Platfòm Mezi Afinite
Baze sou platfòm Octet ak Biacore-T2000, Alpha Lifetech ka bay sèvis detèminasyon afinite serye.
Mande yon Pri01
Platfòm Mezi Afinite
Baze sou platfòm Octet ak Biacore-T2000, Alpha Lifetech ka bay sèvis detèminasyon afinite serye. Nou ka bay detèminasyon afinite pou plizyè echantiyon, tankou antikò, selil, pwoteyin, ti molekil elatriye. Gen plizyè metòd detèminasyon afinite, tankou rezonans plasmon sifas (SPR) ak detèminasyon afinite entèferans bio-kouch (BLI).
Alpha Lifetech gen yon platfòm detèminasyon afinite pwofesyonèl ak egzat ki konbine ELISA ak detèminasyon afinite, bay rezilta detèminasyon afinite pwofesyonèl, efikas, rapid ak presi pou kliyan atravè lemond. Nou ka ofri de metòd pou kliyan yo chwazi: Detèminasyon Afinite Rapid ak Detèminasyon Afinite Presi. Detèminasyon afinite rapid se yon detèminasyon konsantrasyon sèl, alòske detèminasyon afinite presi ka mezire afinite diferan konsantrasyon. Aplike nan etid entèraksyon ant divès konpoze ti molekil, peptid, pwoteyin, oligonikleotid ak oligomè, osi byen ke lipid, bakteriofaj, viris ak selil. Platfòm mezi afinite a ka poze yon fondasyon pou tès ak depistaj dwòg afinite, dekouvèt antikò epi fasilite rechèch ki vin apre.
Entwodiksyon sou Afinite Obligatwa
Afinite enpòtan nan evalyasyon entèraksyon entèmolekilè, tès afinite dwòg, ak tès depistaj dwòg. Entèraksyon entèmolekilè yo ka dekri pa ekwasyon: L + R = LR, kote L reprezante ligand lib, R reprezante reseptè ki pa lye, epi LR reprezante konplèks ligand-reseptè ki lye. Reyaksyon lyezon defini entèraksyon entèmolekilè, kote echanj dinamik fèt ant eta lye ak eta ki pa lye pandan reyaksyon an jiskaske ekilib rive. Sa ka dekri pa de konstan vitès yo, Kon (konstan vitès lyezon) ak Koff (konstan vitès disosyasyon), nan reyaksyon an. Valè Kd a, ki se resipwòk konstan lyezon an (Ka), se Koff/Kon, yon konstan enpòtan pou afinite reyaksyon. Se poutèt sa, pi sere lyezon ant de molekil, se pi wo afinite a. Pi piti valè Kd a, se vis vèsa a. Ekwasyon sa a ka reprezante kòm yon koub ki gen fòm S sou yon graf semi-logaritmik, ak konsantrasyon ligand sou aks x la (sou aks echèl logaritmik la) ak limit fraksyonèl sou aks y la. Liy tire a reprezante konsantrasyon ligand lan nan yon Kd (1 nM) ki gen yon fraksyon lyezon 0.5.
Fig 1: Koub lyezon sigmoyid pou divès konsantrasyon ligand ki lye ak reseptè sifas selilè a. (Sous referans: Hunter SA, Cochran JR. Tès lyezon selilè pou detèmine afinite entèraksyon pwoteyin-pwoteyin: Teknoloji ak konsiderasyon.)
Metòd pou Detèmine Afinite
Tès afinite lyezon ELISA
Teknik ki pi itilize pou etidye afinite antikò a baze sou metòd ELISA a, ki karakterize pa konvenyans li, vitès li, senplisite li, gwo sansiblite li, ak gwo espesifikite li. Li ka itilize yon ti kantite reyaktif (sa vle di, antikò ak antijèn) epi mezire afinite antikò san bezwen reyaktif pou pirifikasyon. Lè yo imobilize antijèn nan sou yon sifas solid epi detekte li lè l sèvi avèk yon antikò prensipal, antikò segondè ki make a reyaji avèk antikò prensipal la pou li epi analize done yo nan yon lektè ELISA (tès imunosorban lye ak anzim).
Fig 2: Tès ki sanble ak ELISA pou evalye lyezon peptid yo ak sib yo. (Sous referans: Hajikarimlou, Maryam, et al., 2022. Yon apwòch konpitasyonèl pou konsepsyon rapid peptid ki detekte pwoteyin sifas S SARS-CoV-2 la.)
