Bevezetés a szintetizált antitestkönyvtárakba

A szintetizált antitestkönyvtár, más néven De novo könyvtár, egy szintetikus módszer, amely olyan technikákat alkalmaz, mint a DNS-szintézis vagy a fágbemutató, hogy teljes antitest variábilis régiókat, beleértve a keretrégiókat és a CDR-eket, megtervezzen és szintetizáljon anélkül, hogy naiv antitestkönyvtárakra támaszkodna.

A félszintetikus antitestkönyvtárakat természetes úton előforduló antitestkönyvtárak és szintetikus diverzitás kombinálásával hozzák létre. Ez általában DNS-oligonukleotidok szintetizálását foglalja magában, hogy különböző komplementer meghatározó régiók (CDR) halmazát hozzák létre, amelyeket aztán természetes forrásokból, például emberi vagy állati B-sejtekből származó állandó antitest-vázzal kombinálnak. A szintetizált CDR diverzitást visz a könyvtárba, ami olyan antitesteket eredményez, amelyek az epitópok széles skáláját célozzák meg. A félszintetikus antitestkönyvtár kompromisszumot kínál az immunrendszer természetes diverzitása és a szintetikus módszerekkel elért szabályozott diverzitás között.

A naiv és a szintetikus antitestkönyvtárak közötti különbség az immunglobulin gének forrásától függ. Eközben a félig szintetizált és a szintetizált antitestkönyvtár közötti különbség abban rejlik, hogy az előbbi naiv antitestszegmensek, például könnyűlánc vagy nehézlánc egy részéből áll, és ezek közül csak az egyik szintetizálódik in vitro; míg a szintetizált rész teljes egészében mesterséges PCR-szintézisből származik in vitro.

Az Alpha Lifetech biztosítja

Alpha Lifetech Inc.Professzionális antitest-kutató platformunkra építve, állati és emberi eredetű, félig szintetizált/szintetizált antitestkönyvtárat kínálunk. A genetikai módosítás és a könyvtárépítés terén szerzett sokéves tapasztalatunkkal olyan szintetizált könyvtárakat tudunk létrehozni, amelyek képesek a természetes antitestek kapacitását meghaladó affinitással és specificitással rendelkező szintetikus antitesteket termelni.Alpha LifetechSzakértőink büszkén jelentik be, hogy magas sikerarányt tudunk garantálni egy 10^8 – 10^10 független klónt tartalmazó antitestkönyvtár felépítésében.

Alpha Lifetech Inc.büszkén kínál átfogó antitestkönyvtár-építési szolgáltatásokat a globális kutatók sokrétű igényeinek kielégítésére, beleértve az scFv, Fab, VHH antitest és az egyedi könyvtárakat. Célunk, hogy megértsük és kielégítsük a különböző ügyfelek igényeit, valamint segítséget nyújtsunk a kutatási munka során felmerülő problémák megoldásában.

Szintetizált antitestkönyvtárak építési szolgáltatási folyamata

Tervezés
A tervezési fázis magában foglalja az antitest-vázak és a komplementaritást meghatározó régiók (CDR-ek) kiválasztását a meglévő antitest-szekvenciák vagy szerkezeti adatok alapján. A szintetikus CDR-antitestek úgy is tervezhetők, hogy specifikus funkciókat vigyenek be, vagy fokozzák a kötődési tulajdonságokat.

Szintézis
A tervezett antitestszekvenciákat kódoló szintetikus DNS-t, beleértve mind a keretrégiókat, mind a CDR-eket, kémiai vagy enzimatikus módszerekkel szintetizálják.

Közgyűlés
A szintetizált DNS-fragmenseket antitest expressziós vektorokká állítják össze olyan technikákkal, mint a PCR, ligálás vagy Gibson-összeszerelés. Ezeket a vektorokat ezután expressziós rendszerekbe, például bakteriális, élesztő- vagy emlőssejtekbe lehet bejuttatni antitestek termelése céljából.

Szűrés és kiválasztás
Az elkészített antitestkönyvtárakat nagy áteresztőképességű szűrőmódszerek segítségével szűrik és szelektálják a kívánt tulajdonságokkal rendelkező antitestek után. Ez olyan technikákat is magában foglalhat, mint a fágbemutató, az élesztőbemutató vagy a riboszóma-bemutató, a könyvtár formátumától és az alkalmazástól függően.

Szintetizált antitest könyvtárak építési szolgáltatása

Alpha Lifetech Inc.egyablakos antitestkönyvtár-tervezési és szintetizálási szolgáltatást nyújt ügyfeleinek a nehéz és könnyű lánc V-gén repertoárok fágvektorba ligálásával a Cre-lox helyspecifikus rekombinációs rendszer segítségével, így létrehozva egy 6,5 × 10^10 klónból álló fágon megjelenített Fab-repertoárt. A könyvtár számos antigén ellen termelt antitesteket, némelyik nanomoláris affinitással. Az emberi antitestkönyvtár létrehozása az M13 fágmegjelenítési technológián alapul (az alábbi ábrán látható).