Կենդանիների պատվաստման հարթակ

Կենդանիների իմունիզացիայի հարթակը հիմնականում իմունիզացնում է ուղտերի դասի կենդանիներին (ալպակա լիամա և ուղտեր)՝ հիմք դնելով նանոմարմինների արտադրությանը։

ԿԱՊ ՄԵԶ ՀԵՏ

Կենդանիների պատվաստման հարթակ

Alpha Lifetech-ի կենդանական աղբյուրները հստակ են՝ ստուգման և կարանտինի թույլտվություններով, հստակ գենետիկական նախապատմությամբ, հստակ պատվաստման հաճախականությամբ և պատվաստման ընդմիջումների մանրամասն գրառումներով, ապահովելով հակամարմինների արտադրության համար հարմար ծառայություններ: Այն հիմնականում պատվաստում է ուղտաձև կենդանիներին (ալպակա լիամա և ուղտեր)՝ հիմք դնելով նանոմարմինների արտադրությանը: Բացի այդ, այն կարող է նաև պատվաստել սովորական կենդանիներին (օրինակ՝ Նոր Զելանդիայի սպիտակ նապաստակներ, մկներ և այլ կենդանիներ)՝ հաճախորդների պահանջվող պատվաստման հաճախականության և իմունոգենության պահանջներին համապատասխան, արդյունահանել և մեկուսացնել դրանք PBMC-ների մեջ և օգտագործել հետագա փորձերի համար (օրինակ՝ մոնոկլոնալ հակամարմիններ, պոլիկլոնալ հակամարմինների մշակում և այլն): Հաճախորդները կարող են տրամադրել իրենց սեփական իմունոգենները, և մենք կիրականացնենք դրանց որակի խիստ վերահսկողություն: Եթե հաճախորդները տրամադրում են վիրուսային իմունոգեններ, դրանք պետք է ինակտիվացվեն, և մենք կիրականացնենք ինակտիվացման թեստավորում՝ անվտանգությունն ապահովելու համար: Միևնույն ժամանակ, մենք կարող ենք նաև հարմարեցնել համապատասխան իմունոգենները՝ ըստ հաճախորդի կարիքների:

Կենդանիների իմունիզացիայի ներածություն

Կենդանիներից ստացված հակամարմիններ, ինչպիսիք են մոնոկլոնալ հակամարմինները, պոլիկլոնալ հակամարմինները և նանոմարմինները, արտադրելիս առաջին քայլը կենդանիներին իմունիզացնելն ու համապատասխան B բջիջներ, հակամարմիններ կամ PBMC-ներ ստանալն է՝ հակամարմինների հետագա արտադրությանը նախապատրաստվելու, հիմնարար գիտական հետազոտությունները խթանելու, կլինիկական ախտորոշիչ գործիքներ մշակելու և նոր դեղամիջոցների հայտնաբերումն ու մշակումը հեշտացնելու համար: Ուղտերը, ալպակաները, լիաման և Camelidae-ի մյուս ուղտերը կարող են նանոմարմիններ (միադոմենային հակամարմիններ) արտադրել իմունային արյան հավաքագրման և PBMC-ների արդյունահանման միջոցով: Ճագարները և այլ կենդանիներ կարող են իմունիզացվել, և հակամարմինները կարող են արդյունահանվել նրանց մարմիններից: Մաքրումից հետո դրանք կարող են օգտագործվել պոլիկլոնալ հակամարմիններ արտադրելու համար: Մկները, առնետները և այլն կարող են օգտագործվել մոնոկլոնալ հակամարմիններ արտադրելու համար՝ իմունային արդյունահանված B բջիջները միելոմայի բջիջների հետ միաձուլելով: Իմունիզացիայից առաջ պետք է ուշադրություն դարձնել 3R սկզբունքներին (փոխարինում, նվազեցում, մաքրում), որոնք կարող են զգալիորեն նվազեցնել օգտագործվող կենդանիների քանակը մինչև անհրաժեշտ նվազագույնը, բարելավել փորձարարական ընթացակարգերը և նվազագույնի հասցնել կենդանիների տառապանքը: Պետք է նաև հետևել փորձարարական ճիշտ նախագծմանը, համապատասխան հակամարմինների ընտրությանը և խիստ վավերացման ընթացակարգերին:

