Բիսպեցիֆիկ հակամարմինների մշակման հարթակ

Ալֆա Լայֆթեք-ը կարող է հաճախորդներին տրամադրել որակյալ հակամարմինների հայտնաբերման և ռեկոմբինանտ սպիտակուցային արտադրանք և ծառայություններ։

Հարցում գնանշման համար

Բիսպեցիֆիկ հակամարմինների մշակման հարթակ

Ալֆա Լայֆթեքը կարող է հաճախորդներին տրամադրել որակյալ հակամարմինների հայտնաբերման և ռեկոմբինանտ սպիտակուցային արտադրանք և ծառայություններ: Մենք կարող ենք պատրաստել բարձր արդյունավետությամբ, ուժեղ յուրահատկությամբ և լավ կայունությամբ հակամարմիններ: Ալֆա Լայֆթեքն ունի հակամարմինների մաքրման բազմազան գործիքներ և սարքավորումներ, որոնք կարող են ապահովել հակամարմինների մաքրման ծառայություններ տարբեր աղբյուրներից, ինչպիսիք են ճագարի, ոչխարի, հավի և մկան մոնոկլոնալ հակամարմինները, ինչպես նաև սպիտակուց A/G աֆինենտ մաքրման ծառայություններ և հակամարմինների բաժանման ու մաքրման ծառայություններ: Հիմք ընդունելով հակամարմինների հայտնաբերման հարթակի, սպիտակուցային հարթակի և այլնի համապարփակ հարթակային համակարգի կառուցվածքը՝ մենք ներառում ենք հակամարմինների արտադրության վերին և ստորին հոսքերի ծառայությունները և կարող ենք տրամադրել տեխնիկական ծառայություններ՝ սկսած հակամարմինների պատրաստումից, երկտեսակ հակամարմինների մաքրումից և հակամարմինների բաժանումից ու մաքրումից, հակամարմինների հաջորդականացումից, հակամարմինների վավերացումից և այլն, որոնք կարող են օգտագործվել երկտեսակ հակամարմինային թերապիայի համար:

Մոնոկլոնալ հակամարմինները վերաբերում են մեկ B բջջի կողմից արտադրվող իմունոգլոբուլիններին, որոնք ունեն բարձր յուրահատկություն հակածինների կամ էպիտոպների նկատմամբ: Մոնոկլոնալ հակամարմինների արտադրությունը սկզբնապես պատրաստվել է հիբրիդոմայի տեխնոլոգիայի միջոցով՝ մկան հակամարմիններ արտադրելու համար: Մասնավորապես, իմունիզացված մկների փայծաղի բջիջները մարդկանց կամ մկների միելոմայի բջիջների հետ միաձուլելով՝ ձևավորվում են հիբրիդոմայի բջիջներ, որոնք արտազատում են հատուկ հակամարմիններ: Ստեղծված մկան մոնոկլոնալ հակամարմինները հիմնականում օգտագործվում են կենդանիների հետազոտություններում և հիվանդությունների ախտորոշման մեջ՝ մաքրման ծառայություններից հետո: Այնուամենայնիվ, մարդու մարմինը կարտադրի իմունային պատասխան օտար մկան սպիտակուցներին, ուստի մկան մոնոկլոնալ հակամարմինների արտադրության կլինիկական կիրառման մեջ կան էական սահմանափակումներ: Հետագայում մարդիկ օգտագործեցին «հումանիզացիան»՝ մկներից մոնոկլոնալ հակամարմիններ պատրաստելու համար, և օգտագործեցին գենետիկական ինժեներիայի տեխնոլոգիա՝ մկան հակամարմինները փոփոխելու համար՝ մարդու իմունոգլոբուլինի հաստատուն շրջան ունենալու համար՝ դրանց իմունոգենությունը նվազեցնելու համար: Այս տեսակի հակամարմինը հայտնի է նաև որպես մարդայնացված մոնոկլոնալ հակամարմին: Բացի այդ, մարդու բջիջների օգտագործումը մոնոկլոնալ հակամարմիններ արտադրելու համար կոչվում է ամբողջական մարդու մոնոկլոնալ հակամարմինների պատրաստում: Մոնոկլոնալ հակամարմինները լայնորեն օգտագործվում են կենսաբժշկական և կլինիկական կիրառություններում: Բժշկական հետազոտություններում մոնոկլոնալ հակամարմինները կարող են օգտագործվել որպես իմունոմոդուլյատորներ, թերապևտիկ մոնոկլոնալ հակամարմինները կարող են օգտագործվել քաղցկեղի քիմիաթերապիայի և վիրուսային վարակի բուժման համար, իսկ մոնոկլոնալ հակամարմինների կոնյուգատների մշակումը հիմնականում օգտագործվում է քաղցկեղի բուժման համար։

