मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (एमएबी) एंटीबॉडी दवाओं के क्षेत्र में अग्रणी है। कैंसर और संक्रामक रोगों के उपचार के लिए 100 से अधिक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी को मंजूरी मिल चुकी है, और इनका अपना दवा विकास बाजार है, जो इनके अद्वितीय चिकित्सीय मूल्य को दर्शाता है। सिंगल बी सेल एंटीबॉडी तकनीक, एंटीबॉडी विकास तकनीक की एक नई पीढ़ी के रूप में, एकल बी कोशिकाओं से एंटीबॉडी को कुशलतापूर्वक और तेजी से अलग कर सकती है। यह हाइब्रिडोमा और फेज डिस्प्ले के बाद एंटीबॉडी उत्पादन तकनीक में एक बड़ी उपलब्धि है। सिंगल बी सेल सॉर्टिंग तकनीक का उपयोग खरगोश, चूहे, ऊंट, भेड़ और मुर्गियों जैसी कई प्रजातियों के खिलाफ एंटीबॉडी उत्पादन के लिए किया जा सकता है। सिंगल बी सेल तकनीक में उच्च विशिष्टता, उच्च सक्रियता और उच्च आत्मीयता जैसे उत्कृष्ट लाभ हैं। सिंगल बी सेल सॉर्टिंग प्लेटफॉर्म के आधार पर, अल्फा लाइफटेक को स्क्रीनिंग समय और उच्च गुणवत्ता वाली एंटीबॉडी प्राप्त करने में लाभ है। यह ग्राहकों की विविध आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए एंटीजन डिजाइन, संश्लेषण और संशोधन, पशु प्रतिरक्षा, सिंगल बी सेल संवर्धन स्क्रीनिंग, सिंगल सेल सीक्वेंसिंग, हाई थ्रूपुट स्क्रीनिंग, एक्सप्रेशन और शुद्धिकरण जैसी वन-स्टॉप तकनीकी सेवाएं प्रदान कर सकता है, साथ ही कार्यात्मक सत्यापन भी प्रदान करता है।

प्रायोगिक जानवरों (जैसे चूहे, खरगोश आदि) के लिए उपयुक्त प्रतिजन का चयन करें ताकि वे प्रतिरक्षा को उत्तेजित कर सकें और उस प्रतिजन के विरुद्ध विशिष्ट एंटीबॉडी का उत्पादन कर सकें।

पशुओं का प्रतिरक्षण एंटीबॉडी उत्पादन का प्रारंभिक चरण है। पशु प्रतिरक्षण में जीव की स्वयं की ह्यूमरल प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया तंत्र का उपयोग किया जाता है, जिसमें प्रतिजनों के निरंतर उत्तेजना के माध्यम से, पशु एक मजबूत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया उत्पन्न करते हैं, और फिर विशिष्ट प्रतिजनों के विरुद्ध विशिष्ट एंटीबॉडी स्रावित करते हैं।

प्रतिरक्षाशील जानवरों के परिधीय रक्त, प्लीहा या लसीका ग्रंथियों से बी कोशिकाओं को पृथक किया गया। इन बी कोशिकाओं को विशिष्ट प्रतिजनों के विरुद्ध एंटीबॉडी उत्पन्न करने के लिए प्रतिरक्षात्मक रूप से उत्तेजित किया गया।

भौतिक या रासायनिक विधियों (जैसे घनत्व प्रवणता अपकेंद्रण, चुंबकीय मनका पृथक्करण आदि) द्वारा बी कोशिकाओं का संवर्धन, अशुद्ध कोशिकाओं को हटाना, बी कोशिकाओं की शुद्धता में सुधार और बाद में पृथक्करण की दक्षता में वृद्धि करना।

फ्लोरेसेंस-एक्टिवेटेड सेल सॉर्टिंग (FACS), मैग्नेटिक सेल सेपरेशन (MACS), माइक्रोफ्लुइडिक सेल सॉर्टर (MCS) या अन्य उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग तकनीकों का उपयोग, एंटीजन-विशिष्ट लेबलिंग के साथ मिलाकर, समृद्ध बी कोशिकाओं से अलग-अलग बी कोशिकाओं की स्क्रीनिंग करने और लक्षित एंटीबॉडी का उत्पादन करने के लिए किया जा सकता है।

जब मिश्रित बी-कोशिका समूह से एक एकल बी-कोशिका को अलग किया जाता है, तो उसके एंटीबॉडी जीनों को एकल-कोशिका अनुक्रमण तकनीक द्वारा अनुक्रमित किया जाना आवश्यक होता है और भारी श्रृंखला चर क्षेत्र (VH) और हल्की श्रृंखला चर क्षेत्र (VL) की डीएनए अनुक्रम जानकारी प्राप्त करने के लिए उनका विश्लेषण किया जाता है। एकल-कोशिका अनुक्रमण तकनीक में मुख्य रूप से तीन चरण शामिल हैं: एकल कोशिका पृथक्करण, अंतःकोशिकीय न्यूक्लिक अम्ल प्रवर्धन और अनुक्रमण विश्लेषण। एकल-कोशिका अनुक्रमण का सिद्धांत पृथक एकल कोशिकाओं के सूक्ष्म संपूर्ण जीनोम डीएनए या आरएनए को प्रवर्धित करना है ताकि उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण के लिए उच्च कवरेज वाला पूर्ण जीनोम या ट्रांसक्रिप्टोम प्राप्त किया जा सके।

उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग के माध्यम से, हजारों बी कोशिकाओं के एंटीबॉडी जीन अनुक्रम एक ही समय में प्राप्त किए जा सकते हैं, जिससे एंटीबॉडी की खोज की गति में काफी तेजी आती है। इस अनुक्रम जानकारी का उपयोग एंटीबॉडी लाइब्रेरी के निर्माण और स्क्रीनिंग के लिए किया जा सकता है।

चित्र 2. एकल बी कोशिका कैप्चर, लाइब्रेरी निर्माण, उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग और अनुक्रमण का योजनाबद्ध आरेख।(संदर्भ स्रोत: बड़े पैमाने पर समानांतर एकल-कोशिका बी-कोशिका रिसेप्टर अनुक्रमण विविध प्रतिजन-प्रतिक्रियाशील एंटीबॉडी की तीव्र खोज को सक्षम बनाता है।.)

(1) पुनर्संयोजित प्रोटीन: ≥2.5 मिलीग्राम, प्रोटीन शुद्धता >85%, प्रोटीन आणविक भार 10 किलोडा से अधिक, घुलनशील प्रोटीन सांद्रता 0.5 और 5 मिलीग्राम/मिलीलीटर के बीच। यदि प्रतिजन आत्मीयता शुद्धिकरण की आवश्यकता है, तो अतिरिक्त 10 मिलीग्राम पुनर्संयोजित प्रोटीन की आवश्यकता होगी।

(2)पॉलीपेप्टाइड और छोटे अणु: नंगे पेप्टाइड ≥10 मिलीग्राम, पेप्टाइड शुद्धता >90%, 10 एए से कम नहीं, कपलिंग केएलएच/बीएसए/ओवीए या अन्य वाहक प्रोटीन; छोटे अणुओं के लिए पहले से संरचनात्मक मूल्यांकन की आवश्यकता होती है।