Իմունոգենների դասակարգում - նանոմարմինների արտադրություն

Իմունոգենների տեսակները	Օրինակ	Իմունոգենի պատրաստում	Նշումներ
Սպիտակուցային իմունոգեններ	Ֆերմենտներ, սպիտակուցներ, բակտերիալ տոքսիններ և այլ նյութեր	Ընտրեք սպիտակուցի արտահայտման տարբեր համակարգեր՝ E. coli, խմորիչ, միջատների բջիջներ, կաթնասունների բջիջներ և բջջային ազատ համակարգ	Ուշադրություն դարձրեք սպիտակուցի արտահայտմանը ազդող այնպիսի գործոններին, ինչպիսիք են ջերմաստիճանը, ժամանակը, pH-ը և ներառական մարմինները։
Նուկլեինաթթվային իմունոգեններ	ԴՆԹ, ՌՆԹ	ԴՆԹ իմունոգեն. կառուցեք պլազմիդային ԴՆԹ, կլոնավորեք թիրախային գեների համար համապատասխան արտահայտման վեկտորներ, կուլտիվացրեք բջիջները՝ պլազմիդային ԴՆԹ-ն ուժեղացնելու համար և արդյունահանեք բարձր մաքրության պլազմիդային ԴՆԹ։ ՌՆԹ իմունոգեն. անհրաժեշտ է ավելացնել գլխարկի կառուցվածք և պոլիA պոչ՝ քայքայումը կանխելու համար	ԴՆԹ իմունոգեններ պատրաստելիս պետք է ուշադրություն դարձնել համապատասխան հյուրընկալող բջիջներին, իսկ ՌՆԹ իմունոգեններ պատրաստելիս՝ ՌՆԹ-ի քայքայման կանխարգելմանը։
Վիրուսային իմունոգեններ	Ամբողջական վիրուսով ինակտիվացված պատվաստանյութ, ենթամիավորային պատվաստանյութ, վիրուսային վեկտորի պատվաստանյութ (ադենովիրուս, լենտիվիրուս և այլն), mRAN պատվաստանյութ։	Ամբողջական վիրուսով ինակտիվացված պատվաստանյութ պատրաստելիս, անվտանգությունը բարձրացնելու համար նախ ինակտիվացվում է վիրուսը: Ինակտիվացման ամբողջականությունը որոշելու համար օգտագործվում է թունավորության թեստ: Ենթամիավորային պատվաստանյութերը որպես հակածիններ պահանջում են միայն վիրուսի մակերեսային սպիտակուցներ և պետք է հաշվի առնվի իմունային արդյունավետությունը:	Իմունային ազդեցություն ապահովելու համար անհրաժեշտ է ավելացնել օժանդակ նյութեր, ուշադրություն դարձնել այն վիրուսին, որը պետք է ինակտիվացվի, իմունային ազդեցությունն ապահովելու համար անհրաժեշտ են համապատասխան վիրուսային տիտրեր, և պատրաստման գործընթացի անվտանգությունը պետք է խստորեն վերահսկվի։

Կենդանիների իմունիզացիայի գործընթաց կամ ժամանակացույց

Կենդանիների ընտրություն և անտիգենի պատրաստում

Կենդանիների ընտրություն. առողջ խմբերից ընտրեք համապատասխան տարիքի և առողջ մարմնակազմվածքի ալպականեր և անցկացրեք արյան և հիվանդությունների ստուգում՝ համոզվելու համար, որ վարակիչ հիվանդություններ կամ այլ առողջական խնդիրներ չկան:

Իմունոգենի պատրաստում. Իմունոգենները իմունային պատասխաններ առաջացնելու բանալին են և պահանջում են համապատասխան սպիտակուցների, պեպտիդների կամ այլ հարմար նյութերի ընտրություն՝ թիրախային հակամարմնի պահանջներին համապատասխան։

Ալպական կարող է իմունիզացվել միաժամանակ 1-3 հակածինով՝ մեկ իմունիզացիայի համար ընդհանուր հակածինի քանակով 1-2 մգ և ծավալով 2 մլ-ից պակաս: Իմունիզացիայից առաջ հակածինը և օժանդակ նյութը էմուլգացվում են 1:1 հարաբերակցությամբ՝ միատարր խառնուրդ ստանալու համար, որը պահվում է 4 ℃ ջերմաստիճանում:

