Aptamer fejlesztőplatform

Az aptamerek egyszálú oligonukleotidok (DNS, RNS vagy XNA), amelyek nagy affinitással és specificitással rendelkeznek, specifikusan kötődnek a célmolekulákhoz, például antitestekhez, és széles körben használják őket bioszenzorok, diagnosztika és terápiák fejlesztésében.

Az Alpha Lifetech által biztosított aptamer platform két kategóriába tartozik: az egyik az aptamer szintézis platform, amely főként a SELEX aptamer könyvtár szintézis szolgáltatást és az aptamer (DNS, RNS vagy XNA) fejlesztési szolgáltatást foglalja magában, a másik pedig az aptamer szűrőplatform, amely magában foglalja a SELEX technológián alapuló szűrőszolgáltatásokat fehérjék, peptidek, sejtek, kis molekulák, fémionok és más célmolekulák esetében, valamint a downstream aptamer optimalizálási és azonosítási elemzési szolgáltatásokat.

Aptamer szintézis platform

SELEX aptamer könyvtár szintézis szolgáltatás

A SELEX aptamer könyvtár szintézis szolgáltatás főként nagyszámú véletlenszerű, egyszálú oligonukleotid szekvenciát tartalmazó könyvtár létrehozását foglalja magában in vitro kémiai szintézissel, a célmolekulák szerint. A könyvtárépítés a SELEX technológia kiindulópontja, amely hatalmas véletlenszerű könyvtárak létrehozásával bőséges jelöltszekvenciákat biztosít a későbbi szűrési folyamathoz, és növeli a nagy affinitású aptamerek szűrésének lehetőségét.

A könyvtárszintézis főként a következő lépésekre oszlik:

Lépések	Technológiai részletek
Célmolekulák azonosítása	Azonosítsa a célmolekulákat, amelyeket aptamerek szempontjából szűrni kell, amelyek lehetnek fehérjék, nukleinsavak, kis molekulájúak, fémionok stb.
Véletlenszerű sorrendtervezés	A véletlenszerű szekvenciahosszt, a bázisösszetételt és egyéb paramétereket a célmolekulák jellemzői és a szűrési követelmények szerint tervezték. A véletlenszerű szekvenciák jellemzően több tíz és több száz bázis közötti hosszúságúak.
Fix szekvenciák szintézise	Mindkét végén rögzített szekvenciával (például PCR primer szekvenciákkal) rendelkező oligonukleotid fragmenseket terveznek és szintetizálnak, amelyeket a későbbi amplifikációs és szűrési folyamatban használnak fel.

A szintetizált könyvtárat további feldolgozásnak kell alávetni a minőségellenőrzés érdekében. A könyvtár koncentrációját úgy határozták meg, hogy biztosítsák annak alkalmazhatóságát a későbbi szűrési folyamatban. A könyvtárban található véletlenszerű szekvenciák diverzitását és pontosságát szekvenálással és más módszerekkel igazolták annak biztosítása érdekében, hogy a könyvtár minősége megfeleljen a szűrési követelményeknek.

A fenti lépésekkel egy kiváló minőségű és rendkívül változatos SELEX aptamer könyvtár szintetizálható, amely bőséges jelöltszekvenciákat biztosít a későbbi szűrési folyamathoz.

Aptamer fejlesztési szolgáltatások (DNS, RNS vagy XNA)

Az aptamerek általában nukleinsav-aptamerekre utalnak. A nukleinsav-aptamerek magukban foglalják a DNS-aptamereket, az RNS-aptamereket és az XNA-aptamereket, amelyek kémiailag módosított nukleinsav-aptamerek. A SELEX technikát széles körben alkalmazzák az aptamerek fejlesztésére. Az aptamerfejlesztési szolgáltatások alapvető munkafolyamata magában foglalja a könyvtárépítést, a célpontkötést, az izolálást és tisztítást, az amplifikációt, a többszörös szűrési köröket és a szekvencia-azonosítást. Sok éven át a könyvtárépítésre összpontosítottunk, és gazdag tapasztalattal rendelkezünk az aptamerfejlesztésben. Elkötelezettek vagyunk az iránt, hogy ügyfeleinknek jobb szolgáltatásokat nyújtsunk.

