प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रिया विश्लेषण सेवा

अल्फा लाइफटेक ग्राहकों की विभिन्न प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए प्रोटीन परख, प्रोटीन अंतःक्रिया विश्लेषण, प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रिया परख (सीओ-आईपी, वेस्टर्न ब्लॉट, क्रोमेटिन इम्यूनोप्रिसिपिटेशन परख) और प्रोटीन कार्य परख जैसी सेवाएं भी प्रदान कर सकता है।

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प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रिया विश्लेषण सेवा

अल्फा लाइफटेक कई वर्षों से प्रोटीन परीक्षणों में गहराई से संलग्न है, इसने प्रोटीन कार्य परीक्षण के लिए एक ठोस मंच बनाया है, और प्रोटीन अंतःक्रिया को सत्यापित करने के लिए विभिन्न तकनीकी साधनों में महारत हासिल की है, जो स्थिर परिणाम प्रदान करते हुए वैज्ञानिक अनुसंधान या परियोजना अनुसंधान समय को बचा सकता है।

प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रिया परख का परिचय

किसी भी जीव-जंतु में प्रोटीन सबसे महत्वपूर्ण क्रियाशील अणु होते हैं, जो आनुवंशिक पदार्थों में संग्रहित निर्देशों का पालन करते हैं। अक्सर, प्रोटीन अन्य प्रोटीनों के साथ परस्पर क्रिया करके अपना कार्य करते हैं, जो कोशिका के वास्तविक संदर्भ में प्रोटीन के कार्य की जांच करने पर अधिक स्पष्ट होता है। प्रोटीनों के बीच की अंतःक्रियाओं की पहचान किसी व्यक्तिगत प्रोटीन के जैव रसायनीय अध्ययन के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण है। प्रोटीन अंतःक्रिया विश्लेषण के सामान्य प्रकार निम्नलिखित हैं:

सह-प्रतिरक्षात्मक अवक्षेपण परख

सह-इम्यूनोप्रेसिपिटेशन विधि का सिद्धांत यह है कि लक्ष्य प्रोटीन, विशिष्ट एंटीबॉडी और प्रोटीन ए/जी चुंबकीय मोतियों को इनक्यूबेशन के लिए मिलाया जाता है, चुंबकीय रैक पर चुंबकीय मोतियों के सोखने के माध्यम से अबद्ध प्रोटीन के सुपरनेटेंट को हटा दिया जाता है, और चुंबकीय मोतियों को धोकर प्रोटीन और अन्य अशुद्धियों को हटा दिया जाता है जब तक कि वे विशेष रूप से बंधे न हों।

चित्र 1. को-आईपी परख का योजनाबद्ध आरेख।(संदर्भ स्रोत: कोइम्यूनोप्रेसिपिटेशन परख - पबमेड (एनआईएच.जी.वी.वी.))

पुल-डाउन परख

पुल-डाउन परख में ज्ञात प्रोटीन को चुंबकीय मनके पर स्थिर किया जाता है और फिर पता लगाने योग्य पदार्थ को मिलाया जाता है। अंतःक्रियाशील प्रोटीनों के अधिशोषण के लिए इल्यूएंट का परीक्षण किया जाता है।

1988 में, स्मिथ एट अल. ने जीएसटी फ्यूजन प्रोटीन को शुद्ध किया, जिसे पुल-डाउन assays में लागू किया गया और इसे Gst पुल डाउन कहा जाता है, जिसका अर्थ है लक्ष्य प्रोटीन में एक जीएसटी टैग जोड़ना, GSH के माध्यम से इंटरैक्टिंग प्रोटीन को कैप्चर करना, बंधन को eluate करना और WB assays के माध्यम से इसे सत्यापित करना।

चित्र 2. जीएसटी पुल-डाउन परख का योजनाबद्ध आरेख।(संदर्भ स्रोत: इन विट्रो में PIF4 बंधन का अध्ययन करने के लिए GST पुल-डाउन परख - PubMed (nih.gov) )

उनकी पुल-डाउन विधि में निकल या कोबाल्ट जैसे धातु आयनों को माध्यम के रूप में उपयोग करना, एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी के माध्यम से प्रोटीन को शुद्ध करना और सत्यापन के लिए डब्ल्यूबी प्रयोग के माध्यम से बंधन को अलग करना शामिल है।

इसके अतिरिक्त, डीएनए पुल-डाउन (प्रोटीन डीएनए बाइंडिंग परख), आरएनए पुल-डाउन (प्रोटीन आरएनए इंटरैक्शन परख) और छोटे अणु पुल-डाउन परख भी हैं।

डीएनए पुल-डाउन (प्रोटीन डीएनए बाइंडिंग एसे) प्रोटीन के डीएनए बंधन का निर्धारण करने की एक इन विट्रो विधि है। विशिष्ट प्रोटीन लक्ष्य डीएनए से बंधते हैं या नहीं, इसका पता डब्ल्यूबी एसे द्वारा लगाया जाता है; अज्ञात डीएनए खंड प्रोटीन से बंधते हैं, और एमएस डिटेक्शन द्वारा यह ज्ञात किया जाता है कि कौन से डीएनए खंड कौन से हैं।

आरएनए पुल-डाउन (प्रोटीन आरएनए इंटरैक्शन परख) प्रोटीन से आरएनए के बंधन का निर्धारण करने की एक इन विट्रो विधि है। विशिष्ट प्रोटीन लक्षित आरएनए से बंधते हैं या नहीं, इसका पता डब्ल्यूबी परख द्वारा लगाया जाता है; अज्ञात आरएनए खंड प्रोटीन से बंधते हैं, और एमएस डिटेक्शन द्वारा इन खंडों का पता लगाया जाता है।

