Godine 1960. predložen je koncept bispecifičnih antitijela. Bispecifična antitijela, poznata i kao bispecifična monoklonska antitijela, umjetno su sintetizirana antitijela korištenjem tehnologije genetskog inženjeringa. Kao umjetna antitijela stvorena genskim inženjerstvom, bispecifična antitijela obično pripadaju podklasi IgG i sadrže fragment koji veže antigen i cilja CD3 podjedinicu. Bispecifična antitijela imaju dva specifična mjesta vezanja antigena koja mogu istovremeno vezati i prepoznati dva različita antigena ili dva različita epitopa antigena. U usporedbi s monoklonskim antitijelima, bispecifična antitijela imaju dodatno specifično mjesto vezanja antigena, te stoga posjeduju jaču specifičnost i sposobnost ciljanja, što može preciznije ciljati tumorske stanice i smanjiti toksičnost izvan cilja. Bispecifična antitijela mogu istovremeno obavljati više bioloških funkcija, poput regrutiranja imunoloških stanica, blokiranja signalnih putova i izravnog ubijanja tumorskih stanica. Rana bispecifična antitijela uglavnom su se pripremala kemijskom konjugacijom ili staničnom fuzijom, ali ova je metoda možda sporo napredovala zbog slučajne kombinacije i poteškoća u izolaciji ciljne kombinacije. Kontinuiranim razvojem tehnologije genetskog inženjerstva razvijene su mnoge nove tehnološke platforme, kao što su čvorovi u rupama (KIH), CrossMab, DVD Ig itd. Ove platforme učinkovito rješavaju probleme poput neusklađenosti teških i lakih lanaca te poboljšavaju ujednačenost i prinos bispecifičnih antitijela.

Glavne metode za proizvodnju bispecifičnih antitijela uključuju kemijsko spajanje, hibridom s četiri izvora i pripremu antitijela genetskim inženjeringom. Među njima, metoda kemijskog spajanja spaja dva intaktna IgG ili dva F(ab')2 fragmenta antitijela u bispecifična antitijela korištenjem kemijskih sredstava za spajanje kao što su ftalimid i ditioacilbenzojeva kiselina. Ova metoda je jednostavna i lako se izvodi, ali može oštetiti mjesto vezanja antigena, smanjiti aktivnost antitijela, a samo sredstvo za spajanje također ima određeni stupanj kancerogenosti. Metoda hibridoma s četiri izvora temelji se na fuziji somatskih stanica iz dvije različite hibridomske stanične linije kako bi se eksprimirao odgovarajući mišji IgG. Pomoću tehnologije genetskog inženjeringa, antitijela se mogu genetski modificirati kako bi se formirala bispecifična antitijela. Konstruirana su dva različita monoklonska antitijela, a Fab fragmenti ili varijabilne regije teškog i lakog lanca dvaju antitijela odvojeno su cijepani. Reakcijom umrežavanja ili tehnologijom rekombinacije lanca, dva fragmenta su spojena kako bi se formiralo bispecifično antitijelo. Iako je složenost tehnologije genetskog inženjeringa relativno visoka, trenutno je to najčešće korištena metoda za proizvodnju bispecifičnih antitijela za prilagodbu strukture i funkcije antitijela. Prilikom provođenja dizajna bispecifičnih antitijela može se koristiti princip unakrsne reaktivnosti antitijela, ali unakrsna reaktivnost antitijela može uzrokovati nespecifične reakcije, stoga će se pažljivo razmotriti u praktičnoj primjeni dizajna bispecifičnih antitijela, kao što je terapija bispecifičnim antitijelima.

Pročišćavanje bispecifičnih antitijela je proces izolacije i pročišćavanja ciljnih antitijela visoke čistoće. Za uklanjanje nekih topljivih nečistoća koriste se dvije metode, centrifugiranje i duboka filtracija. Ciljno bispecifično antitijelo se u početku hvata afinitetnom kromatografijom. Za bispecifična antitijela slična IgG koristi se afinitetna kromatografija proteina A, dok se za bispecifična antitijela koja nisu slična IgG može koristiti afinitetna kromatografija na bazi lakog lanca. Nakon toga, antitijelo se inkubira pod uvjetima niskog pH tijekom određenog vremenskog razdoblja, što uzrokuje poremećaj proteinske strukture na površini virusne ovojnice, čime se gubi sposobnost inficiranja stanica. Međudubinska filtracija se provodi kako bi se dodatno uklonile nečistoće poput proteina stanica domaćina (HCP). Čistoća antitijela poboljšava se metodama kao što je kromatografija ionske izmjene, a svi preostali virusi uklanjaju se tehnikama nanofiltracije ili ultrafiltracije. Konačno, uzorak se koncentrira i zamjenjuje prikladnim formulacijskim puferom.