Tès afinite lyezon Rezonans Plasmonik Sifas (SPR)
Teknoloji SPR sitou detekte chanjman nan endis refraksyon. Avèk èd fenomèn optik tradisyonèl yo ak fenomèn rezonans limyè a, yo ka konstwi yon teknoloji analiz byosansè pou entèraksyon ant byomolekil yo pou detekte entèraksyon ant ligand ak analit sou chip byosansè. Yo ka jwenn siyal espesifik lyezon ak entèraksyon ant byomolekil yo lè yo siveye chanjman dinamik nan ang SPR yo pandan reyaksyon byolojik yo.
Fig 3: Analiz rezonans plasmon sifas (SPR) pou lyezon H10/AGR2. (Sous referans: Garri, Carolina, et al., 2018. Idantifikasyon, karakterizasyon, ak aplikasyon yon nouvo peptid kont omolog gradyan anterior 2 (AGR2).)
Tès afinite lyezon Bio Layer Interference (BLI)
Teknoloji entèferans biofilm se yon teknik deteksyon optik san etikèt, siveyans an tan reyèl, ki itilize sitou pou analiz kantitatif konplè sou entèraksyon entèmolekilè ak detèminasyon konsantrasyon pwoteyin. Teknoloji sa a itilize yon biosenseur ki baze sou sond pou detekte dirèkteman chanjman nan epesè biofilm nan sou echantiyon an. Lè yo detekte chanjman deplasman spectre entèferans lan, yo detekte lyezon ak disosyasyon ant biomolekil k ap kominike sou sifas detèktè a, epi yo montre deplasman an tan reyèl (nm) spectre entèferans lan.
Fig 4: Tès entèferometri byokouch (BLI) ant aLDRG ak kitinoligosakarid yo. (Sous referans: Li, Bing, 2023. Karakteristik Transkriptòm Konparatif ant Rizomòf ak If Armillaria sp. 541 k ap Patisipe nan Senbyoz Fongis ak Anfaz sou Domèn LysM yo.)
Konparezon ant teknoloji BLI ak SPR
| Non Teknoloji | BLI (Entèferometri Bio-Kouch) | SPR (Rezonans Plasmonik Sifas) |
|---|---|---|
| Prensip | Mezire chanjman nan modèl entèferans limyè ki reflete sou sifas detèktè a, detekte entèraksyon molekilè atravè chanjman nan epesè optik sou bio-kouch la. Li bay yon koub lyezon an tan reyèl (mezi dirèk). | Mezire entèraksyon molekilè yo lè li detekte chanjman siyal nan endis refraksyon an toupre sifas chip detèktè a (sa rive lè limyè kominike avèk koòdone lò ak vè a, sa ki lakòz chanjman nan endis refraksyon an). Done yo reflete kòm chanjman nan ang rezonans lan (mezi endirèk). |
| Manifaktirè | Sartorius | GE |
| Enstriman | Byosansè ForteBio | Enstriman SPR Louvri |
| Sistèm | Sistèm Okte ForteBio (pou analiz entèraksyon molekilè) | TraceDrawer (devlope pa Ridgeview Instruments, Syèd) |
| Avantaj | 1. Laj konpatibilite echantiyon, ekselan estabilite, espesyalman pou detekte ti molekil (egzijans espesifik pou pite echantiyon ak kondisyon tanpon yo mwens strik). Chip SSA yo efikas an tèm de pri pou etid lyezon. 2. Debi pi rapid ak tan eksperimantal pi kout konpare ak SPR. | 1. Istwa devlopman ki pi long, ki ofri pi gwo sansiblite an konparezon ak BLI. 2. Pi gwo presizyon ak robustès pou aplikasyon espesifik, tankou detekte pwoteyin ki ra oswa ki gen anpil valè ak done sou afinite ak espesifikite ki pi wo. |
| Dezavantaj | 1. Presizyon done yo yon ti jan pi ba konpare ak SPR. 2. Mande yon antretyen atansyon pou enstriman an. 3. Pri chip SSA a relativman wo. | 1. Kondisyon tampon pou detekte molekil ki piti anpil yo ka difisil anpil, sa ki ogmante risk pou deteksyon an echwe. 2. Chips yo jeneralman pi chè pase sa yo itilize nan BLI. 3. Evaporasyon echantiyon pandan eksperyans pwolonje kapab yon pwoblèm. |
| Kalite Chip | Chip SSA | Chip NTA |
Dimansyon Mezi Afinite a
Detèminasyon afinite a ka gen ladan antijèn-antikò (antijèn-antikò fò, antijèn-antikò fèb), pwoteyin-pwoteyin, pwoteyin-peptid, pwoteyin-ti molekil, ak pwoteyin ADN/ARN (aptamer). Lè w ap mezire KD, li nesesè pou konnen youn nan konsantrasyon molè yo. Lè ti molekil yo mare, yon pwa molekilè pa ka mwens pase 150 dalton.
