द्विविशिष्ट एंटीबॉडी विकास प्लेटफ़ॉर्म

अल्फा लाइफटेक ग्राहकों को गुणवत्ता सुनिश्चित एंटीबॉडी खोज और रिकॉम्बिनेंट प्रोटीन उत्पाद और सेवाएं प्रदान कर सकती है।

द्विविशिष्ट एंटीबॉडी विकास प्लेटफ़ॉर्म

अल्फा लाइफटेक ग्राहकों को गुणवत्तापूर्ण एंटीबॉडी खोज और रिकॉम्बिनेंट प्रोटीन उत्पाद एवं सेवाएं प्रदान कर सकता है। हम उच्च प्रभावकारिता, मजबूत विशिष्टता और अच्छी स्थिरता वाले एंटीबॉडी तैयार कर सकते हैं। अल्फा लाइफटेक के पास विभिन्न प्रकार के एंटीबॉडी शुद्धिकरण उपकरण हैं, जो खरगोश, भेड़, मुर्गी और चूहे के मोनोक्लोनल एंटीबॉडी जैसे विभिन्न स्रोतों से एंटीबॉडी शुद्धिकरण सेवाएं, साथ ही प्रोटीन ए/जी एफिनिटी शुद्धिकरण सेवाएं और एंटीबॉडी पृथक्करण एवं शुद्धिकरण सेवाएं प्रदान कर सकते हैं। एंटीबॉडी खोज प्लेटफॉर्म, प्रोटीन प्लेटफॉर्म आदि के व्यापक प्लेटफॉर्म सिस्टम निर्माण के आधार पर, हम एंटीबॉडी उत्पादन की अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम सेवाएं प्रदान करते हैं, और एंटीबॉडी तैयारी, द्विविशिष्ट एंटीबॉडी शुद्धिकरण और एंटीबॉडी पृथक्करण एवं शुद्धिकरण, एंटीबॉडी अनुक्रमण, एंटीबॉडी सत्यापन आदि से संबंधित तकनीकी सेवाएं प्रदान कर सकते हैं, जिनका उपयोग द्विविशिष्ट एंटीबॉडी थेरेपी के लिए किया जा सकता है।

मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज़ एक एकल बी कोशिका द्वारा उत्पादित इम्युनोग्लोबुलिन हैं जिनमें एंटीजन या एपिटोप के लिए उच्च विशिष्टता होती है। मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज़ का उत्पादन प्रारंभ में हाइब्रिडोमा तकनीक का उपयोग करके माउस एंटीबॉडीज़ के उत्पादन के लिए किया गया था। विशेष रूप से, प्रतिरक्षित चूहों की प्लीहा कोशिकाओं को मनुष्यों या चूहों की मायलोमा कोशिकाओं के साथ संलयन करके हाइब्रिडोमा कोशिकाएं बनाई जाती हैं, जो विशिष्ट एंटीबॉडीज़ स्रावित करती हैं। शुद्धिकरण के बाद उत्पन्न माउस मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज़ का मुख्य रूप से पशु अनुसंधान और रोग निदान में उपयोग किया जाता है। हालांकि, मानव शरीर विदेशी माउस प्रोटीन के प्रति प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया उत्पन्न करता है, इसलिए माउस मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज़ के उत्पादन के नैदानिक अनुप्रयोग में महत्वपूर्ण सीमाएं हैं। बाद में, लोगों ने चूहों से मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज़ तैयार करने के लिए "मानवीकरण" का उपयोग किया, और उनकी प्रतिरक्षाजनकता को कम करने के लिए मानव इम्युनोग्लोबुलिन के एक स्थिर क्षेत्र को शामिल करने के लिए माउस एंटीबॉडीज़ को संशोधित करने के लिए आनुवंशिक इंजीनियरिंग तकनीक का उपयोग किया। इस प्रकार की एंटीबॉडी को मानवीकृत मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के रूप में भी जाना जाता है। इसके अलावा, मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज़ के उत्पादन के लिए मानव कोशिकाओं का उपयोग करने को संपूर्ण मानव मोनोक्लोनल एंटीबॉडी तैयारी कहा जाता है। मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज़ का व्यापक रूप से जैव चिकित्सा और नैदानिक अनुप्रयोगों में उपयोग किया जाता है। चिकित्सा अनुसंधान में, मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग इम्यूनोमॉड्यूलेटर के रूप में किया जा सकता है, चिकित्सीय मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग कैंसर की कीमोथेरेपी और वायरल संक्रमण के उपचार के लिए किया जा सकता है, और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी संयुग्मों का विकास मुख्य रूप से कैंसर के उपचार के लिए किया जाता है।