एसएम पुल-डाउन (स्मॉल मॉलिक्यूल पुल-डाउन एसेज़) उन लक्ष्य प्रोटीनों का पता लगा सकता है जो विशेष रूप से छोटे अणुओं से बंधते हैं, और जब इसे एमएस के साथ जोड़ा जाता है, तो छोटे अणु लक्ष्य प्रोटीनों की सटीक स्क्रीनिंग की जा सकती है, जिसे इन विट्रो लेबलिंग विधि और जैविक ऑर्थोगोनल विधि में विभाजित किया जा सकता है।

डब्ल्यूबी प्रयोग

वेस्टर्न ब्लॉट प्रयोग (जिसे वेस्टर्न ब्लॉट भी कहा जाता है) में, मूल रूप से एंटीजन और एंटीबॉडी की विशिष्ट प्रतिक्रिया होती है। इसका मूल सिद्धांत यह है कि डीनेचर्ड प्रोटीन को एसडीएस पॉलीएक्रिलामाइड जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा अलग किया जाता है और फिर झिल्ली स्थानांतरण (गीले या अर्ध-शुष्क घूर्णन) के माध्यम से ठोस अवस्था वाहक (जैसे पीवीडीएफ झिल्ली, एनसी झिल्ली) पर स्थानांतरित किया जाता है। ब्लॉकिंग (बीएसए, छाछ आदि का उपयोग करके) के बाद, प्राथमिक एंटीबॉडी को प्रोटीन से विशिष्ट रूप से जुड़ने के लिए लगाया जाता है, और फिल्म को धोने के बाद फ्लोरेसिन-लेबल वाली द्वितीयक एंटीबॉडी मिलाई जाती है। द्वितीयक एंटीबॉडी के प्राथमिक एंटीबॉडी से जुड़ने से, सब्सट्रेट रंग विकास और केमिलुमिनेसेंस द्वारा लक्ष्य प्रोटीन को देखा जा सकता है। इसका उपयोग आमतौर पर यह निर्धारित करने के लिए किया जाता है कि नमूने में कोई विशिष्ट प्रोटीन व्यक्त होता है या नहीं और इसके अभिव्यक्ति स्तर का मोटे तौर पर विश्लेषण करने के लिए किया जाता है।

प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रिया विधि तुलना

प्रोटीन पुल-डाउन एसेज़, को-आईपी एसेज़ के समान हैं और दोनों ही प्रोटीन अंतःक्रिया का पता लगाने वाले प्रयोगों के अंतर्गत आते हैं। इन दोनों विधियों में अंतर यह है कि को-आईपी एसेज़ ज्ञात प्रोटीनों के साथ अंतःक्रिया करने वाले प्रोटीनों को प्राप्त करते हैं, जिससे कुछ हद तक प्रामाणिकता तो प्राप्त होती है, लेकिन यह पुष्टि नहीं हो पाती कि अंतःक्रिया करने वाले प्रोटीन प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष रूप से अंतःक्रिया करते हैं। पुल-डाउन एसेज़ ज्ञात प्रोटीन के साथ अंतःक्रिया करने वाले अज्ञात प्रोटीन का पता लगाते हैं। यह सीधे तौर पर पुष्टि कर सकता है कि ज्ञात प्रोटीन, पता लगाए गए प्रोटीन के साथ अंतःक्रिया करता है या नहीं, लेकिन जीवित शरीर में बंधन की स्थिति का पता नहीं लगा सकता।

को-इम्यूनोप्रेसिपिटेशन तकनीक का उपयोग इम्यूनोप्रेसिपिटेशन प्रयोगों के आधार पर दो या दो से अधिक प्रोटीनों के बीच परस्पर क्रिया का विश्लेषण करने के लिए किया जाता है। अन्य प्रोटीन परस्पर क्रिया विश्लेषण तकनीकों (जीएसटी पुल-डाउन, वेस्टर्न ब्लॉट, क्रोमेटिन इम्यूनोप्रेसिपिटेशन परख, आदि) की तुलना में, को-आईपी तकनीक में उच्च विशिष्टता, संवेदनशीलता और उच्च पुनरावृत्ति क्षमता होती है, जो गैर-विशिष्ट बंधन के हस्तक्षेप से बच सकती है और प्राकृतिक अवस्था में प्रोटीनों की परस्पर क्रिया को प्रतिबिंबित कर सकती है।

	जीएसटी में गिरावट	सह-आईपी	पश्चिम बंगाल
फ़ायदा	संचालन में आसान विभिन्न प्रोटीनों के शुद्धिकरण के लिए उपयुक्त	*जीवित शरीर में परस्पर क्रिया के विश्लेषण के लिए इसे डाउनस्ट्रीम प्रोटीन के साथ पहचाना जा सकता है	उच्च विशिष्टता गुणात्मक और मात्रात्मक इन विट्रो
परिसीमन	शायद गैर-विशिष्ट बंधन इस परस्पर क्रिया की आगे पुष्टि आवश्यक है	एंटीबॉडी पर अत्यधिक निर्भरता अविशिष्ट बंधन हो सकता है	बहुत समय लगेगा बड़े पैमाने पर प्रोटीन विश्लेषण के लिए उपयोग करना कठिन है
अनुप्रयोग उदाहरण	अंतःक्रियाओं की पहचान करें शुद्ध प्रोटीन कॉम्प्लेक्स	सिग्नल ट्रांसडक्शन का अध्ययन करें रोग की क्रियाविधि	प्रोटीन-प्रोटीन, प्रोटीन-डीएनए और प्रोटीन-आरएनए अंतःक्रियाओं का अनुवर्ती विश्लेषण