Phage Display Antibody Development Platform

Az Alpha Lifetech az antitest-felderítés terén szerzett kiterjedt projekttapasztalatával testreszabott monoklonális és poliklonális antitest-szolgáltatásokat tud nyújtani több faj számára, valamint antitestkönyvtár-építési és szűrési szolgáltatásokat. Az Alpha Lifetech garantált minőségi antitesteket és rekombináns antitesteket, valamint megfelelő szolgáltatásokat tud nyújtani ügyfeleinek hatékony, nagyon specifikus és stabil antitestek előállításához. Átfogó antitestplatformok és antitesttervezés segítségével szolgáltatásokat nyújtunk az antitestgyártás előtti és utáni szakaszában, beleértve a technikai szolgáltatásokat, például az antitest-előkészítést, -tisztítást, antitest-szekvenálást és validálást.

Az Alpha Lifetech kiforrott antitest-felfedezési platformmal rendelkezik, amely számos szolgáltatást kínál ügyfelei számára, beleértve az állati immunitást, a fágmegjelenítésű antitest-könyvtár felépítését és szűrését, az antitest-szekvenálást, az antitest-expressziót, az antitest-tisztítást, az antitest-validálást és a hibridóma-technológián alapuló antitest-jelölést, az egysejtes B-sejtes technológiát, a fágmegjelenítési technológiát stb. Az Alpha Lifetech szabványos gyártósorral rendelkezik, és az antitest-előkészítési szolgáltatásokon kívül olyan támogató szolgáltatások is biztosíthatók, mint az antitest-humanizáció, az antitest-affinitás-érés, az ADC-gyógyszer-tervezés és -fejlesztés, valamint a CAR-T későbbi szekvenciatervezése. Ezzel egyidejűleg az Alpha Lifetech M13, T4 és T7 fágmegjelenítési technológiai platformokon alapuló antitestkönyvtárat épített fel, amely akár 10^8-10^9 tárolókapacitással rendelkezik. A könyvtár pozitív aránya, beillesztési aránya és diverzitása egyaránt elérheti a 90%-ot.

Phage display technológia

A monoklonális antitestek előállítását kezdetben hibridóma monoklonális antitest technológiával készítették elő, hogy egér hibridóma monoklonális antitestet állítsanak elő. Pontosabban, az immunizált egerekből származó lépsejtek és az emberekből vagy egerekből származó mielómasejtek fuzionálásával hibridómasejtek képződnek, amelyek specifikus hibridóma monoklonális antitest antitesteket választanak ki. Az egér monoklonális antitestek humanizált módosításával és az antitestek géntechnológiai módosításával, hogy állandó humán immunglobulin régiót kapjanak, immunogenitásuk csökkenthető. A monoklonális antitestek tervezését széles körben használják orvosbiológiai és klinikai alkalmazásokban.

Az Alpha Lifetech egyablakos antitest-mérnöki szolgáltatásokat tud nyújtani a preklinikai kutatási protokoll tervezésétől az antitest gyógyszerkonjugátumok (ADC) felfedezéséig és az állatok validálásáig. Az antitest gyógyszerkonjugátumok (ADC-k) kemoterápiás gyógyszereket szállíthatnak a rákos sejtekhez. A rákos sejteken expresszált specifikus célpontokhoz való kötődés után az ADC citotoxikus gyógyszereket bocsát ki a rákos sejtekbe. Az Alpha Lifetech átfogó antitest-affinitás-érési szolgáltatásokat is tud nyújtani az ügyfeleknek. A fejlett mutációoptimalizálással és a nagy áteresztőképességű fágmegjelenítési szűrési technológiával először bizonyos affinitással rendelkező antitesteket szűrnek, majd aminosavmutációkat vezetnek be, hogy változatos variánsokat hozzanak létre. Ezt követően nagy affinitású antitesteket értékeltünk és szűrtünk szűrési technikák alkalmazásával. Többszöri optimalizálási és szerkezeti elemzés után végül nagyobb affinitású és erősebb specifitású antitesteket kaptunk.

Az Alpha Lifetech különféle típusú antitest-fág-megjelenítő könyvtárakat tud létrehozni, beleértve az immunkönyvtárakat, a natív könyvtárakat, a félszintetikus könyvtárakat és a szintetikus könyvtárakat. Az antitestkönyvtárak nagy kapacitása alapján nagyon specifikus antitestek nyerhetők. Több phagemid vektor, például pMECS, pComb3X és pCANTAB 5E, valamint törzsek, például TG1 E. coli, XL1 Blue és ER2738 biztosíthatók. A 10^9-ig terjedő könyvtárkapacitáson kívül a könyvtár célfragmentum-beillesztési sebessége is magas, megfelelő feltételeket teremtve az antitestek szűréséhez, amelyek kielégítik a vásárlókat. Az Alpha Lifetech fágmegjelenítési technológián alapuló antitest-előkészítő szolgáltatásának folyamatábrája az 1. ábrán látható.