द्विविशिष्ट एंटीबॉडी का परिचय

1960 में, द्विविशिष्ट एंटीबॉडी की अवधारणा प्रस्तावित की गई थी। द्विविशिष्ट एंटीबॉडी, जिन्हें द्विविशिष्ट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी भी कहा जाता है, आनुवंशिक अभियांत्रिकी तकनीक का उपयोग करके कृत्रिम रूप से संश्लेषित एंटीबॉडी हैं। एक इंजीनियर कृत्रिम एंटीबॉडी के रूप में, द्विविशिष्ट एंटीबॉडी आमतौर पर IgG उपवर्ग से संबंधित होती हैं और इनमें CD3 उप-इकाई को लक्षित करने वाला एक प्रतिजन बंधन खंड होता है। द्विविशिष्ट एंटीबॉडी में दो विशिष्ट प्रतिजन बंधन स्थल होते हैं जो एक साथ दो अलग-अलग प्रतिजनों, या किसी प्रतिजन के दो अलग-अलग उप-बिंदुओं को बांध सकते हैं और पहचान सकते हैं। मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की तुलना में, द्विविशिष्ट एंटीबॉडी में एक अतिरिक्त विशिष्ट प्रतिजन बंधन स्थल होता है, जिससे इनकी विशिष्टता और लक्ष्यीकरण क्षमता अधिक मजबूत होती है, जो ट्यूमर कोशिकाओं को अधिक सटीक रूप से लक्षित कर सकती है और लक्ष्य से इतर विषाक्तता को कम कर सकती है। द्विविशिष्ट एंटीबॉडी एक साथ कई जैविक कार्य कर सकती हैं, जैसे प्रतिरक्षा कोशिकाओं को सक्रिय करना, संकेतन मार्गों को अवरुद्ध करना और सीधे ट्यूमर कोशिकाओं को मारना। प्रारंभिक द्विविशिष्ट एंटीबॉडी मुख्य रूप से रासायनिक संयुग्मन या कोशिका संलयन के माध्यम से तैयार की जाती थीं, लेकिन यादृच्छिक संयोजन और लक्ष्य संयोजन को अलग करने में कठिनाई के कारण इस विधि की प्रगति धीमी रही होगी। आनुवंशिक अभियांत्रिकी प्रौद्योगिकी के निरंतर विकास के साथ, कई नए प्रौद्योगिकी प्लेटफॉर्म विकसित किए गए हैं, जैसे कि नॉट्स इन होल्स (केआईआईएच), क्रॉसमैब, डीवीडी आईजी, आदि। ये प्लेटफॉर्म भारी श्रृंखला और हल्की श्रृंखला के बेमेल जैसी समस्याओं को प्रभावी ढंग से हल करते हैं, और द्विविशिष्ट एंटीबॉडी की एकरूपता और उपज में सुधार करते हैं।

चित्र 1: ऑन्कोलॉजी के नैदानिक परीक्षणों में द्विविशिष्ट एंटीबॉडी (बीएसएबीएस) के लिए प्रस्तावित क्रियाविधि का सरलीकृत योजनाबद्ध अवलोकन।(चित्र स्रोत: कैंसर विज्ञान में द्विविशिष्ट एंटीबॉडी और एंटीबॉडी संरचनाओं की समीक्षा और नैदानिक चुनौतियाँ - साइंसडायरेक्ट)

