 4n होती है। यदि हम कृत्रिम रूप से संशोधित लाइब्रेरी पर विचार करें, तो यह यादृच्छिक अनुक्रमों की विविधता को बढ़ा देगा। वर्तमान में, SELEX प्रयोगों में आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड के यादृच्छिक अनुक्रमों की लंबाई आमतौर पर 30 क्षार होती है, और लाइब्रेरी क्षमता 10^18 जितनी अधिक हो सकती है। उच्च-सम्बन्धी लिगैंड्स की सेलेक्स स्क्रीनिंग के लिए लाइब्रेरी क्षमता महत्वपूर्ण है। हालाँकि, चूँकि संश्लेषित लाइब्रेरी की सांद्रता निश्चित होती है, इसलिए बहुत लंबे यादृच्छिक अनुक्रम लाइब्रेरी में प्रत्येक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड की प्रचुरता को कम कर देंगे, जिससे किसी विशिष्ट एप्टामर के लिए सेलेक्स स्क्रीनिंग की संभावना कम हो जाएगी। आम तौर पर, सेलेक्स स्क्रीनिंग के पहले दौर में 10^13 ~ 10^15 की लाइब्रेरी क्षमता व्यावहारिक जरूरतों को पूरा कर सकती है।

चित्र 1 SELEX तकनीकी प्रक्रिया