Իմունոլոգիական ալպակա

Գրանցեք ալպակայի ականջի դատարկ համարը և սկսեք իմունիզացիայի փորձը: Ներարկեք ալպակայի պարանոցի մոտ գտնվող ավշային հանգույցները երկու կողմերից՝ յուրաքանչյուր կողմում 2 կետով և յուրաքանչյուր կետում ներարկեք մոտավորապես 0.4 մլ էմուլգացված հակածին: Իմունիզացիայից հետո կես ժամ դիտեք՝ համոզվելու համար, որ ալպական անհարմարության ախտանիշներ չունի: Իմունիզացիան պետք է իրականացվի յուրաքանչյուր 2 շաբաթը մեկ՝ առնվազն 4 պատվաստումով:

Արյան հավաքում

5-7 օրվա ընթացքում 4 պատվաստումից հետո ալպակայի պարանոցի երակից հավաքեք 50 մլ արյուն։

Շիճուկի տարանջատում

Յուրաքանչյուր հակածնային իմունիզացիայից առաջ արյան նմուշներ են հավաքվում իմունային համակարգի գնահատման համար՝ ամեն անգամ վերցնելով 5 մլ արյուն։ Նույն օրը արյունը ցենտրիֆուգացվել է 400 xg արագությամբ 30 րոպե՝ օգտագործելով նախապես սառեցված 25 ℃ ցենտրիֆուգ։ Արյան շիճուկի վերին շերտը առանձնացվել և պահվել է հետագա հակամարմինների տիտրերի թեստավորման համար։

Առանձին լիմֆոցիտներ

Սկզբում ավելացրեք 15 մլ բջիջների բաժանման լուծույթ, ապա դանդաղ ավելացրեք 15 մլ արյուն 50 մլ ցենտրիֆուգային խողովակի մեջ։ Զգույշ և դանդաղ եղեք արյուն ավելացնելիս՝ արյան և բաժանման լուծույթի խառնումը կանխելու համար։ Նախապես սառեցրեք ցենտրիֆուգը 25 ℃ ջերմաստիճանում, ցենտրիֆուգացրեք 400 xg-ով 30 րոպե և վերին շիճուկը պահեք նոր ցենտրիֆուգային խողովակի մեջ -80 ℃ ջերմաստիճանում։ Օգտագործեք պիպետ՝ միջին բամբակյա ձև ունեցող վերին շերտի իմունային բջիջները նոր 50 մլ ցենտրիֆուգային խողովակի մեջ ներծծելու համար։ Յուրաքանչյուր խողովակի մեջ ավելացրեք 10 մլ PBS բուֆեր սենյակային ջերմաստիճանում, ցենտրիֆուգացրեք 25 ℃ ջերմաստիճանում և 400 xg-ով 20 րոպե։ Հեռացրեք վերին շերտը, յուրաքանչյուր խողովակի մեջ ավելացրեք 5 մլ PBS բուֆեր սենյակային ջերմաստիճանում, զգուշորեն լավ խառնեք, հեմոցիտոմետրի միջոցով հաշվարկեք բջիջների քանակը, ապա ցենտրիֆուգացրեք 25 ℃ ջերմաստիճանում և 400 xg-ով 20 րոպե։ Հեռացրեք վերին շերտը և RNAiso Plus-ով ստացված լիմֆոցիտները լուծեք բջիջների քանակի հիման վրա՝ ստանալով 10^7/մլ բջջային լիզատ, որը պահվում է -80 ℃ ջերմաստիճանում։

Նկար 1. Հակամարմինների հայտնաբերման տարբեր ռազմավարությունների և դրանց հետ կապված փորձարարական փուլերի սխեմատիկ ներկայացումը: (Նկարի աղբյուրը՝ Լաուստսեն, Անդրեաս Հ. և այլք։)

