यीस्ट सरफ़ेस डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा

हमारी यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी में बड़ी क्षमता और उच्च विविधता है, जो विशिष्ट एंटीबॉडी अनुक्रमों की प्रभावी स्क्रीनिंग के लिए एक उच्च आधार प्रदान करती है।

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यीस्ट सरफ़ेस डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा

अल्फा लाइफटेक यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी निर्माण और एंटीबॉडी लाइब्रेरी की स्क्रीनिंग में माहिर है, जो दुनिया भर के ग्राहकों के लिए यीस्ट लाइब्रेरी के विभिन्न रूपों को उत्पन्न करने और उन्हें उच्च आत्मीयता और विशिष्ट एंटीबॉडी के लिए स्क्रीन करने की क्षमता प्रदान करता है। विशेषज्ञ शोधकर्ताओं, उन्नत प्रौद्योगिकी और उपकरणों की एक टीम के साथ, हम रोग-संबंधी प्रोटीन की एक विस्तृत श्रृंखला को लक्षित करके यीस्ट लाइब्रेरी का निर्माण कर सकते हैं। हम प्रोटीन यीस्ट डिस्प्ले, छोटे अणु यीस्ट डिस्प्ले, एंटीबॉडी यीस्ट डिस्प्ले आदि सहित फेज डिस्प्ले और यीस्ट डिस्प्ले तकनीक प्रदान कर सकते हैं

हमारे यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी में बड़ी क्षमता और उच्च विविधता है, जो विशिष्ट एंटीबॉडी अनुक्रमों की प्रभावी स्क्रीनिंग के लिए एक उच्च आधार प्रदान करती है। हम आपकी ज़रूरतों के अनुसार एंटीबॉडी यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी (IgG, scFv, VHH, Fab एंटीबॉडी लाइब्रेरी), प्रोटीन लाइब्रेरी, पेप्टाइड लाइब्रेरी, cDNA लाइब्रेरी आदि के विभिन्न रूपों का निर्माण कर सकते हैं। इसके अतिरिक्त, हम विभिन्न गुणों की एंटीबॉडी लाइब्रेरी भी विकसित कर सकते हैं, जिसमें प्रतिरक्षा लाइब्रेरी, प्राकृतिक लाइब्रेरी, सिंथेटिक लाइब्रेरी, अर्ध-सिंथेटिक लाइब्रेरी और रोग एंटीबॉडी लाइब्रेरी शामिल हैं।

यीस्ट डिस्प्ले सिस्टम का परिचय

यीस्ट सरफेस डिस्प्ले तकनीक जीन फ्यूजन के माध्यम से यीस्ट की सतह पर पुनः संयोजक प्रोटीन प्रदर्शित करने की एक विधि है। सबसे आम यीस्ट डिस्प्ले सिस्टम अल्फा लेक्टिन मेटिंग प्रोटीन के Aga2p सबयूनिट के C-टर्मिनस से जुड़े लक्ष्य प्रोटीन का उपयोग करता है, जिसमें मुख्य रूप से लक्ष्य प्रोटीन के दोनों तरफ एपिटोप टैग होते हैं: N-टर्मिनल 9-एमिनो एसिड हेमाग्लगुटिनिन (HA) टैग और C-टर्मिनस 10 एमिनो एसिड c-myc टैग। 69 एमिनो एसिड Aga2p सबयूनिट दो डाइसल्फ़ाइड बॉन्ड के माध्यम से 725 एमिनो एसिड अल्फा लेक्टिन Aga1p सबयूनिट से जुड़ता है, और Aga1p को β 1,6-ग्लूकेन सहसंयोजक बॉन्ड के माध्यम से सेल की दीवार पर लंगर डाला जाता है। इसलिए, लक्ष्य प्रोटीन यीस्ट कोशिकाओं की सतह पर प्रदर्शित होता है और बाद में संबंधित लिगैंड द्वारा पहचाना जाता है। फ्लो साइटोमेट्री स्क्रीनिंग के माध्यम से लाइब्रेरी से कार्यात्मक प्रोटीन को अलग करें।

चित्र 1: यीस्ट सतह प्रदर्शन का सिद्धांत। (चित्र स्रोत:प्रोटीन इंजीनियरिंग के लिए यीस्ट सतह प्रदर्शन के अनुप्रयोग।)