द्विविशिष्ट एंटीबॉडी उत्पादन प्रौद्योगिकी

द्विविशिष्ट एंटीबॉडी उत्पादन की मुख्य विधियों में रासायनिक युग्मन, चार स्रोत हाइब्रिडोमा और आनुवंशिक अभियांत्रिकी द्वारा एंटीबॉडी निर्माण शामिल हैं। इनमें से, रासायनिक युग्मन विधि में थैलिमाइड और डाइथियोएसिलबेंजोइक अम्ल जैसे रासायनिक युग्मन एजेंटों का उपयोग करके दो पूर्ण IgG या दो F(ab')2 एंटीबॉडी खंडों को द्विविशिष्ट एंटीबॉडी में जोड़ा जाता है। यह विधि सरल और संचालन में आसान है, लेकिन यह प्रतिजन बंधन स्थल को नुकसान पहुंचा सकती है, एंटीबॉडी गतिविधि को कम कर सकती है, और युग्मन एजेंट में स्वयं भी कुछ हद तक कैंसरजनकता होती है। चार स्रोत हाइब्रिडोमा विधि दो अलग-अलग हाइब्रिडोमा कोशिका लाइनों से दैहिक कोशिकाओं के संलयन पर आधारित है ताकि संबंधित माउस IgG को व्यक्त किया जा सके। आनुवंशिक अभियांत्रिकी तकनीक के माध्यम से, एंटीबॉडी को आनुवंशिक रूप से संशोधित करके द्विविशिष्ट एंटीबॉडी बनाया जा सकता है। दो अलग-अलग मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का निर्माण किया गया, और दोनों एंटीबॉडी के Fab खंडों या भारी श्रृंखला और हल्की श्रृंखला परिवर्तनीय क्षेत्रों को अलग-अलग काटा गया। क्रॉस-लिंकिंग प्रतिक्रिया या श्रृंखला पुनर्संयोजन तकनीक के माध्यम से, दोनों खंडों को मिलाकर एक द्विविशिष्ट एंटीबॉडी बनाया गया। यद्यपि आनुवंशिक अभियांत्रिकी प्रौद्योगिकी अपेक्षाकृत जटिल है, फिर भी वर्तमान में यह एंटीबॉडी की संरचना और कार्य को समायोजित करने के लिए द्विविशिष्ट एंटीबॉडी उत्पादन की सबसे अधिक प्रचलित विधि है। द्विविशिष्ट एंटीबॉडी डिजाइन करते समय, एंटीबॉडी की क्रॉस-रिएक्टिविटी के सिद्धांत का उपयोग किया जा सकता है, लेकिन एंटीबॉडी की क्रॉस-रिएक्टिविटी से गैर-विशिष्ट प्रतिक्रियाएं हो सकती हैं, इसलिए द्विविशिष्ट एंटीबॉडी थेरेपी जैसे व्यावहारिक अनुप्रयोगों में इसका सावधानीपूर्वक ध्यान रखा जाना चाहिए।

