Ի՞նչ է հակամարմինների ճարտարագիտությունը:

Հակամարմինների ինժեներիայի օգնությամբ հնարավոր է եղել փոփոխել հակամարմինների մոլեկուլային չափը, ֆարմակոկինետիկան, իմունոգենությունը, կապող կապը, սպեցիֆիկությունը և էֆեկտորային ֆունկցիան: Հակամարմինների սինթեզումից հետո հակամարմինների սպեցիֆիկ կապը դրանք դարձնում է բարձր արժեքավոր կլինիկական ախտորոշման և բուժման մեջ: Հակամարմինների ճարտարագիտության միջոցով նրանք կարող են բավարարել դեղերի և ախտորոշման վաղ զարգացման կարիքները:

Հակամարմինների ինժեներիայի նպատակն է նախագծել և արտադրել բարձր կոնկրետ, կայուն գործառույթներ, որոնց բնական հակամարմինները չեն կարող հասնել՝ հիմք դնելով բուժական հակամարմինների արտադրությանը:

Alpha Lifetech-ը, հակամարմինների ճարտարագիտության ոլորտում իր մեծ փորձառությամբ, կարող է տրամադրել անհատականացված մոնոկլոնալ և պոլիկլոնալ հակամարմինների ծառայություններ բազմաթիվ տեսակների համար, ինչպես նաև ֆագերի ցուցադրման հակամարմինների գրադարանի կառուցման և զննման ծառայություններ: Alpha Lifetech-ը կարող է հաճախորդներին տրամադրել որակյալ կենսանման հակամարմիններ և ռեկոմբինանտ սպիտակուցային արտադրանք, ինչպես նաև համապատասխան ծառայություններ՝ արդյունավետ, բարձր հատուկ և կայուն հակամարմիններ արտադրելու համար: Օգտագործելով համապարփակ հակամարմիններ, սպիտակուցային հարթակներ և ֆագերի ցուցադրման համակարգեր՝ մենք տրամադրում ենք ծառայություններ, որոնք ներառում են հակամարմինների արտադրության վերին և ստորին հոսանքը, ներառյալ տեխնիկական ծառայություններ, ինչպիսիք են հակամարմինների հումանիտարացումը, հակամարմինների մաքրումը, հակամարմինների հաջորդականությունը և հակամարմինների վավերացումը:

Հակամարմինների ճարտարագիտության առաջամարտիկ փուլը կապված է երկու տեխնոլոգիաների հետ.

- Ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիա

--Հիբրիդոմայի տեխնոլոգիա

Հակամարմինների ճարտարագիտության արագ զարգացումը կապված է երեք կարևոր տեխնոլոգիաների հետ.

- Գենի կլոնավորման տեխնոլոգիա և պոլիմերազային շղթայական ռեակցիա

--Սպիտակուցային արտահայտություն. Ռեկոմբինանտ սպիտակուցները արտադրվում են արտահայտման համակարգերով, ինչպիսիք են խմորիչները, ձողաձև վիրուսները և բույսերը

- Համակարգչային օգնությամբ կառուցվածքային նախագծում

Առաջին սերնդի հակամարմինները մարդկայնացվել են քիմերային հակամարմինների արտադրության համար, որտեղ մկների մոնոկլոնալ հակամարմինների փոփոխական շրջանը կապված է մարդու IgG մոլեկուլների մշտական ​​շրջանի հետ: Երկրորդ սերնդի մկան մոնոկլոնալ հակամարմինի հակագենը կապող շրջանը (CDR) փոխպատվաստվել է մարդու IgG-ի մեջ: Բացառությամբ CDR շրջանի, մյուս բոլոր հակամարմինները գրեթե մարդկային հակամարմիններ են, և ջանքեր են գործադրվել՝ խուսափելու մարդու հակամկան հակամարմինների (HAMA) պատասխաններից, երբ օգտագործվում են մկների կլոնային հակամարմինները մարդկանց բուժման համար:

 

