Aptamer fejlesztési platform

Az aptamerek egyszálú oligonukleotidok (DNS, RNS vagy XNS), amelyek nagy affinitású és nagy specificitásúak, és specifikusan kötődnek célmolekulákhoz, például antitestekhez, és széles körben használják őket bioszenzorok fejlesztésére, diagnosztikára és terápiára.

Az Alpha Lifetech által biztosított aptamer platform két kategóriát foglal magában: aptamer szintézis platform, amely főként SELEX aptamer könyvtár szintézis szolgáltatást és aptamer (DNS, RNS vagy XNA) fejlesztési szolgáltatást foglal magában, és aptamer szűrési platform, beleértve a SELEX technológián alapuló szűrési szolgáltatásokat fehérjékhez, peptidekhez, sejtekhez, kis molekulákhoz, fémionok azonosításához és egyéb célpont-elemző szolgáltatásokhoz.

Aptamer szintézis platform

SELEX aptamer könyvtár szintézis szolgáltatás

A SELEX aptamer könyvtár szintézis szolgáltatása főként egy nagyszámú véletlenszerű egyszálú oligonukleotid szekvenciát tartalmazó könyvtár létrehozását foglalja magában in vitro kémiai szintézissel a célmolekulák szerint. A könyvtárépítés a SELEX technológia kiindulópontja, amely bőséges jelölt szekvenciákat biztosít a következő szűrési folyamathoz hatalmas véletlenszerű könyvtárak felépítésével, és növeli a nagy affinitású aptamerek szűrésének lehetőségét.

A könyvtárszintézis főként a következő lépésekre oszlik:

Lépések	Technológiai részletek
Azonosítsa a célmolekulákat	Azonosítsa azokat a célmolekulákat, amelyeket aptamerekre kell szűrni, ezek lehetnek fehérjék, nukleinsavak, kis molekuláris, fémionok stb.
Random Sequence Design	A véletlenszerű szekvencia hosszát, bázisösszetételét és egyéb paramétereit a célmolekulák jellemzőinek és a szűrési követelményeknek megfelelően határoztuk meg. A véletlenszerű szekvenciák jellemzően tíz és száz bázis közötti hosszúságúak.
Rögzített szekvenciák szintézise	Mindkét végén rögzített szekvenciával (például PCR primer szekvenciákkal) rendelkező oligonukleotid fragmenseket terveznek és szintetizálnak, amelyeket a következő amplifikációs és szűrési folyamatban használnak fel.

A szintetizált könyvtárat még tovább kell feldolgozni a minőségellenőrzés érdekében. A könyvtár koncentrációját úgy határoztuk meg, hogy a későbbi szűrési folyamatban is alkalmazható legyen. A könyvtárban található véletlenszerű szekvenciák sokféleségét és pontosságát szekvenálással és egyéb módszerekkel ellenőriztük annak biztosítására, hogy a könyvtár minősége megfeleljen a szűrési követelményeknek.

A fenti lépésekkel egy jó minőségű és rendkívül változatos SELEX aptamer könyvtár állítható elő, amely bőséges jelölt szekvenciákat biztosíthat a következő szűrési folyamathoz.

Aptamer fejlesztési szolgáltatások (DNS, RNS vagy XNA)

Az aptamerek általában nukleinsav-aptamerekre utalnak. A nukleinsav-aptamerek közé tartoznak a DNS-aptamerek, az RNS-aptamerek és az XNA-aptamerek, amelyek kémiailag módosított nukleinsav-aptamerek. A SELEX technikát széles körben alkalmazzák aptamerek fejlesztésére. Az aptamer fejlesztési szolgáltatások alapvető munkafolyamata magában foglalja a könyvtár felépítését, a célmegkötést, az izolálást és tisztítást, az amplifikációt, a többszörös szűrést és a szekvencia azonosítást. Évek óta a könyvtárépítésre és az aptamer fejlesztés terén szerzett gazdag tapasztalattal foglalkozunk. Elkötelezettek vagyunk amellett, hogy jobb szolgáltatást nyújtsunk ügyfeleinknek.