Հաճախորդները ապահովում են իմունոգենների խիստ որակի վերահսկողություն

Իմունոգենների տեսակները	Պահանջ	Որակի վերահսկման մեթոդ
Պեպտիդային / փոքր մոլեկուլային նմուշներ	Լուծման պայմանները (հիմնականում կախված նրանից, թե արդյոք դրանք կակտիվացնեն ֆագերը), մոլեկուլային կառուցվածքը/պեպտիդային հաջորդականությունը, սինթեզի հաշվետվությունը (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS հայտնաբերում
Սպիտակուցի նմուշներ	SDS-PAGE/WB, վերականգնման պայմաններ, բուֆեր, պիտակի տեղեկատվություն, ընդհանուր քանակ (20-50 մկգ), կոնցենտրացիա, մաքրություն և այլն։	SDS-PAGE/WB
Բջջային նմուշներ	Բջջի տեսակը (առաջնային բջիջներ/գենային մոդիֆիկացված բջիջներ), բջջային ձևը (թարմ/սառեցված, հալեցված), աճի տեսակը (կպչուն/կախված), կուլտուրայի միջավայրի պահանջները, տրամադրված բջիջների քանակը, տրամադրված բջիջների քանակը, գենային մոդիֆիկացված բջիջներ՝ սկրինինգային թիրախների կայուն արտահայտությունն ապահովելու համար (հաճախորդի համապատասխան առաջնային հակամարմին), սառեցված, հալեցված բջիջներ՝ վերականգնման արագությունը որոշելու համար։	Հիմնականում թիրախավորելով գենային մոդիֆիկացված բջիջները՝ օգտագործելով հաճախորդի կողմից տրամադրված առաջնային հակամարմիններ՝ թիրախային արտահայտության ELISA նույնականացման համար (մեր ընկերությունը տրամադրում է HRP երկրորդային հակամարմիններ), հոսքային ցիտոմետրիայի հայտնաբերում (մեր ընկերությունը կարող է տրամադրել ֆլուորեսցենտ երկրորդային հակամարմիններ):

Որո՞նք են կենդանիների իմունիտետի կիրառությունները։

+

Պոլիկլոնալ հակամարմինները կարող են արտադրվել կենդանիների իմունիզացիայի միջոցով, մոնոկլոնալ հակամարմինները կարող են արտադրվել B բջիջները միելոմայի բջիջների հետ միաձուլելով, իսկ PBMC-ները կարող են արդյունահանվել ուղտի աղբյուրներից (ալպակա, ուղտ, ալպակա և այլն)՝ տարբեր հակամարմինների բեկորներ արտադրելու համար, ինչպիսիք են նանոմարմինները, Fab բեկորները, scFv հակամարմինների բեկորները և այլն։
Որո՞նք են կենդանիների անձեռնմխելիության ապահովման նախազգուշական միջոցները։

+

Ուղտից ստացված կենդանիների համար նանոհակամարմիններ արտադրելու համար անհրաժեշտ է 5-6 պատվաստում: Արյան նմուշները պետք է հավաքվեն որպես վերահսկիչ նախքան պատվաստումը՝ յուրաքանչյուր պատվաստման միջև 2 շաբաթ ընդմիջումով: Չորրորդ պատվաստումից հետո պետք է հավաքվեն դրական և ոչ պատվաստված բացասական արյուն ELISA թեստի համար՝ տիտրը որոշելու համար: Եթե տիտրը 10^6-ից ցածր է, պատվաստումների քանակը պետք է ավելացվի մինչև տիտրը հասնի համապատասխան մակարդակի: Այլ կենդանիների պատվաստումների համար, ինչպիսիք են ճագարի պատվաստումը (ճագարի պատվաստման համար օպտիմալ կամ ընդհանուր սպիտակուցային անտիգենի մակարդակը 50-1000 մկգ է), մկան պատվաստումը (մկան պատվաստման համար օպտիմալ կամ ընդհանուր սպիտակուցային անտիգենի մակարդակը 5-50 մկգ է, որը պահանջում է 10^6 բջիջ, եթե դա բջիջ է, և 10-50 մկգ նուկլեինաթթվի կամ ածխաջրերի համար), այծի պատվաստումը (այծի պատվաստման համար օպտիմալ կամ ընդհանուր սպիտակուցային անտիգենի մակարդակը 250-5000 մկգ է) և այլն, ուշադրություն պետք է դարձնել իմունոգենների դեղաչափին, անվտանգությանը և արդյունավետությանը:
Ինչպե՞ս ընտրել իմունային կենդանիներ։

