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फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा

फेज डिस्प्ले स्क्रीनिंग प्रौद्योगिकी का प्रयोग एंटीजन एपिटोप्स के अध्ययन के अलावा, कोशिका संकेत पारगमन, प्रोटीन पहचान स्थलों और औषधि विकास जैसे क्षेत्रों में भी किया गया है।
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फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा

अल्फा लाइफटेक कई वर्षों से फेज डिस्प्ले तकनीक में गहराई से शामिल है। इसने एक बेहतरीन स्थिर फेज डिस्प्ले तकनीक प्लेटफ़ॉर्म बनाया है जो वैज्ञानिक अनुसंधान समय या परियोजना अनुसंधान के लिए समय बचाता है और बाद के उत्पादन को सुविधाजनक बनाता है। अल्फा लाइफटेक ग्राहकों को वीएचएच एंटीबॉडी उत्पादन, एससीएफवी एंटीबॉडी उत्पादन, फैब एंटीबॉडी उत्पादन जैसी सेवाएं भी प्रदान कर सकता है।
अल्फा लाइफटेक के पास एंटीबॉडी लाइब्रेरी के निर्माण और उत्पादन को सुनिश्चित करने के लिए एक व्यापक M13/T7 फेज डिस्प्ले प्लेटफ़ॉर्म है। हम आपकी ज़रूरतों को पूरा करने के लिए एंटीबॉडी scFv उत्पादन और हाई-थ्रूपुट एंटीबॉडी स्क्रीनिंग जैसी अनुकूलित सेवाएँ भी प्रदान कर सकते हैं।

फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया

फेज लाइब्रेरी निर्माण की प्रक्रिया इस प्रकार है: पीसीआर प्रवर्धन के लिए विशिष्ट प्राइमर डिज़ाइन किए जाते हैं जो उत्पादों को प्राप्त करते हैं, जिन्हें टी7/एम13 फेज वेक्टर के साथ एंजाइम-लिगेटेड किया जाता है, और पुनः संयोजक फेज प्लास्मिड का सफलतापूर्वक निर्माण किया जाता है। पुनः संयोजक फेज प्लास्मिड को टीजी1 रिसेप्टर कोशिकाओं में बदल दिया गया, फिर उपयुक्त एंटीबायोटिक युक्त माध्यम पर लेपित किया गया, और ट्रांसफॉर्मर की स्क्रीनिंग के बाद विस्तारित संस्कृति का प्रदर्शन किया गया। संस्कृति के कई दौर के बाद, फेज बैक्टीरिया में प्रतिकृति समय को दोहराता है और सफलतापूर्वक लक्ष्य प्रोटीन या पॉलीपेप्टाइड को व्यक्त करता है। फिर कुछ अशुद्धियों और अनबाउंड फेज को हटाने के लिए फेज लाइब्रेरी को शुद्ध किया जाता है।

फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग विधियाँ

फेज डिस्प्ले एंटीबॉडी उत्पादन की सफलता मुख्य रूप से एंटीबॉडी फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी पर निर्भर करती है, और फेज पैनिंग के सामान्य तरीके सॉलिड-फ़ेज़ और लिक्विड-फ़ेज़ स्क्रीनिंग हैं। सॉलिड-फ़ेज़ एंटीजन स्क्रीनिंग एंटीबॉडी फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी प्राप्त करने के लिए 3-4 राउंड के रेफरेंस के माध्यम से विशिष्ट एंटीबॉडी को समृद्ध करती है; लिक्विड-फ़ेज़ एंटीजन स्क्रीनिंग बायोटिन-लेबल वाले लक्ष्य और एंटीबॉडी फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी को इनक्यूबेट करके और चुंबकीय मोतियों का उपयोग करके बंधे हुए फेज को कैप्चर करके की जाती है। सॉलिड-फ़ेज़ स्क्रीनिंग में अधिक एंटीजन की खपत होती है और कुछ एंटीजन एपिटोप नष्ट हो जाते हैं। लिक्विड-फ़ेज़ स्क्रीनिंग की विशेषता उच्च दक्षता और संवर्धन है, लेकिन प्राप्त एंटीबॉडी कम विशिष्ट हैं। फेज पैनिंग की विधि प्रयोगात्मक जरूरतों पर निर्भर करती है, जिनमें से सभी का फेज डिस्प्ले एंटीबॉडी उत्पादन के प्रभाव पर एक निश्चित प्रभाव पड़ेगा।