SELEX technológiai folyamat

A SELEX folyamat több fordulóból áll, amelyek mindegyike a következő főbb lépésekből áll:

Könyvtár és cél kötés

A létrehozott nukleinsav-könyvtárat specifikus célmolekulákkal (például fehérjékkel, kis molekulájú vegyületekkel stb.) keverik, hogy a könyvtárban lévő nukleinsav-szekvenciáknak lehetőségük legyen a célmolekulákhoz kötődni.

A nem kötött molekulák izolálása

A célmolekulához nem kötődő nukleinsav-szekvenciákat specifikus módszerekkel, például affinitáskromatográfiával, mágneses gyöngyös elválasztással stb. választják el a keverékből.

Kötőmolekulák amplifikációja

A célmolekulához kötött nukleinsav-szekvenciát amplifikálják, általában polimeráz láncreakció (PCR) technológiával. A következő szűrési fázisban az amplifikált szekvenciákat használják kiindulási könyvtárként.

1. ábra: SELEX szűrési folyamat

Aptamer szűrőplatform

Aptamer szűrőszolgáltatás

Az Alpha Lifetech széleskörű, specializált aptamer szűrési szolgáltatásokat kínál, különféle SELEX módszertanokat alkalmazva a különböző típusú molekulákra:

Céltípusok	Műszaki adatok
Fehérje aptamer szűrés SELEX-szel	A fehérje aptamer szűrés fő célja olyan aptamerek szűrése, amelyek specifikusan képesek kötődni a célfehérje molekulákhoz. Ezek az aptamerek egyszerűbben szintetizálhatók, stabilabbak és kevésbé érzékenyek a környezeti tényezőkre.
Peptid aptamer szűrés SELEX-szel	A peptid aptamerek rövid, nagy specificitású és affinitású peptidszekvenciák, amelyek specifikusan kötődhetnek a célanyagokhoz, és széleskörű alkalmazási potenciált mutatnak a biomedicinális területen. Egy specifikus szűrési eljárással nagyszámú véletlenszerű peptidszekvencia-könyvtárból szűrik ki a célmolekulákhoz specifikusan kötődni képes peptid aptamereket.
Sejtspecifikus aptamer szűrés (Cell-SELEX)	Célpontként célsejteket vagy a sejtfelszínen található specifikus molekulákat készítenek elő. A célpontok lehetnek egész sejtek, a sejtmembránon lévő receptorok, fehérjék vagy más kis molekulák.
Kis molekulájú aptamer szűrés Capture SELEX módszerrel	A Capture SELEX egy in vitro szűrőtechnika kis molekulájú aptamerek szűrésére, amely a SELEX egy változata. A Capture SELEX különösen alkalmas kis molekulájú célpontok aptamer szűrésére, amelyek jellemzően kevesebb funkciós csoporttal rendelkeznek, és nehezen rögzíthetők közvetlenül szilárd fázisú hordozókra.
Élőállat-alapú SELEX szolgáltatások	Az élő állatokon alapuló szűrővizsgálat egy széles körben alkalmazott kísérleti technika a biotudomány, az orvostudomány és a biotechnológia területén, amely élő állatokat használ kísérleti modellként specifikus molekulák, gyógyszerek, terápiák vagy biológiai folyamatok szűrésére és értékelésére. A szolgáltatások célja az emberi test fiziológiai környezetének szimulálása, hogy pontosabban megjósolják és értékeljék a kísérleti eredmények hatékonyságát és biztonságosságát az emberi szervezetben.

Aptamer optimalizálási szolgáltatás

Az aptamerek hidrofil jellege, a termelés során fellépő nagy affinitásveszteség és a gyors kiválasztás korlátozza alkalmazásukat. Jelenleg számos optimalizálási módszert vizsgálnak az aptamerek teljesítményének javítása érdekében.

Az aptamer optimalizálására számos módszert alkalmazunk, például csonkolást, módosításokat, a megfelelő csoporthoz (tiol, karboxil, amin, fluorofór stb.) való konjugációt.

Aptamer jellemzési elemzési szolgáltatás

Az aptamer jellemzési elemzési szolgáltatás a kapott aptamer teljesítményértékelésének, szerkezetfelbontásának és funkcionális ellenőrzésének professzionális szolgáltatására utal annak biztosítása érdekében, hogy az aptamer megfeleljen a specifikus kötődési képességre, stabilitásra és specificitásra vonatkozó követelményeknek. Főként affinitás- és specificitáselemzést, stabilitásértékelést és biológiai funkció-ellenőrzést foglal magában.