द्विविशिष्ट एंटीबॉडी का शुद्धिकरण

द्विविशिष्ट एंटीबॉडी शुद्धिकरण उच्च शुद्धता वाले लक्षित एंटीबॉडी को पृथक करने और शुद्ध करने की प्रक्रिया है। कुछ घुलनशील अशुद्धियों को दूर करने के लिए सेंट्रीफ्यूगेशन और डीप फिल्ट्रेशन नामक दो विधियों का उपयोग किया जाता है। लक्षित द्विविशिष्ट एंटीबॉडी को प्रारंभ में एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी द्वारा प्राप्त किया जाता है। IgG जैसे द्विविशिष्ट एंटीबॉडी के लिए प्रोटीन A एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी का उपयोग किया जाता है, जबकि गैर-IgG जैसे द्विविशिष्ट एंटीबॉडी के लिए लाइट चेन आधारित एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी का उपयोग किया जा सकता है। इसके बाद, एंटीबॉडी को कम pH स्थितियों में एक निश्चित अवधि के लिए इनक्यूबेट किया जाता है, जिससे वायरस लिफाफे की सतह पर प्रोटीन संरचना बाधित हो जाती है, और इस प्रकार कोशिकाओं को संक्रमित करने की क्षमता खो देती है। होस्ट सेल प्रोटीन (HCP) जैसी अशुद्धियों को और अधिक हटाने के लिए मध्यवर्ती डीप फिल्ट्रेशन किया जाता है। आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी जैसी विधियों द्वारा एंटीबॉडी की शुद्धता में सुधार किया जाता है, और किसी भी अवशिष्ट वायरस को नैनोफिल्ट्रेशन या अल्ट्राफिल्ट्रेशन तकनीकों द्वारा हटा दिया जाता है। अंत में, नमूने को सांद्रित किया जाता है और एक उपयुक्त फॉर्मूलेशन बफर के साथ प्रतिस्थापित किया जाता है।

द्विविशिष्ट एंटीबॉडी उत्पादन सेवा कार्यप्रवाह

चरण	सेवा सामग्री	समय
जीन संश्लेषण	अनुक्रमों की 3 अलग-अलग डिज़ाइन योजनाओं का निर्माण, पुनः संयोजक एंटीबॉडी डीएनए प्लास्मिड का नव-निर्माण	2-3 सप्ताह
लघु पैमाने का परीक्षण	द्विविशिष्ट एंटीबॉडी प्रोटीन का उत्पादन → स्तनधारी कोशिका लाइनों में छोटे पैमाने पर अभिव्यक्ति → एसडीएस-पेज द्वारा सत्यापन → एलिसा द्वारा पुनः संयोजक प्रोटीन प्रतिजनों के साथ बंधन विश्लेषण → क्लोनों की मूल एंटीबॉडी के साथ तुलना	5-6 सप्ताह
पहचान करना	पहले दो पूर्ण-लंबाई वाले द्विविशिष्ट एंटीबॉडी का अभिव्यंजन → ELISA द्वारा बंधन विश्लेषण → एंटी-माउस एंटीबॉडी द्वारा पहचाने जाने वाले एंटीबॉडी का ELISA मूल्यांकन	1 सप्ताह
एंटीबॉडी उत्पादन	बड़े पैमाने पर एंटीबॉडी उत्पादन	3-4 सप्ताह

हमारे लाभ

हम एंटीबॉडी उत्पादन की अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम सेवाओं को कवर करते हैं, और एंटीबॉडी की तैयारी, बिस्पेशिफिक एंटीबॉडी शुद्धिकरण और एंटीबॉडी पृथक्करण और शुद्धिकरण, एंटीबॉडी अनुक्रमण, एंटीबॉडी सत्यापन आदि से संबंधित तकनीकी सेवाएं प्रदान कर सकते हैं, जिनका उपयोग बिस्पेशिफिक एंटीबॉडी थेरेपी के लिए किया जा सकता है।

उच्च अभिव्यक्ति

CHO कोशिकाओं में उच्च प्रोटीन अभिव्यक्ति।
स्थिर भंडारण

37 डिग्री सेल्सियस पर सीरम में 2 सप्ताह से अधिक समय तक।
घुलनशीलता की कोई समस्या नहीं है

>30 मिलीग्राम/मिलीलीटर
स्थिर कोशिका रेखाएं

कई द्विविशिष्ट एंटीबॉडी को मान्य करने के लिए ट्यूमर प्रतिजनों वाली कई स्थिर कोशिका लाइनें विकसित की गई हैं।