उच्च थ्रूपुट एंटीबॉडी स्क्रीनिंग

आधुनिक चिकित्सा में एंटीबॉडी का विकास तेजी से हुआ है। एंटीबॉडी विकास के विभिन्न तरीके मौजूद हैं, लेकिन चिकित्सा विज्ञान में हाई थ्रूपुट एंटीबॉडी स्क्रीनिंग का अधिक उपयोग किया जाता है। इस प्रक्रिया से बड़ी मात्रा में एंटीबॉडी रिपर्टरी विविधता प्राप्त की जा सकती है। पारंपरिक एंटीबॉडी लाइब्रेरी स्क्रीनिंग विधियों के साथ संयोजन करके फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी की स्क्रीनिंग गुणवत्ता में सुधार किया जा सकता है। जैविक स्क्रीनिंग के बाद, एंटीबॉडी को कम-थ्रूपुट एलिसा या उच्च-थ्रूपुट एंटीबॉडी स्क्रीनिंग द्वारा चिह्नित किया जा सकता है।
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चित्र 1 - फेज एंटीबॉडी लाइब्रेरी के निर्माण से लेकर एंटीजन के प्रति उच्च आकर्षण और कम प्रतिरक्षाजनकता वाले मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के उत्पादन तक की घटनाओं के अनुक्रम को रेखांकित करने वाला प्रवाह चार्ट।(संदर्भ स्रोत:एंटीबॉडी दवा खोज के लिए एक शक्तिशाली मंच के रूप में फेज डिस्प्ले प्रौद्योगिकी- पीएमसी (nih.gov))

एंटीबॉडी फेज डिस्प्ले स्क्रीनिंग के लिए सावधानियांसावधानियां

बफर विचार

बफर्स ​​के चयन में लक्ष्य की स्थिरता, बंधन माइक्रोएनवायरनमेंट और वास्तविक अनुप्रयोग परिदृश्य में न्यूनतम गैर-विशिष्ट बंधन को ध्यान में रखना चाहिए। असंबंधित प्रोटीन, गैर-आयनिक डिटर्जेंट और शारीरिक नमक सांद्रता पृष्ठभूमि को कम करने के लिए अनुकूल है। अन्य स्थितियाँ भी हैं, जैसे कि कुछ लक्ष्यों को बफर में द्विसंयोजक धनायनों या अन्य सहकारकों को जोड़ने की आवश्यकता हो सकती है, प्रोटीन सहकारकों को लक्ष्य के साथ सह-निर्धारित किया जा सकता है, उन्हें सॉर्टिंग बफर में जोड़ा जा सकता है, और यहां तक ​​कि लक्ष्य को पकड़ने के साधन के रूप में भी इस्तेमाल किया जा सकता है।

दबाव संबंधी विचार

सामान्य चयन दबाव विचारों में लक्ष्य अणुओं की सांद्रता, बंधन समय, धुलाई की तीव्रता आदि शामिल हैं। चयन दबाव बढ़ाने के लिए अन्य तकनीकों में विकृतीकरणकों (जैसे एसिड, यूरिया और ग्वानिडीन), कार्बनिक सॉल्वैंट्स का उपयोग, तापमान में वृद्धि, या धुलाई बफर में प्रतिस्पर्धी लिगैंड्स या लक्ष्यों की सांद्रता में वृद्धि शामिल है।
उनमें से, स्क्रीनिंग का पहला दौर महत्वपूर्ण है। स्क्रीनिंग का पहला दौर गैर-विशिष्ट क्लोनों को हटाते हुए निर्मित लाइब्रेरी से यथासंभव अधिक सकारात्मक क्लोनों को पकड़ना है। लाइब्रेरी की विविधता को बनाए रखने के लिए बड़ी संख्या में बंधे हुए फेज को पकड़ने के लिए छिद्रपूर्ण-लेपित लक्ष्य या बड़ी संख्या में घुलनशील लक्ष्यों का उपयोग किया जाना चाहिए। स्क्रीनिंग के बाद के दौर में, संवर्धन, कई धुलाई और धुलाई के समय में वृद्धि के साथ चयन दबाव बढ़ाया जाना चाहिए, उच्च आत्मीयता वाले क्लोनों की स्क्रीनिंग की जा सकती है।

