Հակամարմինների հումանիզացիայի մշակման հարթակ

Մենք կարող ենք մարդայնացնել տարբեր տեսակների հակամարմիններ, այդ թվում՝ մկների, նապաստակների, ուղտերի (ալպակա, ուղտ) և այլն:

ԿԱՊ ՄԵԶ ՀԵՏ

Հակամարմինների հումանիզացիայի մշակման հարթակ

Հումանիզացված հակամարմինները մարդու իմունային համակարգից առաջացնում են նվազագույն կամ ընդհանրապես ոչ մի արձագանք: Համաձայն «Cognitive Market Research»-ի՝ համաշխարհային հակամարմինների հումանիզացման շուկայի չափը 2024 թվականին կազմում է 92.5 միլիոն ԱՄՆ դոլար և 2024-ից 2031 թվականներին կաճի 13.00% բարդ տարեկան աճի տեմպով (CAGR): «Alpha Lifetech»-ն ունի հասուն հակամարմինների հումանիզացման հարթակ, որի հաջողության մակարդակը հումանիզացված հակամարմինների համար կազմում է ավելի քան 98%: Մենք ունենք բազմաթիվ հումանիզացման ռազմավարություններ, ներառյալ CDR պատվաստումը, SDR պատվաստումը, շղթաների խառնումը, ֆագերի ցուցադրումը և այլն, որոնք կարող են ընտրվել ձեր փորձարարական կարիքներին համապատասխան: Մենք կարող ենք ապահովել ոչ միայն տարբեր տեսակների, ինչպիսիք են մկները, նապաստակները, ալպական, ուղտերը և այլն, հակամարմինների հումանիզացիան, այլև տարբեր ձևերի, ինչպիսիք են scFv-ն, Fab-ը և նանոմարմինները, հումանիզացիան: Մենք ունենք մասնագիտական տեխնիկական անձնակազմ՝ հակամարմինների արտադրության, մաքրման և վավերացման ծառայություններ մատուցելու համար, ներառյալ մկան մոնոկլոնալ հակամարմինների արտադրությունը, քիմերային հակամարմինների արտադրությունը, հումանիզացված հակամարմինների արտահայտումը և մաքրումը, ինչպես նաև հումանիզացված հակամարմինների բնութագրումն ու վերլուծությունը: Բարձր հաջողության մակարդակով, բարձր մաքրությամբ և ցածր իմունոգենությամբ մենք երաշխավորում ենք մարդացված հակամարմինների արտադրությունը։

Հակամարմինների հումանիզացիայի ներածություն

Մոնոկլոնալ հակամարմիններով թերապիան կարող է օգտագործվել աուտոիմուն հիվանդությունների, քաղցկեղի և այլ հիվանդությունների բուժման համար: Մոնոկլոնալ հակամարմինները արտադրվում են մկների կամ այլ կենդանիների իմունիզացիայի միջոցով: Երբ օգտագործվում են մոնոկլոնալ հակամարմինների արտադրության ուշ փուլում գտնվող հիվանդությունների բուժման համար, ոչ մարդկային հակամարմինների իմունոգենությունը չի կարող անտեսվել: Հումանիզացիայի հիմնական սկզբունքը ոչ մարդկային շրջանակային մնացորդների, ինչպիսիք են հիպերփոփոխական լրացուցիչությունը որոշող շրջանները (CDR), ինտեգրումն է մարդու շրջանակի մեջ՝ ստեղծելով հաջորդականություններ, որոնք պահպանում են հակամարմինների սկզբնական բնութագրերը՝ միաժամանակ կանխելով իմունոգենությունը: Մկների իմունիզացիան և հետագա մկների հաջորդականության հումանիզացիան մնում են թերապևտիկ հակամարմինների հայտնաբերման երկու հիմնական ուղիներ, որոնք հիմնականում անցնում են մի քանի փուլով՝ մկների հակամարմինների արտադրություն, մոնոկլոնալ հակամարմինների խիմերացում, խիմերային մկների մարդկային մոնոկլոնալ հակամարմին և լիովին մարդայնացված մոնոկլոնալ հակամարմնի մշակման գործընթաց: Ներկայումս հետազոտությունները հիմնականում ներառում են տրանսգենային մկների վրա (մարդկային B բջիջների գեների փոխանցում մկների մեջ), բարձր թողունակությամբ սկրինինգ՝ օգտագործելով խմորիչի կամ ֆագի ցուցադրման տեխնոլոգիա, CDR պատվաստում (ծնողական CDR-ների տեղադրում մարդու հաջորդականությունների մեջ), փոխպատվաստման-սպեցիֆիկ որոշման մնացորդների (SDR), շրջանակի խառնում և այլ մեթոդներ։

հակամարմինների հումանիզացիա - Alpha Lifetech

Նկար 1. Հակամարմինների հումանիզացիայի սխեմատիկ պատկերը՝ մկների հակամարմիններից (կանաչ տիրույթներ) մինչև լիովին մարդկային հակամարմիններ։