SELEX technológiai folyamat

A SELEX folyamat több körből áll, amelyek mindegyike a következő kulcslépésekből áll:

Könyvtár és célkötés

Az elkészített nukleinsavkönyvtárat specifikus célmolekulákkal (például fehérjékkel, kis molekulájú vegyületekkel stb.) keverik össze, így a könyvtárban található nukleinsavszekvenciáknak lehetőségük van a célmolekulákhoz kötődni.

Kötetlen molekulák izolálása

A célmolekulához nem kötődő nukleinsavszekvenciákat speciális módszerekkel választják el a keverékből, például affinitáskromatográfiával, mágneses gyöngyszétválasztással stb.

Kötőmolekulák amplifikációja

A célmolekulához kötött nukleinsavszekvenciát általában polimeráz láncreakciós (PCR) technológia alkalmazásával amplifikálják. A következő szűrési fázisban az amplifikált szekvenciákat használjuk kiindulási könyvtárként.

1. ábra: SELEX szűrési folyamat

Aptamer szűrési platform

Aptamer szűrési szolgáltatás

Az Alpha Lifetech speciális aptamer szűrési szolgáltatások széles skáláját kínálja, különféle SELEX-módszereket alkalmazva különböző típusú molekuláihoz:

Céltípusok	Műszaki részletek
Protein Aptamer szűrés a SELEX által	A fehérje aptamer szűrés fő célja olyan aptamerek szűrése, amelyek specifikusan kötődni tudnak a célfehérje molekulákhoz. Ezek az aptamerek egyszerűbben szintetizálhatók, stabilabbak és kevésbé érzékenyek a környezeti tényezőkre.
Peptid Aptamer szűrés a SELEX által	A peptid-aptamerek nagy specificitással és affinitással rendelkező rövid peptidszekvenciák egy osztálya, amelyek specifikusan kötődhetnek a célanyagokhoz, és széles körű alkalmazási lehetőséget mutatnak az orvosbiológiai területen. Egy specifikus szűrési eljárás során a célmolekulákhoz specifikusan kötődni képes peptid-aptamereket nagyszámú véletlenszerű peptidszekvencia-könyvtárból szűrik.
Sejtspecifikus aptamer szűrés (Cell-SELEX)	A célsejteket vagy a sejtfelszínen lévő specifikus molekulákat célpontként készítik elő. A célpontok lehetnek egész sejtek, a sejtmembrán receptorai, fehérjék vagy más kis molekulák.
A Capture SELEX kis molekulájú aptamer szűrése	A Capture SELEX egy in vitro szűrési technika kis molekulájú aptamerek szűrésére, amely a SELEX egy változata. A Capture SELEX különösen alkalmas kis molekulájú célpontok aptamer szűrésére, amelyek jellemzően kevesebb funkcionális csoporttal rendelkeznek, és nehezen rögzíthetők közvetlenül szilárd fázisú hordozókon.
Élő Állat-alapú SELEX szolgáltatások	Az élő állatokon alapuló szűrési szolgáltatás a biotudomány, az orvostudomány és a biotechnológia területén széles körben használt kísérleti technika, amely élő állatokat használ kísérleti modellként meghatározott molekulák, orvosi, terápiás vagy biológiai folyamatok szűrésére és értékelésére. A szolgáltatások célja az emberi szervezet élettani környezetének szimulációja, hogy pontosabban előre jelezzék és értékeljék a kísérleti eredmények hatékonyságát és biztonságosságát az emberi szervezetben.

Aptamer optimalizálási szolgáltatás

A hidrofilitás, a nagy affinitásvesztés a termelés során és az aptamerek gyors kiválasztódása korlátozza alkalmazásukat. Jelenleg számos optimalizálási módszert vizsgáltak az aptamerek teljesítményének javítására.

Számos módszerünk van az aptamer optimalizálására is, amely csonkolással, módosításokkal, a megfelelő csoporthoz (tiol, karboxi, amin, fluorofor stb.) való konjugálással áll.

Aptamer jellemzési elemző szolgáltatás

Az Aptamer jellemzési elemző szolgáltatás a teljesítményértékelési szerkezet felbontásának és a kapott aptamer funkcionális ellenőrzésének professzionális szolgáltatására utal, amely biztosítja, hogy az aptamer megfelel-e az adott kötési képesség, stabilitás és specifitás követelményeinek. Főleg affinitás- és specifitáselemzést, stabilitásértékelést és biológiai funkcióellenőrzést foglal magában.