यीस्ट सरफेस डिस्प्ले लाइब्रेरी का परिचय

यीस्ट डिस्प्ले सॉर्टिंग यीस्ट सरफेस डिस्प्ले पर आधारित है, जिसका उपयोग मुख्य रूप से सेल सरफेस प्रोटीन को लक्षित करने वाले एंटीबॉडी लाइब्रेरी को स्क्रीन करने के लिए किया जाता है। यीस्ट कोशिकाओं और अन्य सेल सतहों के बीच कम गैर-विशिष्ट बंधन के कारण, यीस्ट जैविक चयन दुर्लभ क्लोनों को खोजने के लिए बड़ी बाइंडिंग लाइब्रेरी को स्क्रीन कर सकता है।

यीस्ट सरफ़ेस डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा

प्लास्मिड तैयार करें और यीस्ट कोशिकाओं को संवर्धित करें, लक्ष्य प्रोटीन को एनकोड करने वाले डीएनए को संश्लेषित करें और इसे एक यीस्ट अभिव्यक्ति वेक्टर में क्लोन करें जिसमें प्रेरित प्रमोटर, सिग्नल पेप्टाइड्स और सतह प्रदर्शन प्रोटीन (जैसे कि Aga2p) से जुड़े लक्ष्य जीन शामिल हों। लक्ष्य प्रोटीन को एनकोड करने वाले जीन को यीस्ट सेल दीवार प्रोटीन (आमतौर पर Aga2p) को एनकोड करने वाले जीन के साथ जोड़ा जा सकता है, और जुड़े हुए जीन को इलेक्ट्रोपोरेशन के माध्यम से यीस्ट कोशिकाओं में परिवर्तित किया जा सकता है। रूपांतरण के बाद, अपनी सतह पर एंटीबॉडी जीन व्यक्त करने वाली यीस्ट कोशिकाएं एंटीजन-विशिष्ट स्क्रीनिंग परीक्षणों से गुजर सकती हैं: यीस्ट लाइब्रेरी को लक्ष्य एंटीजन के साथ इनक्यूबेट किया जाता है और यीस्ट कोशिकाएं जो विशेष रूप से इससे जुड़ती हैं, उन्हें चुना जाता है। वांछित विशेषताओं वाले प्रोटीन को प्रदर्शित करने वाली यीस्ट कोशिकाओं को अलग करने के लिए फ्लोरोसेंस सक्रिय सेल सॉर्टिंग (FACS) का उपयोग करके, यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग को अधिकतम लाइब्रेरी आकार ~10 ^ 8-10 ^ 9 यीस्ट कोशिकाओं के साथ किया जा सकता है। फिर सकारात्मक क्लोन को आगे के विश्लेषण या डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए अलग किया जा सकता है। एक बार एंटीबॉडी लाइब्रेरी से विशिष्ट एंटीबॉडी क्लोन की पहचान हो जाने के बाद, उन्हें आगे लक्षण-निर्धारण किया जा सकता है और बड़े पैमाने पर उत्पादित किया जा सकता है, तथा यीस्ट डिस्प्ले स्क्रीनिंग और एंटीबॉडी उत्पादन की पूरी प्रक्रिया को पूरा करने के लिए प्रोटीन ए/जी एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी जैसी तकनीकों का उपयोग करके शुद्ध किया जा सकता है।

यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग की प्रक्रिया

चित्र 2 यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग प्रक्रिया

यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा वर्कफ़्लो

कदम	सेवा सामग्री	समय
एंटीजन तैयारी	प्रतिजन प्रकार: यदि ग्राहक प्रतिजन प्रदान कर सकता है, तो संबंधित नमूनों को प्रकार के अनुसार वितरित करने की आवश्यकता है: पुनः संयोजक प्रोटीन को 85% से अधिक की शुद्धता की आवश्यकता के साथ 3-3.5 मिलीग्राम की आवश्यकता होती है, छोटे अणुओं को 90% से अधिक की शुद्धता की आवश्यकता के साथ संयुग्मित करने की आवश्यकता होती है, पेप्टाइड संश्लेषण को 90% से अधिक की शुद्धता की आवश्यकता के साथ संयुग्मित करने की आवश्यकता होती है, वायरस जैसे नमूना प्रकारों को निष्क्रिय करने की आवश्यकता होती है, गिरावट को रोकने के लिए आरएनए का निरीक्षण करने की आवश्यकता होती है, और उपरोक्त प्रतिजन प्रकारों को संश्लेषण के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है।	2-3 सप्ताह
पशु प्रतिरक्षा	पशुओं के टीकाकरण की संख्या 5 है, और सीरम टिटर परीक्षण के आधार पर यह निर्धारित करना आवश्यक है कि टीकाकरण की संख्या बढ़ाई जाए या नहीं। एंटीजन प्रतिरक्षा: प्रोटीन/वायरस एंटीजन क्षमता>105; पेप्टाइड/छोटे अणु एंटीजन क्षमता>10^4	5-6 सप्ताह
टेम्पलेट cDNA तैयारी	प्लाज्मा पीबीएमसी को अलग करें, कुल आरएनए (आरएनए निष्कर्षण किट) निकालें और सीडीएनए में परिवर्तित करें।	1 दिन
पुस्तकालय निर्माण	लाइब्रेरी cDNA को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, VHH जीन को PCR के दो राउंड द्वारा प्रवर्धित किया गया, और VHH जीन स्प्लिसिंग यीस्ट डिस्प्ले वेक्टर का निर्माण किया गया। एंटीबॉडी लाइब्रेरी बनाने के लिए वेक्टर को इलेक्ट्रोपोरेशन द्वारा यीस्ट कोशिकाओं में परिवर्तित किया गया। यादृच्छिक रूप से 48 क्लोन चुनें और PCR विधि का उपयोग करके सकारात्मक दर (>90%) की पहचान करें; लाइब्रेरी क्षमता (10^7-10^8) की गणना करें, सही लाइब्रेरी प्रविष्टि दर (>90%) और लाइब्रेरी विविधता निर्धारित करने के लिए NGS अनुक्रमण करें।	2 सप्ताह
लाइब्रेरी स्क्रीनिंग	स्क्रीनिंग के डिफ़ॉल्ट तीन दौर: फ्लोरोसेंस लेबल प्रोटीन FACS स्क्रीनिंग, उसके बाद तीसरे दौर में NGS अनुक्रमण। सिंगल ग्राम इंडक्शन एक्सप्रेशन और ELISA डिटेक्शन के लिए सकारात्मक क्लोन चुने गए। सभी सकारात्मक क्लोन जीन अनुक्रमण के लिए चुने गए, और अलग-अलग CDR क्षेत्र अनुक्रम चुने गए।	2-3 सप्ताह
एंटीबॉडी सत्यापन	एंटीबॉडी अनुक्रमों के लिए उपयुक्त अभिव्यक्ति वेक्टरों का निर्माण करने से एंटीबॉडी अभिव्यक्ति, एंटीबॉडी शुद्धिकरण, एंटीबॉडी आत्मीयता को सत्यापित करने के लिए एंटीबॉडी एंटीजन बंधन के ELISA और BLI सत्यापन, और कोशिका कार्य को मान्य करने के लिए फ्लो साइटोमेट्री अवरोधन की सुविधा मिल सकती है।	1 सप्ताह

खमीर सतह प्रदर्शन पुस्तकालय स्क्रीनिंग का मामला

यीस्ट सरफेस डिस्प्ले प्लेटफॉर्म के साहित्य में, जो कि कंफर्मेशनली सेलेक्टिव नैनोबॉडी की त्वरित खोज के लिए है, लेखकों ने यीस्ट सरफेस डिस्प्ले पर आधारित एक पूर्ण इन विट्रो नैनोबॉडी डिस्कवरी प्लेटफॉर्म की स्थापना की। सबसे पहले, ऊंट के जीन से शुरू करके एक सिंथेटिक नैनोबॉडी लाइब्रेरी तैयार की गई। चित्र D दिखाता है कि नैनोबॉडी में कार्बोक्सिल सिरे पर एक HA टैग है, और फिर नैनोबॉडी को यीस्ट सेल की दीवार पर सहसंयोजक रूप से स्थिर किया गया है। चित्र E नैनोबॉडी स्क्रीनिंग प्रक्रिया को दर्शाता है। एंटीजन एफिनिटी नैनोबॉडी वाले यीस्ट को FACS द्वारा एंटीबॉडी के लिए अलग किया गया, प्रवर्धित किया गया और बार-बार चुना गया। लेखकों ने इस प्लेटफ़ॉर्म के माध्यम से दो अलग-अलग मानव GPCR को लक्षित करने वाले कंफर्मेशनल सेलेक्टिव नैनोबॉडी की खोज की।