Սպիտակուց-սպիտակուց փոխազդեցության վերլուծության ծառայություն

Ալֆա Լայֆթեք-ը կարող է նաև հաճախորդներին տրամադրել սպիտակուցային անալիզներ, սպիտակուցային փոխազդեցության վերլուծություն, սպիտակուց-սպիտակուցային փոխազդեցության վերլուծություն (CO-IP, Western Blot, քրոմատինի իմունոպրեցիպիտացիայի վերլուծություն) և սպիտակուցային ֆունկցիայի վերլուծություն՝ տարբեր հաճախորդների փորձարարական կարիքները բավարարելու համար:

ԿԱՊ ՄԵԶ ՀԵՏ

Սպիտակուց-սպիտակուց փոխազդեցության վերլուծության ծառայություն

Ալֆա Լայֆթեքը տարիներ շարունակ խորապես ներգրավված է եղել սպիտակուցների անալիզներում՝ կառուցելով սպիտակուցների ֆունկցիայի վերլուծության ամուր հարթակ և տիրապետելով սպիտակուցների փոխազդեցությունը ստուգելու մի շարք տեխնիկական միջոցների, ինչը կարող է խնայել գիտական հետազոտությունների կամ հետազոտական նախագծերի ժամանակ՝ միաժամանակ ապահովելով կայուն արդյունքներ։

Ներածություն սպիտակուց-սպիտակուց փոխազդեցության վերլուծությանը

Սպիտակուցները կյանքի ցանկացած ձևի ամենակարևոր գործադիր մոլեկուլներն են, որոնք արձագանքում են գենետիկական նյութերում պահված հրահանգներին: Ավելի հաճախ սպիտակուցները կատարում են իրենց գործառույթը՝ գործելով որպես դերակատարներ, որոնք փոխազդում են այլ սպիտակուցների հետ, ինչն ավելի ակնհայտ է, երբ սպիտակուցի գործառույթը ուսումնասիրվում է բջջի իրական համատեքստում: Սպիտակուցների միջև փոխազդեցությունների նույնականացումը շատ կարևոր է առանձին սպիտակուցի կենսաքիմիական հետազոտության համար: Սպիտակուցների փոխազդեցության վերլուծությունը հետևյալն է.

Համատեղ իմունոպրեցիպիտացիայի վերլուծություն

Համատեղ իմունոպրեցիպիտացիայի մեթոդի սկզբունքն այն է, որ ինկուբացիայի համար խառնվեն թիրախային սպիտակուցը, հատուկ հակամարմինը և սպիտակուցային A/G մագնիսական գնդիկները, չկապված սպիտակուցի վերին շերտը հեռացվում է մագնիսական գնդիկների ադսորբցիայի միջոցով մագնիսական դարակի վրա, և մագնիսական գնդիկները լվացվում են՝ սպիտակուցը և այլ խառնուրդները հեռացնելու համար, եթե դրանք հատուկ կապված չեն։

Նկ. 1. Co-IP անալիզների սխեմատիկ դիագրամ։(Հղման աղբյուր՝ Կոիմունոպրեցիպիտացիայի անալիզ - PubMed (nih.gov))

Քաշեք ներքևի թեստ

Քաշվող փորձարկումը կայանում է հայտնի սպիտակուցը մագնիսական գնդիկի վրա ֆիքսելու և հայտնաբերվող նյութը ավելացնելու մեջ։ Էլյուենտը հայտնաբերվում է փոխազդող սպիտակուցների ադսորբցիայի համար։

1988 թվականին Սմիթը և այլք մաքրեցին GST միաձուլված սպիտակուցը, որը կիրառվեց քաշվող փորձարկումներում և կոչվում է Gst քաշվող փորձարկում, որը նշանակում է թիրախային սպիտակուցին GST պիտակ ավելացնել, փոխազդող սպիտակուցը GSH-ի միջոցով որսալ, կապումը էլուացնել և այն ստուգել WB փորձարկումների միջոցով։

Նկ. 2. GST քաշվող անալիզների սխեմատիկ դիագրամ:(Հղման աղբյուր՝ GST քաշվող վերլուծություն՝ PIF4 կապման ուսումնասիրության համար in vitro - PubMed (nih.gov) )

Նրա գաղափարն այն է, որ որպես միջավայր օգտագործվեն մետաղական իոններ, ինչպիսիք են նիկելը կամ կոբալտը, մաքրվի սպիտակուցը աֆինային քրոմատոգրաֆիայի միջոցով և էլուացվի կապումը WB փորձի միջոցով՝ ստուգման համար։

Բացի այդ, կան DNA Pull-down (սպիտակուցային ԴՆԹ-ի կապման փորձարկում), RNA Pull-down (սպիտակուցային ՌՆԹ-ի փոխազդեցության փորձարկում) և փոքր մոլեկուլների քաշման փորձարկումներ։

DNA Pull-down-ը (սպիտակուցային ԴՆԹ-ի կապման թեստ) սպիտակուցի ԴՆԹ-ի կապը որոշելու in vitro մեթոդ է: WB թեստերի միջոցով հայտնաբերվել է, թե արդյոք որոշակի սպիտակուցներ կապվում են թիրախային ԴՆԹ-ի հետ. անհայտ ԴՆԹ բեկորներ, որոնք կապված են սպիտակուցների հետ, որոնք ԴՆԹ բեկորներ են հայտնի MS հայտնաբերման միջոցով:

RNA Pull-down-ը (պրոտեինային RNA փոխազդեցության թեստ) in vitro մեթոդ է ՌՆԹ-ի կապը սպիտակուցների հետ որոշելու համար: WB թեստերի միջոցով հայտնաբերվել է, թե արդյոք որոշակի սպիտակուցներ կապվում են թիրախային ՌՆԹ-ի հետ. անհայտ ՌՆԹ բեկորներ, որոնք կապված են սպիտակուցների հետ, և որ ՌՆԹ բեկորներն են հայտնի MS հայտնաբերման միջոցով:

SM քաշվող մեթոդը (փոքր մոլեկուլային քաշվող փորձարկումներ) կարող է գտնել թիրախային սպիտակուցներ, որոնք հատուկ կապվում են փոքր մոլեկուլների հետ, և MS-ի հետ համատեղելիս փոքր մոլեկուլային թիրախային սպիտակուցները կարող են ճշգրիտ սկրինինգ իրականացվել, որը կարելի է բաժանել in vitro նշագրման մեթոդի և կենսաբանական օրթոգոնալ մեթոդի։

ՀԲ փորձ

WB փորձը (հայտնի է նաև որպես Western Blot կամ Western blot փորձ), որի էությունը հակածնի և հակամարմնի սպեցիֆիկ ռեակցիան է, որի հիմնական սկզբունքն է դենատուրացված սպիտակուցները առանձնացնել SDS պոլիակրիլամիդային գել էլեկտրոֆորեզի միջոցով և դրանք տեղափոխել պինդ փուլային կրիչի վրա (օրինակ՝ PVDF թաղանթ, NC թաղանթ)՝ թաղանթային փոխանցման միջոցով (թաց կամ կիսաչոր պտույտ): Բլոկավորումից հետո (օգտագործելով BSA, թան և այլն), առաջնային հակամարմինը կիրառվում է սպիտակուցին հատուկ կապվելու համար, իսկ ֆլուորեսցեինով նշագրված երկրորդային հակամարմինը ավելացվում է թաղանթը լվանալուց հետո: Երկրորդ հակամարմինը առաջնային հակամարմնի հետ կապելով՝ թիրախային սպիտակուցը կարելի է դիտարկել սուբստրատի գույնի զարգացման և քեմիլյումինեսցենցիայի միջոցով: Այն սովորաբար օգտագործվում է նմուշում որոշակի սպիտակուցի արտահայտվածության որոշման և դրա արտահայտման մակարդակի մոտավոր վերլուծության համար:

Սպիտակուց-սպիտակուց փոխազդեցության մեթոդի համեմատություն

Սպիտակուցի քաշող վերլուծությունները նման են Co-IP վերլուծություններին, որոնք երկուսն էլ պատկանում են սպիտակուցների փոխազդեցության հայտնաբերման փորձերին: Երկու մեթոդների միջև տարբերությունն այն է, որ Co-IP վերլուծությունները ստանում են հայտնի սպիտակուցների փոխազդող սպիտակուցներ, որոնք ունեն որոշակի իսկություն, բայց չեն կարող հաստատել, թե արդյոք փոխազդող սպիտակուցները փոխազդում են ուղղակիորեն, թե անուղղակիորեն: Քաշող վերլուծությունները նախատեսված են անհայտ սպիտակուցը հայտնի սպիտակուցի հետ փոխազդելու համար: Այն կարող է ուղղակիորեն հաստատել, թե արդյոք հայտնի սպիտակուցը փոխազդում է հայտնաբերված սպիտակուցի հետ, բայց չի կարող իմանալ կապի իրավիճակը in vivo-ում:

Համատեղ իմունոպրեցիպիտացիայի տեխնոլոգիան օգտագործվում է երկու կամ ավելի սպիտակուցների միջև փոխազդեցության վերլուծության համար՝ հիմնվելով իմունոպրեցիպիտացիայի փորձերի վրա: Համեմատած սպիտակուցների փոխազդեցության վերլուծության այլ փորձարարական տեխնիկաների հետ (GST Pull-down, Western Blot, Chromatin immunoprecipitation assay և այլն), Co-IP տեխնոլոգիան ունի ավելի բարձր յուրահատկություն, զգայունություն և բարձր կրկնելիություն, ինչը կարող է խուսափել ոչ սպեցիֆիկ կապի խանգարումից և արտացոլել սպիտակուցների փոխազդեցությունը բնական վիճակում:

	ԱԱՀ քաշեք ներքև	Համատեղ սեփականության իրավունք	ՀԲ
Առավելություն	* Հեշտ է գործել * Հարմար է տարբեր սպիտակուցների մաքրման համար	In vivo փոխազդեցության վերլուծության համար Կարելի է նույնականացնել հոսանքն ի վար սպիտակուցի հետ	* Ուժեղ առանձնահատկություն *Որակական և քանակական in vitro
Սահմանափակում	Հնարավոր է՝ ոչ սպեցիֆիկ կապում Անհրաժեշտ է փոխազդեցության հետագա վավերացում	* Հակամարմիններից ուժեղ կախվածություն *Հնարավոր է ոչ սպեցիֆիկ կապում	Ժամանակատար Դժվար է օգտագործել մեծածավալ սպիտակուցային վերլուծության համար
Կիրառման օրինակ	* Փոխազդեցությունների նույնականացում *Մաքրված սպիտակուցային համալիր	Սիգնալի փոխանցման ուսումնասիրություն Հիվանդության մեխանիզմ	Սպիտակուց-սպիտակուց, սպիտակուց-ԴՆԹ և սպիտակուց-ՌՆԹ փոխազդեցությունների հետագա վերլուծություն