+

Կախված հաճախորդի կողմից պահանջվող հակամարմինների տեսակից, եթե անհրաժեշտ է արտադրել նանոմարմիններ կամ այլ հակամարմինների բեկորներ, կարող եք ընտրել ուղտից ստացված կենդանիներ (ուղտեր, ալպականեր, ալպականեր) իմունիզացիայի համար: Եթե անհրաժեշտ է արտադրել մոնոկլոնալ կամ պոլիկլոնալ հակամարմիններ, պետք է ընտրեք համապատասխան տեսակը՝ հիմնվելով շիճուկի, անտիգենի և անտիգենի աղբյուրի քանակի վրա: Ճագարների համար շիճուկի առավելագույն քանակը 500 մլ է, որը պահանջում է անտիգենի ցածր քանակություն և պոլիկլոնալ հակամարմիններ արտադրելու հիմնական ընտրությունն է: Մկների համար շիճուկի առավելագույն քանակը 2 մլ է, իսկ առնետների համար՝ 20 մլ, որը սովորաբար մոնոկլոնալ հակամարմինների համար օպտիմալ ընտրությունն է: Այծի արտադրված հակամարմիններն ունեն բարձր կապակցություն, և Alpha Lifetech-ը կարող է ձեզ համար անհատականացնել բացառիկ իմունիզացիայի պլան՝ ձեր պահանջներին համապատասխան:
Արդյո՞ք անտիգենները պետք է օգտագործվեն օժանդակ նյութերի հետ միասին։ Ինչպե՞ս ընտրել։

+

Գոյություն ունեն օժանդակ նյութերի երկու տեսակ՝ յուղային և ջրային։ Աջակցիչների ողջամիտ օգտագործումը կարևոր է լուծելի հակածինների նկատմամբ ուժեղ հակամարմինային պատասխաններ առաջացնելու համար։ Աջակցիչների երկարատև արտազատումը նշանակում է, որ կարող են օգտագործվել հակածինների ավելի քիչ դեղաչափեր, և հակամարմինային պատասխանները ավելի երկարատև են։ Առաջին ներարկումը պետք է օգտագործվի օժանդակ նյութի հետ համատեղ։ Ընդհանուր առմամբ, խորհուրդ է տրվում օգտագործել Ֆրոյնդի օժանդակ նյութը, երբ իմունոգենի քանակը փոքր է։
Ալպակայի պատվաստման նախազգուշական միջոցները՞

+

(1) Ալպակայի և իմունիտետի հակածնի ընտրությունը հաջող իմունիզացիայի բանալին է: Լավ համամասնություններով ուղտ ընտրելը խորհուրդ չի տրվում: Իմունային հակածինների մաքրությունը և ճիշտ կառուցվածքը կարևոր են ալպականերով իմունիզացիայից հետո հետագա կիրառությունների համար համապատասխան հակամարմիններ ստուգելու համար: Սպիտակուցային հակածինների մաքրությունը, որպես կանոն, կազմում է ոչ պակաս, քան 90%:

(2) Լիմֆոցիտների բաժանում. Բջիջների ժամանակին բաժանումը կարող է արդյունավետորեն կանխել հեմոլիզը արյան հավաքումից հետո՝ լավագույն բաժանման արդյունքին հասնելու համար։

(3) Իմունային ցիկլը կարող է ազդել իմունային պատասխանի վրա. 1-2 շաբաթ տևողությամբ իմունային միջակայքը թույլ է տալիս ալպականերին լավ իմունային պատասխան ունենալ հակածինների մեծ մասի նկատմամբ։

անկախ մշակված օժանդակ միջոց

Մեր եզակի բանաձևի օժանդակ միջոցը օպտիմալացված է ալպակայի իմունային համակարգի համար՝ ապահովելով ավելի բարձր արդյունավետություն և յուրահատկություն, քան ավանդական օժանդակ միջոցները։

Իմունիզացիայի առաքում
ստանդարտ

Մենք խոստանում ենք ավարտել իմունիզացիան նշված ժամկետում, ապահովել բարձր տիտրով շիճուկ և գրանցել յուրաքանչյուր քայլը մանրամասն հաշվետվությունների միջոցով։

նախագծի որակի վերահսկում

Յուրաքանչյուր նախագիծ ենթարկվում է խիստ որակի վերահսկողության գործընթացների՝ հաճախորդներին բարձր չափանիշներին համապատասխանող հակամարմինների մատակարարումն ապահովելու համար։

հստակԱլպակաՖոն

Մենք ունենք առողջ ալպակաների պոպուլյացիա, որը աջակցություն է ցուցաբերում տարբեր պատվաստման ծրագրերի համար։

Եթե ունեք որևէ հարց, խնդրում ենք կապվել մեզ հետ ցանկացած պահի։

Leave Your Message

Առաջարկվող ծառայություն

0102