नकारात्मक स्क्रीनिंग रणनीति

एंटीजन टैग और वाहक सामग्री स्क्रीनिंग प्रक्रिया एंटीजन संयुग्मों पर सभी पदार्थों की स्क्रीनिंग करना है, जैसे टैग, फ्यूजन प्रोटीन और सहायक सब्सट्रेट। गैर-लक्ष्यों की नकारात्मक स्क्रीनिंग लक्ष्य एंटीजन के अलावा अन्य एंटीबॉडी के संवर्धन को सीमित कर सकती है।
संपूर्ण कोशिकाओं, लाइपोसोम्स, नैनो-फॉस्फोलिपिड डिस्क और वीएलपी को ट्रांसफ़ेक्टेड सेल लाइनों की स्क्रीनिंग करते समय नकली ट्रांसफ़ेक्टेड कोशिकाओं या गैर-ट्रांसफ़ेक्टेड कोशिकाओं का उपयोग करके नकारात्मक रूप से जांचा जा सकता है।
जटिल प्रतिजन मिश्रणों को हटाना अज्ञात या जटिल लक्ष्य अणुओं, जैसे कि संपूर्ण कोशिकाओं या अशुद्ध प्रोटीनों के लिए सख्त नकारात्मक स्क्रीनिंग की जा सकती है।
प्रतिजनों के विशिष्ट स्थलों के विरुद्ध एंटीबॉडी की रणनीति, एक है लिगैंड की उच्च सांद्रता जोड़कर एंटीबॉडी को निकालना, जो लिगैंड के साथ प्रतिस्पर्धा कर सके, तथा दूसरी है एंटीबॉडी को अवरुद्ध करना।

फेज डिस्प्ले का अनुप्रयोग

*आधुनिक चिकित्सा में एंटीबॉडी की खोज का महत्व लगातार बढ़ता जा रहा है। एंटीबॉडी की खोज के लिए अलग-अलग तरीके मौजूद हैं, लेकिन फेज डिस्प्ले तकनीक का इस्तेमाल चिकित्सा विज्ञान में ज़्यादा किया जाता है। 1990 से, फेज लाइब्रेरी बनाने के लिए अलग-अलग एंटीबॉडी फ़ॉर्मेट का इस्तेमाल किया गया है, जिसमें VHs, VHHs, scFvs, डायबॉडीज़ और Fab एंटीबॉडी शामिल हैं।
*फेज़ पेप्टाइड लाइब्रेरी प्रोटीन एपिटोप्स के अनुक्रम का तेजी से निर्धारण करने की अनुमति देती है और एपिटोप्स और एंटीजन रिसेप्टर्स के बीच बातचीत की जांच के लिए एक शक्तिशाली उपकरण बन गई है
*एंटीबॉडी टुकड़ों को M13 फेज के G3P से जोड़ दिया जाता है, तथा एंटीबॉडी टुकड़े को कूटबद्ध करने वाले जीनों की बड़ी संख्या को क्लोन करके, बड़ी संख्या में फेज डिस्प्ले एंटीबॉडी लाइब्रेरी उत्पन्न की जा सकती है, जिसमें से अनेक विविध एंटीबॉडी का चयन किया जा सकता है।
*T7 फेज डिस्प्ले प्रणाली के कई फायदे हैं, जिनमें सरलता, उच्च सुरक्षा, स्थिरता, आसान भंडारण और परिवहन शामिल हैं, इसलिए इस प्रणाली का उपयोग निवारक और चिकित्सीय टीकों में किया जाता है।
*T7 फेज डिस्प्ले सिस्टम विभिन्न एंटीजन का पता लगा सकता है, जैसे रोगजनक सूक्ष्मजीवों के सतही एंटीजन और कैंसर एंटीजन।
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