1. ábra A monoklonális antitestek fágmegjelenítési technológián alapuló előállításának folyamatábrája.

Phage Display Antitest Production Workflow

Lépések	Szolgáltatástartalom	Idővonal
1. lépés: Állatok immunizálása	(1) Állatimmunizálás 4 alkalommal, emlékeztető immunizálás 1 adag, összesen 5 adag immunizálás. (2) Az immunizálás előtt negatív szérumot gyűjtöttünk, és a negyedik dózisnál ELISA-t végeztünk a szérumtiter kimutatására. (3) Ha a negyedik dózis szérum antitest-titere megfelel a követelményeknek, egy további immunizálási dózist kell beadni 7 nappal a vérvétel előtt. Ha nem felel meg a követelményeknek, a rutin immunizálás folytatódik. (4) Minősített potencia, vérvétel és monociták elválasztása	10 hét
2. lépés: cDNS előkészítés	(1) PBMC Total RNS extrakció (RNS Extraction Kit) (2) A cDNS nagy pontosságú RT-PCR-előállítása (reverz transzkripciós kit)	1 nap
3. lépés: Antitest Library felépítése	(1) A cDNS-t templátként használva a géneket két PCR-körrel amplifikáltuk. (2) Fág konstrukció és transzformáció: génsplicing phagemid vektor, TG1 gazdabaktériumok elektroporációs transzformációja, antitestkönyvtár felépítése. (3) Azonosítás: Véletlenszerűen válasszunk ki 24 klónt, PCR-azonosító pozitív arány + beillesztési arány. (4) Asszisztált fág preparálás: M13 fág amplifikáció+tisztítás. (5) Phage display könyvtár mentése	3-4 hét
4. lépés: Antitestkönyvtári szűrés (3 kör)	(1) Alapértelmezett 3 körös szűrés (szilárd fázisú szűrés): nyomás alatti szűrés a nem specifikus antitestek lehető legnagyobb mértékű eltávolítására. (2) Egyklón amplifikációs bakteriofág szelektálás+IPTG által indukált expresszió+pozitív klónok ELISA kimutatása. (3) Minden pozitív klónt kiválasztottunk a génszekvenáláshoz.	4-5 hét

A fágmegjelenítési technológia előnyei

Az Alpha Lifetech gazdag tapasztalattal rendelkezik az antitestfejlesztés területén. Az évek során az Alpha Lifetech átfogó antitestfejlesztési platformot hozott létre.

Támogatási szolgáltatások

Különféle állati alapú immunkönyvtár építési szolgáltatásokat és természetes antitest könyvtári szűrési szolgáltatásokat tudunk nyújtani az ügyfelek igényei szerint

Több célpont

Több célellenanyag-felderítési szolgáltatás is elérhető: fehérjék, peptidek, kis molekulák, vírusok, membránfehérjék, mRNS stb.

Több vektor

Személyre szabott könyvtárépítési szolgáltatás, különböző bakteriofág vektorokat, köztük PMECS-t, pComb3X-et és pCANTAB 5E-t tudunk biztosítani, és az ügyfelek igényei szerint módosítani

Érett platform

A tárolási kapacitás elérheti a 10 ^ 8-10 ^ 9 értéket, az inszerciós arány 90% felett van, és a szűréssel nyert antitestek affinitása általában nM pM szinten van.

Kapcsolódó SZOLGÁLTATÁS

Többféle antitest fejlesztési stratégia

Monoklonális antitest-fejlesztő szolgálat

Hybridoma technológiai platform

Egyetlen B cellás rendezési platform

Phage Display Antibody Development Platform

monoklonális antitestek fejlesztése - Alpha Lifetech

Monoklonális antitest-fejlesztő szolgálat

Kiváló minőségű, nagy tisztaságú és rendkívül specifikus monoklonális antitest fejlesztési szolgáltatásokat tudunk nyújtani, beleértve az egér monoklonális antitestek és nyúl monoklonális antitestek előállítását

Hybridoma technológiai platform

Beleértve az immunizálási programot, az antitest-előkészítési szolgáltatásokat, az antitest-tisztítást, az antitestek nagy áteresztőképességű szekvenálását, az antitestek validálását stb.

Egyetlen B cellás rendezési platform

Az Alpha Lifetech előnyei a szűrési idő és a jó minőségű antitestek beszerzése terén. Biztosíthat antigéntervezést, szintézist és módosítást, állati immunitást, egyetlen B-sejt dúsítási szűrést, egysejt-szekvenálást.