Հակամարմինների հումանիզացման ռազմավարություն

CDR պատվաստում

CDR պատվաստումը իրականացվում է կաթնասունների էքսպրեսիոն համակարգի միջոցով, որը հիմնված է ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիայի վրա, և դրա հիմնական քայլերն են՝

(1) Մշակել համապատասխան հակամարմիններ մկների (կամ ոչ մարդկային աղբյուրների) մոտ, մեկուսացնել հակամարմիններ կոդավորող ԴՆԹ-ն և կլոնավորել դրանք վեկտորների մեջ՝ հաջորդականության որոշման համար (կամ անմիջապես կատարել մեկ բջջային հաջորդականացում):

(2) Որոշել հակամարմնի CDR-ին համապատասխանող ԴՆԹ հաջորդականությունը և որոշել թիրախի կապման յուրահատկությունը։

(3) Ընտրեք մարդու շրջանակային շրջանը (FR)՝ ոչ մարդկային CDR-ներ փոխպատվաստելու և նոր հակամարմնի գեն կառուցելու համար։

(4) Կատարել ոչ մարդկային CDR-ների և մարդկային FR-ների միջև կոնֆլիկտների եռաչափ վերլուծություն՝ վերականգնողական մուտացիաներ առաջացնելու համար, որոնք կայունացնում են օղակը և կանխում վերջնական մարդացված հակամարմնի կապակցության կամ կառուցվածքային ամբողջականության կորուստը։

Նկ. 2. Կոմպլեմենտարությունը որոշող շրջանի (ԿԿՇ) պատվաստման սխեմատիկ պատկերը:

Շրջանակի խառնում

Շրջանակային շաֆլինգը հիմնված է ֆագերի ցուցադրման տեխնոլոգիայի և ֆագերի գրադարանի սկրինինգի տեխնոլոգիայի վրա՝ բարձր կապելիության հակամարմիններ ստանալու համար: Մարդու հակամարմինների ծանր շղթաների շրջանակները կոդավորող օլիգոնուկլեոտիդները օգտագործվում են որպես ձևանմուշներ, CDR շրջանները կոդավորվում են որպես պրայմերներ, և ՊՇՌ ուժեղացումն իրականացվում է ՊՇՌ արդյունքը դենատուրացնելու համար՝ միաշղթա ԴՆԹ ստանալու համար: Ստրեպտավիդինով մաքրված VL և VH գեների միաշղթա ԴՆԹ-ն վերակառուցվում է վեկտորների վրա՝ օգտագործելով T4 ԴՆԹ լիգազ և ռեստրիկցիոն ֆերմենտներ, ինկուբացվում է բակտերիոֆագերի հետ և ուժեղացվում բակտերիոֆագերի կողմից, և կառուցվում է ֆագերի ցուցադրման գրադարան: Կատարվում է համապատասխան հակածիններով սկրինինգի երեք փուլ, և դրական կլոնները վերջապես ստուգվում են ELISA-ի և այլ մեթոդների միջոցով:

Նկար 3. Կոմպլեմենտարությունը որոշող շրջանի (ԿԿՇ) պատվաստման և շրջանակային (ԿԿՇ) խառնման հումանիզացման ռազմավարությունների սխեմատիկ պատկերը։ (Ա) ԿԿՇ պատվաստման հիմնական ընթացակարգը։ (Բ) ԿԿ խառնման հիմնական գործընթացը։ (Հղման աղբյուր՝ Վան Յոնգմեյ և այլք, «Շրջանակային խառնման» և «CDR պատվաստման» համեմատությունը PD-1 մկների հակամարմնի հումանիզացման մեջ։)

Ֆագի ցուցադրում

Հումանիզացված հակամարմինների արտադրությունը հիմնված է բակտերիոֆագերի մակերեսին հատուկ հակամարմիններ ցուցադրելու մեթոդի վրա, որը հիմնականում կառուցվում է մարդու հակամարմինների ֆագային գրադարանների միջոցով: Գրադարանի աղբյուրը մարդու ծայրամասային արյունից մեկուսացված PBMC-ներն են՝ ֆագային գրադարաններ կառուցելու համար, որոնցից ստուգվում են համապատասխան հաջորդականությունները: Այս հաջորդականությունը պարունակում է ամբողջական մարդու հաջորդականությունը, բայց արտադրված հակամարմինները հակամարմինների բեկորներ են, ինչպիսիք են scFv-ն, Fab-ը և նանոմարմինը:

Հակամարմինների հումանիզացման ծառայության աշխատանքային հոսք

Ծառայության քայլեր	Որակի վերահսկման ստանդարտ	Ժամանակացույց
Հակամարմինների մեկուսացում	Մաքրություն >95%	1-2 շաբաթ
Հաջորդականության վերլուծություն	Ոչ մարդկային հաջորդականությունների ճշգրիտ նույնականացում	1 շաբաթ
CDR պատվաստում և շրջանակի պատվաստում	Հաջող ինտեգրում և արտահայտում	2-3 շաբաթ
Արտահայտում և մաքրագործում	Բարձր բերքատվություն և մաքրություն	2-3 շաբաթ
Ֆունկցիոնալ վավերացում	Կապվածության և առանձնահատկության գնահատում	1 շաբաթ