यीस्ट सरफेस डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा

हमारी यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी में बड़ी क्षमता और उच्च विविधता है, जो विशिष्ट एंटीबॉडी अनुक्रमों की प्रभावी स्क्रीनिंग के लिए एक मजबूत आधार प्रदान करती है।

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यीस्ट सरफेस डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा

अल्फा लाइफटेक यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी निर्माण और एंटीबॉडी लाइब्रेरी की स्क्रीनिंग में विशेषज्ञता रखती है, और दुनिया भर के ग्राहकों के लिए विभिन्न प्रकार की यीस्ट लाइब्रेरी तैयार करने और उनमें उच्च आत्मीयता और विशिष्ट एंटीबॉडी की स्क्रीनिंग करने की क्षमता प्रदान करती है। विशेषज्ञ शोधकर्ताओं की एक टीम, उन्नत तकनीक और उपकरणों के साथ, हम रोग-संबंधी प्रोटीनों की एक विस्तृत श्रृंखला को लक्षित करने वाली यीस्ट लाइब्रेरी का निर्माण कर सकते हैं। हम प्रोटीन यीस्ट डिस्प्ले, स्मॉल मॉलिक्यूल यीस्ट डिस्प्ले, एंटीबॉडी यीस्ट डिस्प्ले आदि सहित फेज डिस्प्ले और यीस्ट डिस्प्ले तकनीकें प्रदान कर सकते हैं।

हमारी यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी में विशाल क्षमता और उच्च विविधता है, जो विशिष्ट एंटीबॉडी अनुक्रमों की प्रभावी स्क्रीनिंग के लिए एक मजबूत आधार प्रदान करती है। हम आपकी आवश्यकताओं के अनुसार विभिन्न प्रकार की एंटीबॉडी यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी (IgG, scFv, VHH, Fab एंटीबॉडी लाइब्रेरी), प्रोटीन लाइब्रेरी, पेप्टाइड लाइब्रेरी, cDNA लाइब्रेरी आदि का निर्माण कर सकते हैं। इसके अतिरिक्त, हम विभिन्न गुणों वाली एंटीबॉडी लाइब्रेरी भी विकसित कर सकते हैं, जिनमें इम्यून लाइब्रेरी, प्राकृतिक लाइब्रेरी, सिंथेटिक लाइब्रेरी, सेमी-सिंथेटिक लाइब्रेरी और रोग एंटीबॉडी लाइब्रेरी शामिल हैं।

यीस्ट डिस्प्ले सिस्टम का परिचय

यीस्ट सतह प्रदर्शन तकनीक जीन संलयन के माध्यम से यीस्ट की सतह पर पुनर्संयोजित प्रोटीनों को प्रदर्शित करने की एक विधि है। सबसे आम यीस्ट प्रदर्शन प्रणाली में लक्ष्य प्रोटीन को अल्फा लेक्टिन मेटिंग प्रोटीन के Aga2p उप-अंश के C-टर्मिनस से जोड़ा जाता है, जिसमें मुख्य रूप से लक्ष्य प्रोटीन के दोनों ओर एपिटोप टैग होते हैं: N-टर्मिनस पर 9-अमीनो एसिड वाला हेमग्लूटिनिन (HA) टैग और C-टर्मिनस पर 10-अमीनो एसिड वाला c-myc टैग। 69 अमीनो एसिड वाला Aga2p उप-अंश दो डाइसल्फाइड बंधों के माध्यम से 725 अमीनो एसिड वाले अल्फा लेक्टिन Aga1p उप-अंश से जुड़ता है, और Aga1p एक β 1,6-ग्लूकन सहसंयोजक बंध के माध्यम से कोशिका भित्ति से जुड़ा होता है। इस प्रकार, लक्ष्य प्रोटीन यीस्ट कोशिकाओं की सतह पर प्रदर्शित होता है और बाद में संबंधित लिगैंड द्वारा पहचाना जाता है। फ्लो साइटोमेट्री स्क्रीनिंग के माध्यम से पुस्तकालयों से कार्यात्मक प्रोटीनों को अलग किया जाता है।

चित्र 1: खमीर द्वारा सतही प्रदर्शन का सिद्धांत। (चित्र स्रोत: प्रोटीन इंजीनियरिंग के लिए यीस्ट सरफेस डिस्प्ले के अनुप्रयोग।)