Ֆագերի ցուցադրման գրադարան կառուցելու համար առաջին քայլը հակամարմիններ կոդավորող գեներ ստանալն է, որոնք կարող են մեկուսացվել իմունացված կենդանիների B բջիջներից (իմունային գրադարանի կառուցում), արդյունահանվել ուղղակիորեն չպատվաստված կենդանիներից (բնական գրադարանի կառուցում) կամ նույնիսկ in vitro հավաքվել հակամարմինների գենի բեկորներով (սինթետիկ գրադարանի կառուցում): Այնուհետև գեները ուժեղացվում են PCR-ով, տեղադրվում պլազմիդների մեջ և արտահայտվում են համապատասխան հյուրընկալող համակարգերում (խմորիչի արտահայտությունը (սովորաբար Pichia pastoris), պրոկարիոտային արտահայտությունը (սովորաբար E. coli), կաթնասունների բջիջների արտահայտությունը, բուսական բջիջների էքսպրեսիան և միջատների բջիջների արտահայտությունը, որը վարակված է ձողաձև վիրուսներով: Ամենատարածվածը E. coli-ի արտահայտման համակարգն է, որն ինտեգրում է հատուկ կոդավորող հակամարմինների հաջորդականությունը ֆագի վրա և կոդավորում է ֆագային թաղանթի սպիտակուցներից մեկը (pIII կամ pVIII): Գենի միաձուլումը և դրսևորվում է բակտերիոֆագների մակերեսին: Այս տեխնոլոգիայի հիմքը ֆագերի ցուցադրման գրադարանի կառուցումն է, որն առավելություն ունի բնական գրադարանների նկատմամբ, քանի որ այն կարող է ունենալ հատուկ կապ: Այնուհետև, հակագենային սպեցիֆիկությամբ հակամարմինները զննում են կենսաբանական ընտրության գործընթացի միջոցով, թիրախային անտիգենները ամրագրվում են, չկապված ֆագերը բազմիցս լվանում են, իսկ կապված ֆագերը լվանում են հետագա հարստացման համար: Երեք կամ ավելի կրկնվող փուլերից հետո առանձնացվում են բարձր սպեցիֆիկությամբ և բարձր մերձեցման հակամարմիններ:

Նկար 3. Հակամարմինների գրադարանի կառուցում և զննում

Recombinant DNA տեխնոլոգիան կարող է օգտագործվել հակամարմինների բեկորներ ստեղծելու համար: Fab հակամարմինները սկզբում կարող են հիդրոլիզացվել միայն ստամոքսի պրոթեզերոնի միջոցով՝ առաջացնելով (Fab') 2 բեկորներ, որոնք այնուհետև մարսվում են պապաինի կողմից՝ առաջացնելու առանձին Fab բեկորներ: Fv բեկորը բաղկացած է VH-ից և VL-ից, որոնք ունեն վատ կայունություն՝ դիսուլֆիդային կապերի բացակայության պատճառով։ Հետևաբար, VH-ը և VL-ը կապված են 15-20 ամինաթթուներից բաղկացած կարճ պեպտիդի միջոցով՝ ձևավորելով մեկ շղթայական փոփոխական բեկոր (scFv) հակամարմին՝ մոտավորապես 25 ԿԴա մոլեկուլային քաշով:

Camelidae-ի (Camel, LIama և Alpaca) հակամարմինների կառուցվածքի ուսումնասիրությունը պարզել է, որ հակամարմիններն ունեն միայն ծանր շղթաներ և չունեն թեթև շղթաներ, ուստի դրանք կոչվում են ծանր շղթայի հակամարմիններ (hcAb): Ծանր շղթայի հակամարմինների փոփոխական տիրույթը կոչվում է մեկ տիրույթի հակամարմիններ կամ նանոմարմիններ կամ VHH՝ 12-15 կԴա չափով։ Որպես մոնոմեր՝ նրանք չունեն դիսուլֆիդային կապեր և շատ կայուն են՝ անտիգենների նկատմամբ շատ բարձր կապակցությամբ։

Նկար 5. Ծանր շղթայի հակամարմին և VHH/ Nanobody

Բջջային ազատ արտահայտությունը օգտագործում է բնական կամ սինթետիկ ԴՆԹ-ի արտահայտումը in vitro սպիտակուցի սինթեզի հասնելու համար՝ սովորաբար օգտագործելով E. coli արտահայտման համակարգը: Այն արագ արտադրում է սպիտակուցներ և խուսափում է բջիջների վրա նյութափոխանակության և ցիտոտոքսիկ բեռից, երբ արտադրում է մեծ քանակությամբ ռեկոմբինանտ սպիտակուցներ in vivo-ում: Այն կարող է նաև արտադրել սպիտակուցներ, որոնք դժվար է սինթեզվում, օրինակ՝ նրանք, որոնք դժվար է փոփոխել թարգմանությունից հետո կամ սինթեզել թաղանթային սպիտակուցները: