Հակամարմինների աֆինիտի հասունացման ծառայություն

Ալֆա Լայֆթեք Ինկ.կարող է առաջարկել հակամարմինների աֆինենտ հասունացման ծառայություն՝ օգտագործելով մուտացիայի և ընտրության տեխնոլոգիաներ: Աֆինենտ հասունացման ծառայության գործընթացներում մենք սովորաբար օգտագործում ենք scFv-ն որպես հակամարմինների ձևաչափ և միավալենտ ցուցադրման ֆագեմիդային համակարգ, որն օգտագործվել է հակածին-կապող սկրինինգի ընթացքում ագահության էֆեկտները նվազեցնելու համար: Մեր մասնագիտական ​​թիմը կարող է նաև աֆինենտ հասունացման ծառայություններ մատուցել միադոմենային հակամարմինների համար:

Ալֆա Լայֆթեք Ինկ.հպարտ է առաջարկել համապարփակ ծառայություններ՝ համաշխարհային հաճախորդների բազմազան կարիքները բավարարելու համար: Մեր նպատակն է հասկանալ և բավարարել տարբեր հաճախորդների պահանջները, ինչպես նաև օգնել հետազոտական ​​աշխատանքներում առաջացող ցանկացած առաջիկա և ի հայտ եկող խնդրի հարցում:

Ի՞նչ է աֆինիզմի հասունացումը։

Աֆինային հասունացումը գործընթաց է, որի միջոցով հակամարմինները ենթարկվում են կրկնակի մուտացիաների և ընտրության՝ որոշակի հակածինների նկատմամբ իրենց կապակցությունը բարձրացնելու համար: Հիմնականում տեղի ունենալով երկրորդային լիմֆոիդ օրգանների սաղմնային կենտրոնում, B բջիջները ենթարկվում են սոմատիկ հիպերմուտացիայի և ընտրության T բջիջների և ֆոլիկուլյար դենդրիտային բջիջների ազդեցության տակ:
Աֆինե հասունացման գործընթացի ընթացքում ցածր աֆինետային մակերեսային իմունոգլոբուլինային ընկալիչներ ունեցող B բջիջները ակտիվանում են հակածինների հետ հանդիպումների արդյունքում և ենթարկվում են բազմացման ու դիֆերենցման: Սոմատիկ հիպերմուտացիայի աֆինե հասունացման միջոցով իմունոգլոբուլինային գեների փոփոխական շրջանում տեղի են ունենում պատահական նուկլեոտիդային փոխարինումներ, որոնք հանգեցնում են տարբեր հակամարմինների տարբերակների արտադրությանը: Սոմատիկ հիպերմուտացիայից հետո մուտացված իմունոգլոբուլինային ընկալիչներ ունեցող B բջիջների վրա իրականացվում է հակածին-առաջադրված ընտրություն: Բարձրացված հակածինային աֆինետայինությամբ հակամարմիններ արտադրող B բջիջները նախընտրելիորեն պահպանվում են և թույլ են տալիս բազմանալ, մինչդեռ նվազեցված կամ անփոփոխ աֆինետայինությամբ B բջիջները ենթարկվում են ապոպտոզի: Մուտացիայի և ընտրության այս իտերատիվ գործընթացը հանգեցնում է B բջիջների կլոնների արտադրությանը, որոնք արտադրում են հակածնի նկատմամբ աստիճանաբար բարձր աֆինետայինությամբ հակամարմիններ:

Հակամարմինների աֆինիտի հասունացման ծառայություն

ՊՇՌ-ի վրա հիմնված մեթոդների հիմնական առավելություններն այն են, որ մուտացիաները ճշգրտորեն ուղղված են ուժեղացված բեկորին. սխալի մակարդակը հեշտ է վերահսկել, և մեթոդը արագ և հեշտ է տեղադրել և չի օգտագործում վտանգավոր քիմիական նյութեր: Հայտնի է, որ Taq ԴՆԹ պոլիմերազը կրկնօրինակում է ԴՆԹ-ն ցածր ճշգրտությամբ, հիմնականում 3'-ից 5' ուղղագրության ակտիվության բացակայության պատճառով:Ալֆա ԼայֆթեքՀակամարմինների ճարտարագիտության հարթակը կիրառում է սխալների հակված ՊՇՌ մոտեցում՝ ենթագրադարանի կառուցման ընթացքում հիմնականում CDR շրջանները մուտացնելու համար: Եվ հաճախ մենք մուտացիաներ ենք ստեղծում VH և VL բեկորների ամբողջ տարածքում լիովին պատահական դիրքերում՝ ենթագրադարանի գենետիկական բազմազանությունը մեծացնելու համար: Սխալների հակված ՊՇՌ-ով մուտացված հակամարմինների գեների գրադարանի կառուցումից հետո, բարձր կապելիությամբ տարբերակների ընտրությունը (scFv հակամարմինների կապելիությունը կարող է հասնել 10^8 - 10^10 M) կատարվում է կամ լուծույթում պանինգով, կամ անշարժացված հակածնի վրա՝ լվացման պայմաններով, որոնք օպտիմալացված են անջատման արագությունից կախված ընտրության համար:
  