Ներածություն երկտեսակ հակամարմնին

1960 թվականին առաջարկվեց երկբնորոշ հակամարմինների հայեցակարգը: Երկբնորոշ հակամարմինները, որոնք հայտնի են նաև որպես երկբնորոշ մոնոկլոնալ հակամարմիններ, արհեստականորեն սինթեզված հակամարմիններ են՝ օգտագործելով գենետիկական ինժեներիայի տեխնոլոգիա: Որպես ինժեներական արհեստական հակամարմիններ, երկբնորոշ հակամարմինները սովորաբար պատկանում են IgG ենթադասին և պարունակում են CD3 ենթամիավորին ուղղված հակածին կապող բեկոր: Երկբնորոշ հակամարմիններն ունեն երկու հակածին կապող տեղամասեր, որոնք կարող են միաժամանակ կապվել և ճանաչել երկու տարբեր հակածիններ կամ հակածինի երկու տարբեր էպիտոպներ: Մոնոկլոնալ հակամարմինների համեմատ, երկբնորոշ հակամարմիններն ունեն լրացուցիչ հակածին կապող տեղամաս, այդպիսով ունենալով ավելի ուժեղ յուրահատկություն և թիրախավորման ունակություն, որը կարող է ավելի ճշգրիտ թիրախավորել ուռուցքային բջիջները և նվազեցնել թիրախից դուրս թունավորությունը: Երկբնորոշ հակամարմինները կարող են միաժամանակ կատարել բազմաթիվ կենսաբանական գործառույթներ, ինչպիսիք են իմունային բջիջների հավաքագրումը, ազդանշանային ուղիների արգելափակումը և ուռուցքային բջիջների անմիջական սպանությունը: Վաղ երկբնորոշ հակամարմինները հիմնականում պատրաստվել են քիմիական կոնյուգացիայի կամ բջիջների միաձուլման միջոցով, բայց այս մեթոդը կարող է դանդաղ զարգացած լինել պատահական համադրության և թիրախային համակցության մեկուսացման դժվարության պատճառով: Գենետիկական ինժեներիայի տեխնոլոգիաների շարունակական զարգացման հետ մեկտեղ մշակվել են բազմաթիվ նոր տեխնոլոգիական հարթակներ, ինչպիսիք են՝ անցքերի մեջ հանգույցները (KIH), CrossMab, DVD Ig և այլն: Այս հարթակները արդյունավետորեն լուծում են ծանր և թեթև շղթաների անհամապատասխանության նման խնդիրներ և բարելավում են երկտեսակ հակամարմինների միատարրությունն ու արտադրողականությունը:

Նկ. 1. Ուռուցքաբանության կլինիկական փորձարկումներում երկհատկանիշ հակամարմինների (bsAbs) առաջարկվող գործողության մեխանիզմների պարզեցված սխեմատիկ պատկերը:(Նկարի աղբյուրը՝ Բիսպեցիֆիկ հակամարմինների և հակամարմինային կառուցվածքների վերանայում ուռուցքաբանության և կլինիկական մարտահրավերների մեջ - ScienceDirect)

Բիսպեցիֆիկ հակամարմինների արտադրության տեխնոլոգիա

Երկբնորոշ հակամարմինների արտադրության հիմնական մեթոդներն են քիմիական զուգակցումը, չորս աղբյուրի հիբրիդոման և գենետիկական ինժեներիայի հակամարմինների պատրաստումը: Դրանց թվում է քիմիական զուգակցման մեթոդը, որը երկու ամբողջական IgG կամ երկու F (ab') 2 հակամարմինների բեկորներ զուգակցում է երկբնորոշ հակամարմինների՝ օգտագործելով քիմիական զուգակցման նյութեր, ինչպիսիք են ֆտալիմիդը և դիթիոացիլբենզոյաթթուն: Այս մեթոդը պարզ է և հեշտ կիրառելի, բայց այն կարող է վնասել հակածինի կապման տեղը, նվազեցնել հակամարմինների ակտիվությունը, և զուգակցման նյութն ինքնին նույնպես որոշակի աստիճանի քաղցկեղածինություն ունի: Չորս աղբյուրի հիբրիդոմայի մեթոդը հիմնված է երկու տարբեր հիբրիդոմայի բջջային գծերի սոմատիկ բջիջների միաձուլման վրա՝ համապատասխան մկան IgG-ն արտահայտելու համար: Գենետիկական ինժեներիայի տեխնոլոգիայի միջոցով հակամարմինները կարող են գենետիկորեն մոդիֆիկացվել՝ երկբնորոշ հակամարմիններ ձևավորելու համար: Կառուցվել են երկու տարբեր մոնոկլոնալ հակամարմիններ, և երկու հակամարմինների Fab բեկորները կամ ծանր և թեթև շղթաների փոփոխական շրջանները առանձին-առանձին բաժանվել են: Խաչաձև կապի ռեակցիայի կամ շղթայական ռեկոմբինացիայի տեխնոլոգիայի միջոցով երկու բեկորները միավորվել են՝ երկբնորոշ հակամարմին ձևավորելու համար: Չնայած գենետիկական ինժեներիայի տեխնոլոգիայի բարդությունը համեմատաբար բարձր է, այն ներկայումս երկբնորոշ հակամարմինների արտադրության ամենատարածված մեթոդն է՝ հակամարմինների կառուցվածքը և գործառույթը կարգավորելու համար: Երկտեսակ հակամարմինների նախագծում կատարելիս կարող է օգտագործվել հակամարմինների խաչաձև ռեակտիվության սկզբունքը, սակայն հակամարմինների խաչաձև ռեակտիվությունը կարող է առաջացնել ոչ սպեցիֆիկ ռեակցիաներ, ուստի այն ուշադիր կքննարկվի երկտեսակ հակամարմինների նախագծման գործնական կիրառման մեջ, ինչպիսին է երկտեսակ հակամարմիններով թերապիան։

Բիսպեցիֆիկ հակամարմինների մաքրում

Երկհատկանիշ հակամարմինների մաքրումը բարձր մաքրության թիրախային հակամարմինների մեկուսացման և մաքրման գործընթաց է: Որոշ լուծվող խառնուրդներ հեռացնելու համար օգտագործվում են երկու մեթոդ՝ ցենտրիֆուգացում և խորը ֆիլտրացիա: Թիրախային երկհատկանիշ հակամարմինը սկզբում որսվում է աֆինային քրոմատոգրաֆիայի միջոցով: IgG-անման երկհատկանիշ հակամարմինների համար օգտագործվում է սպիտակուց A աֆինային քրոմատոգրաֆիա, մինչդեռ ոչ IgG-անման երկհատկանիշ հակամարմինների համար կարող է օգտագործվել թեթև շղթայի վրա հիմնված աֆինային քրոմատոգրաֆիա: Այնուհետև հակամարմինը որոշակի ժամանակահատվածում ինկուբացվում է ցածր pH պայմաններում, ինչը հանգեցնում է վիրուսային թաղանթի մակերեսին գտնվող սպիտակուցային կառուցվածքի խաթարմանը, որի արդյունքում կորցվում է բջիջները վարակելու ունակությունը: Միջանկյալ խորը ֆիլտրացիա է իրականացվում՝ խառնուրդները, ինչպիսիք են հյուրընկալող բջիջների սպիտակուցները (HCP), հետագայում հեռացնելու համար: Հակամարմինների մաքրությունը բարելավվում է այնպիսի մեթոդներով, ինչպիսիք են իոնափոխանակման քրոմատոգրաֆիան, և մնացորդային վիրուսները հեռացվում են նանոֆիլտրացիայի կամ ուլտրաֆիլտրացիայի տեխնիկայի միջոցով: Վերջապես, նմուշը խտացվում և փոխարինվում է համապատասխան բանաձևի բուֆերով:

Բիսպեցիֆիկ հակամարմինների արտադրության ծառայության աշխատանքային հոսք

Քայլեր	Ծառայության բովանդակություն	Ժամանակացույց
Գեների սինթեզ	Հաջորդականությունների մինչև 3 տարբեր նախագծային սխեմաների ստեղծում, ռեկոմբինանտ հակամարմինների ԴՆԹ պլազմիդների de novo ստեղծում	2-3 շաբաթ
Փոքր մասշտաբի փորձարկում	Երկհատկանիշ հակամարմինների սպիտակուցների արտադրություն → Փոքր մասշտաբի արտահայտություն կաթնասունների բջջային գծերում → Հաստատում SDS-PAGE-ի միջոցով → Կապման վերլուծություն ռեկոմբինանտ սպիտակուցային հակածիններով ELISA-ի միջոցով → Կլոնների համեմատություն ծնողական հակամարմինների հետ	5-6 շաբաթ
Նույնականացնել	Առաջին երկու լրիվ երկհատկանիշ հակամարմինների էքսպրեսիա → ELISA-ի միջոցով կապող վերլուծություն → հակամկանային հակամարմինների կողմից ճանաչված հակամարմինների ELISA գնահատում	1 շաբաթ
Հակամարմինների արտադրություն	Մեծածավալ հակամարմինների արտադրություն	3-4 շաբաթ

Մեր առավելությունները

Մենք ներառում ենք հակամարմինների արտադրության վերին և ստորին հոսքի ծառայությունները և կարող ենք մատուցել տեխնիկական ծառայություններ՝ սկսած հակամարմինների պատրաստումից, երկտեսակ հակամարմինների մաքրումից և հակամարմինների բաժանումից ու մաքրումից, հակամարմինների հաջորդականացումից, հակամարմինների վավերացումից և այլն, որոնք կարող են օգտագործվել երկտեսակ հակամարմինային թերապիայի համար։

Բարձր արտահայտչաձևություն

Բարձր սպիտակուցային արտահայտություն CHO բջիջներում։
Կայուն պահեստավորում

> 2 շաբաթ շիճուկում 37°C ջերմաստիճանում։
Լուծելիության խնդիր չկա

>30 մգ/մլ
Կայուն բջջային գծեր

Բազմաթիվ երկտեսակ հակամարմիններ հաստատելու համար մշակվել են ուռուցքային հակածիններով բազմաթիվ կայուն բջջային գծեր։