Bevezetés a szintetizált antitest-könyvtárakba

A szintetizált antitest-könyvtár, más néven De novo könyvtár, egy szintetikus módszer, amely olyan technikákat alkalmaz, mint a DNS-szintézis vagy a fágmegjelenítés, hogy megtervezzék és szintetizálják az antitest teljes variábilis régióit, beleértve a keretrégiókat és a CDR-eket, anélkül, hogy naiv antitestkönyvtárra támaszkodnának.

A félszintetikus antitest-könyvtárat a természetben előforduló antitestkönyvtárak és a szintetikus sokféleség kombinálásával hozzák létre. Általában DNS-oligonukleotidok szintetizálását foglalja magában, hogy különböző komplementer meghatározó régiókat (CDR-eket) állítsanak elő, amelyeket aztán természetes forrásokból, például humán vagy állati B-sejtekből származó konstans antitestvázzal kombinálnak. A szintetizált CDR sokféleséget visz be a könyvtárba, aminek eredményeként antitestek az epitópok széles skáláját célozzák meg. A félszintetikus antitest-könyvtár kompromisszumot kínál az immunrendszer természetes sokfélesége és a szintetikus módszerekkel elért ellenőrzött diverzitás között.

A naiv és szintetikus antitest-könyvtárak közötti különbségtétel az immunglobulin gének forrásától függ. Mindeközben a félig szintetizált és szintetizált antitestkönyvtár közötti különbség abban rejlik, hogy az előbbi naiv antitestszegmensek egy részéből áll, mint például könnyű lánc vagy nehéz lánc, és ezek közül csak az egyik szintetizálódik in vitro; míg a szintetizált egy teljesen mesterséges szintézisből PCR-rel in vitro származik.

Az Alpha Lifetech tud nyújtani

Alpha Lifetech Inc.professzionális antitest-felfedezési platformunkon alapuló, félig szintetizált/szintetizált antitestkönyvtárat kínálhat állatokból és emberekből. A genetikai módosítás és a könyvtárépítés terén szerzett sokéves tapasztalat birtokában szintetizált könyvtárak állíthatók elő, amelyek képesek szintetikus antitestek előállítására, amelyek affinitása és specifitása meghaladja a természetes antitestek kapacitását.Alpha LifetechA szakértők büszkén jelenthetik be, hogy magas sikerarányt tudunk garantálni egy 10^8 – 10^10 független klónt tartalmazó antitestkönyvtár felépítésében.

Alpha Lifetech Inc.büszke arra, hogy átfogó antitestkönyvtár-építési szolgáltatásokat kínál a globális kutatók sokrétű igényeinek kielégítésére, beleértve az scFv-, Fab-, VHH-antitesteket és testreszabott könyvtárakat. Célunk, hogy megértsük és kielégítsük a különböző ügyfelek igényeit, valamint segítséget nyújtsunk a kutatási munka során felmerülő problémák megoldásában.

Szintetizált antitest-könyvtárak építési szolgáltatási folyamata

Tervezés
A tervezési fázis magában foglalja az antitestvázak és a komplementaritást meghatározó régiók (CDR-ek) kiválasztását a meglévő antitestszekvenciák vagy szerkezeti adatok alapján. Szintetikus CDR antitestek is megtervezhetők specifikus funkciók bevezetésére vagy a kötési tulajdonságok javítására.

Szintézis
A tervezett antitest-szekvenciákat kódoló szintetikus DNS-t, beleértve a keretrégiókat és a CDR-eket is, kémiai vagy enzimatikus módszerekkel szintetizálják.

Szerelés
A szintetizált DNS-fragmenseket antitest-expressziós vektorokba állítják össze olyan technikák alkalmazásával, mint a PCR, ligálás vagy Gibson-összeállítás. Ezeket a vektorokat azután expressziós rendszerekbe, például baktérium-, élesztő- vagy emlőssejtekbe juttathatjuk be antitest-termelés céljából.

Szűrés és kiválasztás
Az elkészített antitest-könyvtárakat nagy áteresztőképességű szűrési módszerekkel szűrjük és szelektáljuk a kívánt tulajdonságokkal rendelkező antitestekre. Ez magában foglalhat olyan technikákat, mint a fág-megjelenítés, az élesztő-megjelenítés vagy a riboszóma-megjelenítés, a könyvtár formátumától és az alkalmazástól függően.

Szintetizált antitest-könyvtárak építési szolgáltatása

Alpha Lifetech Inc.az ügyfelek számára az antitestkönyvtárak egyablakos tervezését és szintetizált szolgáltatását biztosítja a nehéz és könnyű lánc V-gén repertoárjainak fágvektorba ligálásával a Cre-lox helyspecifikus rekombinációs rendszer segítségével, hogy létrehozza a fágokon megjelenített Fab-ek repertoárját, amely 6,5 × 10^10 klónt tartalmaz. A könyvtár számos antigén ellen termelt Abs-t, némelyik nanomoláris affinitással. A humán antitest-könyvtár létrehozása az M13 fágmegjelenítési technológián alapul (az alábbi ábrán látható).