Platforma za razvoj antitijela za prikaz faga

Alpha Lifetech, sa svojim opsežnim iskustvom u projektima otkrivanja antitijela, može pružiti prilagođene usluge monoklonskih i poliklonskih antitijela za više vrsta, kao i usluge izgradnje i probira biblioteka antitijela. Alpha Lifetech može kupcima pružiti kvalitetne proizvode antitijela i rekombinantnih antitijela, kao i odgovarajuće usluge, za pripremu učinkovitih, visoko specifičnih i stabilnih antitijela. Korištenjem sveobuhvatnih platformi antitijela i inženjeringa antitijela, pružamo usluge koje pokrivaju uzvodno i nizvodno od proizvodnje antitijela, uključujući tehničke usluge kao što su priprema antitijela, pročišćavanje, sekvenciranje antitijela i validacija.

Alpha Lifetech ima zrelu platformu za otkrivanje antitijela koja kupcima pruža niz usluga, uključujući imunitet životinja, izgradnju i probir biblioteke antitijela za fagni prikaz, sekvenciranje antitijela, ekspresiju antitijela, pročišćavanje antitijela, validaciju antitijela i označavanje antitijela na temelju hibridomske tehnologije, tehnologije pojedinačnih B stanica, tehnologije fagnog prikaza i još mnogo toga. Alpha Lifetech ima standardnu proizvodnu liniju, a osim usluga pripreme antitijela, mogu se pružiti i prateće usluge poput humanizacije antitijela, sazrijevanja afiniteta antitijela, dizajna i razvoja ADC lijekova te dizajna naknadnih sekvenci CAR-T. Istovremeno, Alpha Lifetech je konstruirao biblioteku antitijela temeljenu na platformama tehnologije fagnog prikaza M13, T4 i T7, s kapacitetom pohrane do 10^8-10^9. Stopa pozitivne ekspresije, stopa umetanja i raznolikost biblioteke mogu doseći preko 90%.

Tehnologija prikaza faga

Proizvodnja monoklonskih antitijela u početku je provedena korištenjem tehnologije hibridomskih monoklonskih antitijela za proizvodnju mišjih hibridomskih monoklonskih antitijela. Točnije, spajanjem stanica slezene imuniziranih miševa sa stanicama mijeloma ljudi ili miševa, formiraju se hibridomske stanice koje luče specifična hibridomska monoklonska antitijela. Humaniziranom modifikacijom mišjih monoklonskih antitijela i modifikacijom antitijela genetskim inženjeringom kako bi im se dala konstantna ljudska imunoglobulinska regija, može se smanjiti njihova imunogenost. Inženjering monoklonskih antitijela široko se koristi u biomedicinskim i kliničkim primjenama.

Alpha Lifetech može pružiti sveobuhvatne usluge inženjeringa antitijela, od dizajna predkliničkih istraživačkih protokola do otkrivanja konjugata antitijela i lijekova (ADC) i validacije na životinjama. Konjugati antitijela i lijekova (ADC) mogu dostavljati kemoterapijske lijekove stanicama raka. Nakon vezanja na specifične ciljeve eksprimirane na stanicama raka, ADC oslobađa citotoksične lijekove u stanice raka. Alpha Lifetech također može pružiti kupcima sveobuhvatne usluge sazrijevanja afiniteta antitijela. S naprednom optimizacijom mutacija i tehnologijom probira visokog protoka faga, antitijela s određenim afinitetom se prvo probiru, a zatim se uvode mutacije aminokiselina kako bi se generirale različite varijante. Nakon toga, antitijela visokog afiniteta su procijenjena i probirena korištenjem tehnika probira. Nakon više krugova optimizacije i strukturne analize, konačno su dobivena antitijela s većim afinitetom i jačom specifičnošću.

Alpha Lifetech može konstruirati različite vrste biblioteka faga za prikaz antitijela, uključujući imunološke biblioteke, nativne biblioteke, polusintetske biblioteke i sintetske biblioteke. Na temelju visokog kapaciteta biblioteka antitijela mogu se dobiti visoko specifična antitijela. Mogu se osigurati višestruki fagemidni vektori kao što su pMECS, pComb3X i pCANTAB 5E, kao i sojevi kao što su TG1 E. coli, XL1 Blue i ER2738. Osim kapaciteta biblioteke do 10^9, stopa umetanja ciljnih fragmenata biblioteke također je visoka, stvarajući dovoljne uvjete za probir antitijela koja zadovoljavaju kupce. Dijagram toka usluge pripreme antitijela tvrtke Alpha Lifetech temeljene na tehnologiji prikaza faga prikazan je na slici 1.