यीस्ट सरफेस डिस्प्ले लाइब्रेरी का परिचय

यीस्ट डिस्प्ले सॉर्टिंग, यीस्ट सतह प्रदर्शन पर आधारित है, जिसका मुख्य उपयोग कोशिका सतह प्रोटीन को लक्षित करने वाली एंटीबॉडी लाइब्रेरी की स्क्रीनिंग के लिए किया जाता है। यीस्ट कोशिकाओं और अन्य कोशिका सतहों के बीच कम गैर-विशिष्ट बंधन के कारण, यीस्ट जैविक चयन दुर्लभ क्लोन खोजने के लिए बड़ी बंधन लाइब्रेरी की स्क्रीनिंग कर सकता है।

यीस्ट सरफेस डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा

प्लास्मिड तैयार करें और यीस्ट कोशिकाओं को कल्चर करें। लक्ष्य प्रोटीन को एनकोड करने वाले डीएनए का संश्लेषण करें और इसे इंड्यूसिबल प्रमोटर, सिग्नल पेप्टाइड और सतह पर प्रदर्शित प्रोटीन (जैसे Aga2p) से जुड़े लक्ष्य जीन वाले यीस्ट एक्सप्रेशन वेक्टर में क्लोन करें। लक्ष्य प्रोटीन को एनकोड करने वाले जीन को यीस्ट कोशिका भित्ति प्रोटीन (आमतौर पर Aga2p) को एनकोड करने वाले जीन के साथ फ्यूज किया जा सकता है, और फ्यूज किए गए जीन को इलेक्ट्रोपोरेशन के माध्यम से यीस्ट कोशिकाओं में ट्रांसफॉर्म किया जा सकता है। ट्रांसफॉर्मेशन के बाद, अपनी सतह पर एंटीबॉडी जीन व्यक्त करने वाली यीस्ट कोशिकाओं का एंटीजन-विशिष्ट स्क्रीनिंग परीक्षण किया जा सकता है: यीस्ट लाइब्रेरी को लक्ष्य एंटीजन के साथ इनक्यूबेट किया जाता है और उससे विशेष रूप से जुड़ने वाली यीस्ट कोशिकाओं का चयन किया जाता है। वांछित विशेषताओं वाले प्रोटीन प्रदर्शित करने वाली यीस्ट कोशिकाओं को अलग करने के लिए फ्लोरेसेंस एक्टिवेटेड सेल सॉर्टिंग (FACS) का उपयोग करके, यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग लगभग 10^8-10^9 यीस्ट कोशिकाओं के अधिकतम लाइब्रेरी आकार के साथ की जा सकती है। सकारात्मक क्लोन को आगे के विश्लेषण या डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए अलग किया जा सकता है। एक बार एंटीबॉडी लाइब्रेरी से विशिष्ट एंटीबॉडी क्लोन की पहचान हो जाने के बाद, उन्हें आगे और अधिक विशिष्टीकृत किया जा सकता है और बड़े पैमाने पर उत्पादित किया जा सकता है, और यीस्ट डिस्प्ले स्क्रीनिंग और एंटीबॉडी उत्पादन की पूरी प्रक्रिया को पूरा करने के लिए प्रोटीन ए/जी एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी जैसी तकनीकों का उपयोग करके शुद्ध किया जा सकता है।

यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग की प्रक्रिया

चित्र 2. यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग प्रक्रिया

यीस्ट डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग सेवा कार्यप्रवाह

चरण	सेवा सामग्री	समय
प्रतिजन तैयारी	एंटीजन का प्रकार: यदि ग्राहक एंटीजन उपलब्ध करा सकता है, तो संबंधित नमूनों को प्रकार के अनुसार वितरित करना होगा: रिकॉम्बिनेंट प्रोटीन के लिए 3-3.5 मिलीग्राम की आवश्यकता होती है, जिसमें शुद्धता की आवश्यकता 85% से अधिक होती है; छोटे अणुओं के लिए संयुग्मन की आवश्यकता होती है, जिसमें शुद्धता की आवश्यकता 90% से अधिक होती है; पेप्टाइड संश्लेषण के लिए संयुग्मन की आवश्यकता होती है, जिसमें शुद्धता की आवश्यकता 90% से अधिक होती है; वायरस जैसे नमूना प्रकारों को निष्क्रिय करना आवश्यक है; आरएनए की गिरावट को रोकने के लिए उसका निरीक्षण करना आवश्यक है; और उपरोक्त एंटीजन प्रकारों को संश्लेषण के लिए अनुकूलित भी किया जा सकता है।	2-3 सप्ताह
पशु प्रतिरक्षा	पशुओं को दिए गए टीकों की संख्या 5 है, और सीरम टाइटर परीक्षण के आधार पर टीकों की संख्या बढ़ाने का निर्णय लेना आवश्यक है। एंटीजन प्रतिरक्षा: प्रोटीन/वायरस एंटीजन की क्षमता >10⁵; पेप्टाइड/छोटे अणु एंटीजन की क्षमता >10⁴	5-6 सप्ताह
टेम्पलेट सीडीएनए तैयारी	प्लाज्मा पीबीएमसी को अलग करें, कुल आरएनए (आरएनए निष्कर्षण किट) निकालें और इसे सीडीएनए में परिवर्तित करें।	1 दिन
पुस्तकालय निर्माण	लाइब्रेरी सीडीएनए को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करके, वीएचएच जीन को पीसीआर के दो चरणों द्वारा प्रवर्धित किया गया और वीएचएच जीन स्प्लिसिंग यीस्ट डिस्प्ले वेक्टर का निर्माण किया गया। एंटीबॉडी लाइब्रेरी बनाने के लिए इस वेक्टर को इलेक्ट्रोपोरेशन द्वारा यीस्ट कोशिकाओं में रूपांतरित किया गया। पीसीआर विधि का उपयोग करके 48 क्लोनों का यादृच्छिक रूप से चयन किया गया और उनकी सकारात्मकता दर (>90%) की पहचान की गई; लाइब्रेरी क्षमता (10^7-10^8) की गणना की गई और सही लाइब्रेरी सम्मिलन दर (>90%) और लाइब्रेरी विविधता निर्धारित करने के लिए एनजीएस अनुक्रमण का उपयोग किया गया।	2 सप्ताह
पुस्तकालय स्क्रीनिंग	स्क्रीनिंग के तीन चरण निर्धारित किए गए: पहले चरण में फ्लोरेसेंस लेबल्ड प्रोटीन FACS स्क्रीनिंग की गई, जिसके बाद तीसरे चरण में NGS सीक्वेंसिंग की गई। पॉजिटिव क्लोन को सिंगल ग्राम इंडक्शन एक्सप्रेशन और ELISA डिटेक्शन के लिए चुना गया। सभी पॉजिटिव क्लोन को जीन सीक्वेंसिंग के लिए चुना गया और विभिन्न CDR रीजन सीक्वेंस का चयन किया गया।	2-3 सप्ताह
एंटीबॉडी सत्यापन	एंटीबॉडी अनुक्रमों के लिए उपयुक्त अभिव्यक्ति वैक्टर का निर्माण एंटीबॉडी अभिव्यक्ति, एंटीबॉडी शुद्धिकरण, एंटीबॉडी आत्मीयता को सत्यापित करने के लिए एंटीबॉडी एंटीजन बंधन के ELISA और BLI सत्यापन, और कोशिका कार्य को मान्य करने के लिए फ्लो साइटोमेट्री अवरोध को सुविधाजनक बना सकता है।	1 सप्ताह

यीस्ट सरफेस डिस्प्ले लाइब्रेरी स्क्रीनिंग का मामला

संरचनात्मक रूप से चयनात्मक नैनोबॉडी की तीव्र खोज के लिए यीस्ट सतह प्रदर्शन प्लेटफॉर्म के साहित्य में, लेखकों ने यीस्ट सतह प्रदर्शन पर आधारित एक पूर्ण इन विट्रो नैनोबॉडी खोज प्लेटफॉर्म स्थापित किया। सबसे पहले, ऊंट के जीनों से शुरू करके एक सिंथेटिक नैनोबॉडी लाइब्रेरी डिज़ाइन की गई। चित्र D दर्शाता है कि नैनोबॉडी के कार्बोक्सिल सिरे पर एक HA टैग है, और फिर नैनोबॉडी को यीस्ट कोशिका भित्ति पर सहसंयोजक रूप से स्थिर किया जाता है। चित्र E नैनोबॉडी स्क्रीनिंग प्रक्रिया को दर्शाता है। प्रतिजन आत्मीयता नैनोबॉडी वाले यीस्ट को पृथक किया गया, प्रवर्धित किया गया और FACS द्वारा एंटीबॉडी के लिए बार-बार चयनित किया गया। लेखकों ने इस प्लेटफॉर्म के माध्यम से दो अलग-अलग मानव GPCR को लक्षित करने वाले संरचनात्मक रूप से चयनात्मक नैनोबॉडी की खोज की।