Platforma za razvoj aptamera

Aptameri su jednolančani oligonukleotidi (DNA, RNA ili XNA) s svojstvom visokog afiniteta i visoke specifičnosti koji se specifično vežu na ciljne molekule poput antitijela, te se široko koriste za razvoj biosenzora, dijagnostiku i terapiju.

Platforma za aptamere koju pruža Alpha Lifetech uključuje dvije kategorije: platformu za sintezu aptamera, koja uglavnom uključuje uslugu sinteze SELEX biblioteke aptamera i uslugu razvoja aptamera (DNA, RNA ili XNA), te platformu za probir aptamera koja uključuje usluge probira temeljene na SELEX tehnologiji za proteine, peptide, stanice, male molekule, metalne ione i druge ciljne molekule, kao i usluge optimizacije i identifikacije aptamera nizvodno.

Platforma za sintezu aptamera

Servis sinteze SELEX aptamer biblioteke

Usluga sinteze SELEX biblioteke aptamera uglavnom uključuje izgradnju biblioteke koja sadrži veliki broj nasumičnih jednolančanih oligonukleotidnih sekvenci in vitro kemijskom sintezom prema ciljnim molekulama. Izgradnja biblioteke je početna točka SELEX tehnologije, koja pruža obilje kandidatskih sekvenci za naknadni proces probira izgradnjom ogromnih nasumičnih biblioteka i povećava mogućnost probira aptamera visokog afiniteta.

Sinteza biblioteke uglavnom se dijeli na sljedeće korake:

Koraci	Detalji o tehnologiji
Identificirajte ciljne molekule	Identificirajte ciljne molekule koje je potrebno pregledati na aptamere, a to mogu biti proteini, nukleinske kiseline, male molekule, metalni ioni itd.
Dizajn slučajnog niza	Duljina slučajnog niza, sastav baza i drugi parametri dizajnirani su prema karakteristikama ciljnih molekula i zahtjevima probira. Obično su slučajni nizovi duljine između desetaka i stotina baza.
Sinteza fiksnih sekvenci	Oligonukleotidni fragmenti s fiksnim sekvencama (kao što su PCR primer sekvence) na oba kraja su dizajnirani i sintetizirani, a bit će korišteni u naknadnom procesu amplifikacije i probira.

Sintetizirana biblioteka još uvijek treba biti dodatno obrađena radi kontrole kvalitete. Koncentracija biblioteke određena je kako bi se osigurala njezina primjenjivost u sljedećem procesu probira. Raznolikost i točnost slučajnih sekvenci u biblioteci provjerene su sekvenciranjem i drugim metodama kako bi se osiguralo da kvaliteta biblioteke zadovoljava zahtjeve probira.

Kroz gore navedene korake može se sintetizirati visokokvalitetna i vrlo raznolika SELEX aptamerna biblioteka, koja može pružiti obilje kandidatskih sekvenci za naknadni proces probira.

Usluge razvoja aptamera (DNA, RNA ili XNA)

Aptameri se obično odnose na aptamere nukleinskih kiselina. Aptameri nukleinskih kiselina uključuju DNA aptamere, RNA aptamere i XNA aptamere, što su kemijski modificirani aptameri nukleinskih kiselina. SELEX tehnika se široko koristi za razvoj aptamera. Osnovni tijek rada usluga razvoja aptamera uključuje izgradnju biblioteke, vezanje cilja, izolaciju i pročišćavanje, amplifikaciju, višestruke krugove probira i identifikaciju sekvenci. Godinama smo se usredotočili na izgradnju biblioteke i imamo bogato iskustvo u razvoju aptamera. Posvećeni smo pružanju boljih usluga kupcima.

SELEX tehnološki proces

SELEX proces se sastoji od više rundi, od kojih se svaka sastoji od sljedećih ključnih koraka:

Vezivanje biblioteke i cilja

Konstruirana biblioteka nukleinskih kiselina pomiješana je sa specifičnim ciljnim molekulama (kao što su proteini, spojevi malih molekula itd.), tako da sekvence nukleinskih kiselina u biblioteci imaju priliku vezati se na ciljne molekule.