ԳիտնականներԱլֆա Լայֆթեք Ինկ.Escherichia coli մուտատոր շտամները mutAD5TM-ը որպես մի քանի մուտացիոն ռազմավարություններից մեկը՝ պատահական մուտացիաներ ներմուծելու և այդպիսով ռեկոմբինանտ հակամարմինների բեկորների կապակցությունը և արտահայտությունը փոփոխելու համար: Ընտրության պայմանները կարող են փոփոխվել հակամարմինների բեկորների համար՝ արտադրության բարձր մակարդակներով: Escherichia coli մուտատոր բջիջներում աճի պայմանները կարող են ճշգրտվել՝ ԴՆԹ-ի յուրաքանչյուր կիլոբազի համար մեկ պատահական կետային մուտացիա ներմուծելու համար, որը գրեթե համարժեք է scFv բեկորի յուրաքանչյուր կոդոնի մեկ փոփոխության: Մուտացիայի, ցուցադրման և ընտրության մի քանի ցիկլերից հետո մենք կարող ենք բարելավել կապակցության հաստատունը 10^5 - 10^6 M-ից մինչև 10^8 - 10^10 M:

Բարելավել համակրանքի հասունացման ռազմավարությունները

Հակամարմինների որոշակի դիրքեր կարող են պատահականացվել սահմանված բազմազանությամբ (օրինակ՝ լրիվ պատահականացում բոլոր 20 ամինաթթուներով կամ կողմնակալ պատահականացում ընտրված ամինաթթուներով՝ ֆիքսված տոկոսներով)՝ կապակցությունը բարելավելու համար: Մենք ունենք հակամարմինների կապակցությունը բարելավելու երկու ռազմավարություն. առաջինը՝ մուտացիաները ներմուծվում են լրացուցիչությունը որոշող շրջանների (CDR) սահմանափակ դիրքերում՝ տեղային ուղղված մուտագենեզի միջոցով. երկրորդ՝ մուտացիաները ներմուծվում են ամբողջ V-կոդավորող շրջաններ՝ պատահական մուտագենեզի միջոցով: Այս երկու մեթոդները կիրառելով՝ հակամարմնի պահպանված ամինաթթվային հաջորդականությունները կամ ամբողջ շրջանակային շրջանը կփոխարինվեն այլ ամինաթթուներով, որոնք, մեր պեպտիդային գրադարանի սկանավորման տեխնոլոգիաների հետ միասին, կարող են չափազանց բարձրացնել հետաքրքրության հակամարմինների կապակցությունը շատ բարձր մակարդակի:

Ֆագի ցուցադրման և հակամարմինների կապը

Երբ scFv մուտանտների գրադարանը կառուցված է, հասանելի են երկու սկրինինգային ռազմավարություններ՝ կենսատարանավորում և պինդ հակածնի տեսակավորում: Առաջին դեպքում, բարձր կապինությամբ հակամարմինը մեկուսացնելու համար օգտագործվում է սուբստրատի հանողական կոնցենտրացիա, քանի որ ցածր կապինությամբ մուտանտները կլվանան՝ թողնելով բարձր ագահությամբ ֆագի մասնիկները: Երկրորդ ռազմավարությունն օգտագործում է լուծույթում նշված հակածինը, հավասարակշռության հաստատունի (Kd) վրա հիմնված ընտրությունը և կապման կինետիկայի վրա հիմնված ընտրությունը, այս ընտրության մոտեցումը առանձնացնում է բարելավված Kd ունեցող հակամարմինների տարբերակները:

Եթե ​​​​ունեք որևէ հարց, խնդրում ենք կապվել մեզ հետ ցանկացած պահի։