| Kalite | Dimansyon | Prekosyon |
|---|---|---|
| 1. Antijèn-Antikò | 10^-6 pou rive 10^-12 | Valè Kd pifò antikò yo nan seri 10^-6-10^-7 a 10^-9. Anjeneral, yo kwè ke antikò ki gen gwo afinite yo nan 10^-9, alòske antikò ki gen gwo afinite yo nan 10^-12. |
| 2. Pwoteyin - Ti Molekil | 10^-4 pou rive 10^-5 | KD ti molekil ak pwoteyin yo se ant 10^-4 ak 10^-5, alòske 10^-3 ak 10^-7 yo nòmal epi yo pa ka rive nan 10^-10. Ti molekil kovalan yo ka rive nan 10^-10. |
| 3. Avidin-Biotin | 10^-14 | Afinite ka fasilman sibi lyezon ki pa espesifik, epi yo ka itilize streptavidin oswa afinite deglikozile. |
| 4. ADN-Pwoteyin | 10^-8 pou rive 10^-10 | ADN konplè ak kalite siperyè; fè atansyon pou anpeche enfliyans elektwoforèz. |
Egzijans echantiyon pou detèminasyon afinite
| Echantiyon | Kondisyon yo |
|---|---|
| 1. Gwo echantiyon molekil | Pwoteyin > 50 µg, antikò > 100 µg, pwoteyin biotinye > 200 µg; pwoteyin san biotin > 2 mg, egzijans pite > 90%, solisyon tanpon: PBS, HEPBS. Pa ka gen gwoup imidazòl; kontwòl kalite obligatwa. |
| 2. Ti echantiyon molekil | Kantite > 1mg, poud oubyen likid, likid la dwe idrosolubl nan dlo oubyen DMSO. Eseye pa mete gliseròl, imidazòl, trehalose oubyen lòt sèl ladan l; eseye evite reyaktif ki gen gwoup amine tankou Tris nan tanpon an, jeneralman PBS, HEPPS, elatriye san reyaktif òganik. |
Analiz echantiyon miltip
Alpha Lifetech ka bay tès afinite pou plizyè echantiyon, tankou antikò, selil, pwoteyin, ak lòt byomolekil.
Platfòm teknolojik ki gen matirite
Nou gen teknoloji avanse tankou tès lyezon spr, tès lyezon bli, ak tès lyezon elisa.
Seleksyon pwojè fleksib
Kliyan yo ka chwazi ant detèminasyon afinite rapid ak detèminasyon afinite presi.
Rezilta ki gen gwo presizyon
Ekip teknik pwofesyonèl nou an ka asire rezilta detèminasyon afinite efikas, egzat, epi fyab.
Etid KaKA
Tès afinite rapid BLI pou antikò ak tès afinite aptamer
Kaptire aptamè biotinile yo ak espesifikasyon sond SA epi fonn yo. Fonn epi delye echantiyon an nan yon konsantrasyon fiks, solidifye aptamè Sib 1-5 yo ki te kaptire espesifik pou sond lan, epi apre saturation siyal la, lye ak echantiyon an. Lè sa a, ajoute yo nan yon plak 96-pi.
Fig 5: Distribisyon pozisyon deteksyon pou echantiyon plak 96-pi. B refere a tanpon ki itilize pou balanse ak disosyasyon detèktè yo. L: Aptamè Biotin Target 1-5, 221: Echantiyon.
Peye atansyon sou perçage a pou asire estabilite ak presizyon done yo, epi mete pwogram ki koresponn lan pou jwenn rezilta yo:
Fig 6: Dyagram entèraksyon ant aptamè Sib 1, 2, ak 3 yo ak echantiyon yo. (CH 1 \ 3 \ 5 reprezante siyal ak done entèraksyon ant sond aptamè Sib 1 \ 2 \ 3 ki solidifye a ak echantiyon an.)
Fig 7: Dyagram entèraksyon ant aptamè Target 4 ak 5 yo ak echantiyon yo. (CH 1 \ 3 reprezante siyal ak done entèraksyon ant sond aptamè Target 4 \ 5 solidifye a ak echantiyon an.)
rezilta yo montre
Men rezilta yo te jwenn: Afinite adaptè Target 1 an ak echantiyon an apre ajisteman an te 9.41 ^ -8; afinite adaptè Target 2 an ak echantiyon an apre ajisteman an se 8.32 ^ -8; afinite adaptè Target 3 an ak echantiyon an apre ajisteman an se 8.64 ^ -8; afinite adaptè Target 4 an ak echantiyon an apre ajisteman an se 3.70 ^ -8; afinite adaptè Target 5 an ak echantiyon an apre ajisteman an se 3.01 ^ -8.
Si ou gen nenpòt kesyon, tanpri pa ezite kontakte nou nenpòt ki lè.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102