Izolacija nevezanih molekula

Nukleinske kiseline koje nisu vezane za ciljnu molekulu odvajaju se iz smjese specifičnim metodama kao što su afinitetna kromatografija, magnetska separacija kuglicama itd.

Amplifikacija vezajućih molekula

Nukleinska kiselinska sekvenca vezana za ciljnu molekulu se amplificira, obično korištenjem tehnologije lančane reakcije polimeraze (PCR). Za sljedeću fazu probira, amplificirane sekvence će se koristiti kao početna biblioteka.

Slika 1: SELEX proces probira

Platforma za probir aptamera

Usluga probira aptamera

Alpha Lifetech nudi širok raspon specijaliziranih usluga probira aptamera primjenjujući različite SELEX metodologije za različite tipove vaših molekula:

Vrste ciljeva	Tehnički detalji
Probir proteinskih aptamera pomoću SELEX-a	Glavna svrha probira proteinskih aptamera je probir aptamera koji se mogu specifično vezati za ciljne molekule proteina. Ove aptamere je jednostavnije sintetizirati, stabilniji su i manje osjetljivi na čimbenike okoliša.
Probir peptidnih aptamera pomoću SELEX-a	Peptidni aptameri su klasa kratkih peptidnih sekvenci s visokom specifičnošću i afinitetom, koje se mogu specifično vezati za ciljne tvari i pokazuju širok raspon potencijala primjene u biomedicinskom području. Specifičnim postupkom probira, peptidni aptameri koji se mogu specifično vezati za ciljne molekule probiru se iz velikog broja biblioteka nasumičnih peptidnih sekvenci.
Probir stanično specifičnih aptamera (Cell-SELEX)	Ciljne stanice ili specifične molekule na površini stanice pripremaju se kao mete. Mete mogu biti cijele stanice, receptori na staničnoj membrani, proteini ili druge male molekule.
Probir malih molekularnih aptamera pomoću Capture SELEX-a	Capture SELEX je in vitro tehnika probira za probir aptamera malih molekula, što je varijanta SELEX-a. Capture SELEX je posebno prikladan za probir aptamera ciljnih malih molekula, koje obično imaju manje funkcionalnih skupina i teško ih je imobilizirati izravno na nosačima čvrste faze.
SELEX usluge na živim životinjama	Usluga probira na živim životinjama eksperimentalna je tehnika koja se široko koristi u područjima bioznanosti, medicine i biotehnologije, a koja koristi žive životinje kao eksperimentalne modele za probir i procjenu specifičnih molekula, lijekova, terapija ili bioloških procesa. Usluge su osmišljene za simuliranje fiziološkog okruženja u ljudskom tijelu kako bi se točnije predvidjela i procijenila učinkovitost i sigurnost eksperimentalnih rezultata u ljudskom tijelu.

Usluga optimizacije aptamera

Hidrofilnost, visoki gubitak afiniteta tijekom proizvodnje i brzo izlučivanje aptamera ograničavaju njihovu primjenu. Trenutno se istražuje niz metoda optimizacije kako bi se poboljšale performanse aptamera.

Također imamo razne načine za optimizaciju aptamera koji se sastoje od skraćivanja, modifikacija, konjugacije na odgovarajuću skupinu (tiol, karboksi, amin, fluorofor itd.).

Usluga analize karakterizacije aptamera

Usluga karakterizacije aptamera odnosi se na profesionalnu uslugu procjene performansi, razlučivanja strukture i funkcionalne provjere dobivenog aptamera kako bi se osiguralo da aptamer ispunjava specifične zahtjeve sposobnosti vezanja, stabilnosti i specifičnosti. Uglavnom uključuje analizu afiniteta i specifičnosti, procjenu stabilnosti i provjeru biološke funkcije.