Sl.1 Dijagram procesa za pripremu monoklonskih antitijela temeljenih na tehnologiji fagnog prikaza.

Tijek rada za proizvodnju antitijela na fagnom prikazu

Koraci	Sadržaj usluge	Vremenska crta
Korak 1: Imunizacija životinja	(1) Imunizacija životinja 4 puta, docjepljivanje 1 doza, ukupno 5 imuniziranih doza. (2) Prije imunizacije prikupljen je negativni serum, a ELISA test je proveden na četvrtoj dozi kako bi se otkrio titar seruma. (3) Ako titar serumskih antitijela četvrte doze zadovoljava uvjete, jedna dodatna doza imunizacije bit će primijenjena 7 dana prije uzimanja krvi. Ako ne zadovoljava uvjete, nastavit će se rutinska imunizacija. (4) Kvalificirana potentnost, uzimanje krvi i odvajanje monocita	10 tjedana
Korak 2: Priprema cDNA	(1) Ekstrakcija ukupne RNA PBMC-a (komplet za ekstrakciju RNA) (2) Visokovjerna RT-PCR priprema cDNA (komplet za reverznu transkripciju)	1 dan
Korak 3: Izgradnja biblioteke antitijela	(1) Koristeći cDNA kao predložak, geni su amplificirani s dva kruga PCR-a. (2) Konstrukcija i transformacija faga: spajanje gena s fagemidnim vektorom, elektroporacijska transformacija TG1 bakterije domaćina, konstrukcija biblioteke antitijela. (3) Identifikacija: Nasumično odabrati 24 klona, stopa pozitivne PCR identifikacije + stopa insercije. (4) Potpomognuta priprema faga: amplifikacija + pročišćavanje faga M13. (5) Spašavanje biblioteke fagnog prikaza	3-4 tjedna
Korak 4: Probir biblioteke antitijela (3 kruga)	(1) Zadani 3-kružni probir (probir na čvrstoj fazi): probir pod pritiskom za uklanjanje nespecifičnih antitijela u najvećoj mogućoj mjeri. (2) Amplifikacija pojedinačnog klona odabranim bakteriofagom + IPTG inducirana ekspresija + ELISA detekcija pozitivnih klonova. (3) Svi pozitivni klonovi su odabrani za sekvenciranje gena.	4-5 tjedana

Prednost tehnologije prikaza faga

Alpha Lifetech ima bogato iskustvo u području razvoja antitijela. Tijekom godina, Alpha Lifetech je uspostavio sveobuhvatnu platformu za razvoj antitijela.

Usluge podrške

Možemo pružiti različite usluge izgradnje imunoloških biblioteka na bazi životinja i usluge probira prirodnih antitijela prema potrebama kupaca.

Višestruki cilj

Dostupne su usluge otkrivanja više ciljnih antitijela: proteini, peptidi, male molekule, virusi, membranski proteini, mRNA itd.

Višestruki vektori

Personalizirana usluga izgradnje knjižnice, možemo pružiti različite bakteriofagne vektore, uključujući PMECS, pComb3X i pCANTAB 5E, te ih modificirati prema potrebama kupaca.

Platforma za zrele

Kapacitet pohrane može doseći 10^8-10^9, stope umetanja su iznad 90%, a afinitet antitijela dobivenih probirom je općenito na razini nM pM.

Povezana USLUGA

Višestruke strategije razvoja antitijela

Služba za razvoj monoklonskih antitijela

Platforma za hibridomsku tehnologiju

Platforma za sortiranje pojedinačnih B stanica

Platforma za razvoj antitijela za prikaz faga

razvoj monoklonskih antitijela - Alpha Lifetech

Služba za razvoj monoklonskih antitijela

Možemo pružiti visokokvalitetne, visoko čiste i vrlo specifične usluge razvoja monoklonskih antitijela, uključujući proizvodnju mišjih monoklonskih antitijela i zečjih monoklonskih antitijela.

Platforma za hibridomsku tehnologiju

Uključujući program imunizacije, usluge pripreme antitijela, pročišćavanje antitijela, visokopropusno sekvenciranje antitijela, validaciju antitijela itd.

Platforma za sortiranje pojedinačnih B stanica

Alpha Lifetech ima prednosti u vremenu probira i dobivanju visokokvalitetnih antitijela. Može osigurati dizajn, sintezu i modifikaciju antigena, imunitet životinja, probir obogaćivanja pojedinačnih B stanica, sekvenciranje pojedinačnih stanica.