एप्टामर संश्लेषण की तकनीकी प्रक्रिया

मूलभूत सिद्धांत और तकनीकी प्रक्रिया

न्यूक्लिक एसिड एप्टामर संश्लेषण तकनीक की प्रक्रिया में, एकल-स्ट्रैंडेड ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स की एक लाइब्रेरी को रासायनिक रूप से इन विट्रो संश्लेषित किया जाता है, लक्ष्य पदार्थ के साथ मिलाया जाता है, और मिश्रण में लक्ष्य पदार्थ और न्यूक्लिक एसिड का एक कॉम्प्लेक्स मौजूद होता है। जो न्यूक्लिक एसिड लक्ष्य पदार्थ से नहीं जुड़ता है, उसे धोकर अलग कर दिया जाता है, और जो न्यूक्लिक एसिड अणु लक्ष्य पदार्थ से जुड़ते हैं, उन्हें पृथक कर लिया जाता है। इन न्यूक्लिक एसिड अणुओं का उपयोग अगले चरण की स्क्रीनिंग के लिए पीसीआर प्रवर्धन हेतु टेम्पलेट के रूप में किया जाता है। बार-बार सेलेक्स स्क्रीनिंग और प्रवर्धन के माध्यम से, कुछ डीएनए या आरएनए अणु जो लक्ष्य पदार्थ से नहीं जुड़ते हैं या लक्ष्य पदार्थ के लिए कम या मध्यम आत्मीयता रखते हैं, उन्हें धोकर अलग कर दिया जाता है, और एप्टामर, अर्थात् लक्ष्य पदार्थ के लिए उच्च आत्मीयता वाले डीएनए या आरएनए, विशाल यादृच्छिक लाइब्रेरी से पृथक कर लिए जाते हैं। सेलेक्स प्रक्रिया के साथ उनकी शुद्धता बढ़ती जाती है, और अंततः वे लाइब्रेरी का एक बड़ा हिस्सा घेर लेते हैं।

न्यूक्लिक एसिड एप्टामर्स की सेलेक्स स्क्रीनिंग की प्रक्रिया रासायनिक रूप से संश्लेषित यादृच्छिक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड लाइब्रेरी के संयोजन से शुरू होती है। यादृच्छिक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड लाइब्रेरी की लाइब्रेरी क्षमता बहुत अधिक होती है। इसकी उच्च विविधता इसका एक महत्वपूर्ण लाभ है। सैद्धांतिक रूप से, यदि किसी ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड में यादृच्छिक अनुक्रम में n बेस होते हैं, तो लाइब्रेरी क्षमता 4n होती है। यदि हम कृत्रिम रूप से संशोधित लाइब्रेरी पर विचार करें, तो यह यादृच्छिक अनुक्रमों की विविधता को बढ़ाएगी। वर्तमान में, सेलेक्स प्रयोगों में आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड के यादृच्छिक अनुक्रमों की लंबाई सामान्यतः 30 बेस होती है, और लाइब्रेरी क्षमता 10^18 तक हो सकती है। उच्च-आत्मीयता वाले लिगेंड की सेलेक्स स्क्रीनिंग के लिए लाइब्रेरी क्षमता अत्यंत महत्वपूर्ण है। हालांकि, चूंकि संश्लेषित लाइब्रेरी की सांद्रता निश्चित होती है, इसलिए बहुत लंबे यादृच्छिक अनुक्रम लाइब्रेरी में प्रत्येक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड की प्रचुरता को कम कर देंगे, जिससे किसी विशिष्ट एप्टामर की सेलेक्स स्क्रीनिंग की संभावना कम हो जाएगी। सामान्यतः, चयन प्रक्रिया के पहले दौर में 10^13~10^15 की पुस्तकालय क्षमता व्यावहारिक आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है।

चित्र 1. सेलेक्स तकनीकी प्रक्रिया