Խմորիչների մակերեսային ցուցադրման գրադարանի սկրինինգի ծառայություն

Մեր խմորիչների ցուցադրման գրադարաններն ունեն մեծ տարողություն և բարձր բազմազանություն, ինչը բարձր հիմք է ապահովում հատուկ հակամարմինների հաջորդականությունների արդյունավետ սկրինինգի համար։

ԿԱՊ ՄԵԶ ՀԵՏ

Խմորիչների մակերեսային ցուցադրման գրադարանի սկրինինգի ծառայություն

Ալֆա Լայֆթեք ընկերությունը մասնագիտանում է խմորիչների ցուցադրման գրադարանների կառուցման և հակամարմինների գրադարանների սկրինինգի մեջ՝ առաջարկելով խմորիչների գրադարանների տարբեր ձևեր ստեղծելու և դրանք բարձր կապակցության և սպեցիֆիկ հակամարմինների սկրինինգի հնարավորություն ամբողջ աշխարհի հաճախորդների համար: Մասնագետ հետազոտողների թիմի, առաջադեմ տեխնոլոգիաների և սարքավորումների շնորհիվ մենք կարող ենք կառուցել խմորիչների գրադարաններ, որոնք ուղղված են հիվանդության հետ կապված սպիտակուցների լայն շրջանակի: Մենք կարող ենք ապահովել ֆագերի ցուցադրման և խմորիչների ցուցադրման տեխնոլոգիաներ, ներառյալ սպիտակուցային խմորիչների ցուցադրում, փոքր մոլեկուլային խմորիչների ցուցադրում, հակամարմինների խմորիչների ցուցադրում և այլն:

Մեր խմորիչների ցուցադրման գրադարաններն ունեն մեծ տարողություն և բարձր բազմազանություն, ինչը ապահովում է բարձր հիմք որոշակի հակամարմինների հաջորդականությունների արդյունավետ սկրինինգի համար: Մենք կարող ենք կառուցել հակամարմինների խմորիչների ցուցադրման գրադարանների տարբեր ձևեր (IgG, scFv, VHH, Fab հակամարմինների գրադարաններ), սպիտակուցային գրադարաններ, պեպտիդային գրադարաններ, cDNA գրադարաններ և այլն՝ ըստ ձեր կարիքների: Բացի այդ, մենք կարող ենք նաև մշակել տարբեր հատկությունների հակամարմինների գրադարաններ, ներառյալ իմունային գրադարաններ, բնական գրադարաններ, սինթետիկ գրադարաններ, կիսասինթետիկ գրադարաններ և հիվանդության հակամարմինների գրադարաններ:

Ներածություն խմորիչի ցուցադրման համակարգին

Խմորիչի մակերեսային ցուցադրման տեխնոլոգիան խմորիչի մակերեսին ռեկոմբինանտ սպիտակուցները գեների միաձուլման միջոցով ցուցադրելու մեթոդ է: Խմորիչի ամենատարածված ցուցադրման համակարգը օգտագործում է թիրախային սպիտակուցը, որը միացված է ալֆա լեկտինի զուգավորման սպիտակուցի Aga2p ենթամիավորի C-ծայրին, որը հիմնականում բաղկացած է թիրախային սպիտակուցի երկու կողմերում գտնվող էպիտոպային պիտակներից՝ N-ծայրային 9-ամինաթթվային հեմագլյուտինինի (HA) պիտակը և C-ծայրային 10 ամինաթթվային c-myc պիտակը: 69 ամինաթթվային Aga2p ենթամիավորը կապվում է 725 ամինաթթվային ալֆա լեկտին Aga1p ենթամիավորի հետ երկու դիսուլֆիդային կապերի միջոցով, իսկ Aga1p-ը ամրացված է բջջային պատին β 1,6-գլյուկան կովալենտային կապի միջոցով: Հետևաբար, թիրախային սպիտակուցը ցուցադրվում է խմորիչի բջիջների մակերեսին և հետագայում ճանաչվում է համապատասխան լիգանդի կողմից: Ֆունկցիոնալ սպիտակուցները գրադարաններից առանձնացրեք հոսքային ցիտոմետրիայի միջոցով:

Նկար 1. Խմորիչի մակերեսային ցուցադրման սկզբունքը: (Նկարի աղբյուրը՝ Խմորիչի մակերեսային ցուցադրման կիրառությունները սպիտակուցային ճարտարագիտության մեջ։)

Ներածություն խմորիչի մակերեսային ցուցադրման գրադարանին

Խմորիչի ցուցադրման տեսակավորումը հիմնված է խմորիչի մակերեսային ցուցադրման վրա, որը հիմնականում օգտագործվում է բջջային մակերեսի սպիտակուցներին թիրախավորող հակամարմինների գրադարանները սկրինինգի համար: Խմորիչի բջիջների և այլ բջջային մակերեսների միջև ցածր ոչ սպեցիֆիկ կապի պատճառով, խմորիչի կենսաբանական ընտրությունը կարող է սկրինինգի ենթարկել մեծ կապող գրադարաններ՝ հազվագյուտ կլոններ գտնելու համար:

Խմորիչների մակերեսային ցուցադրման գրադարանի սկրինինգի ծառայություն

Պատրաստեք պլազմիդներ և մշակեք խմորիչի բջիջներ, սինթեզեք թիրախային սպիտակուցը կոդավորող ԴՆԹ և կլոնավորեք այն խմորիչի արտահայտման վեկտորի մեջ, որը պարունակում է ինդուկտիվ պրոմոտորներ, ազդանշանային պեպտիդներ և մակերեսային ցուցադրման սպիտակուցներին (օրինակ՝ Aga2p) միաձուլված թիրախային գեներ: Թիրախային սպիտակուցը կոդավորող գենը կարող է միաձուլվել խմորիչի բջջային պատի սպիտակուցը կոդավորող գենի հետ (սովորաբար Aga2p), և միաձուլված գենը կարող է էլեկտրոպորացիայի միջոցով վերափոխվել խմորիչի բջիջների: Վերափոխումից հետո, իրենց մակերեսին հակամարմինների գեներ արտահայտող խմորիչի բջիջները կարող են ենթարկվել հակածին-սպեցիֆիկ սկրինինգային թեստեր. խմորիչի գրադարանը ինկուբացվում է թիրախային հակածնի հետ, և ընտրվում են դրան հատուկ կապվող խմորիչի բջիջները: Ցանկալի բնութագրերով սպիտակուցներ ցուցադրող խմորիչի բջիջները մեկուսացնելու համար ֆլուորեսցենտային ակտիվացված բջիջների տեսակավորման (FACS) միջոցով, խմորիչի ցուցադրման գրադարանի սկրինինգը կարող է իրականացվել մինչև ~10^8-10^9 խմորիչի բջիջների գրադարանի առավելագույն չափսով: Դրական կլոնները կարող են մեկուսացվել հետագա վերլուծության կամ հետագա կիրառման համար: Հակամորմային գրադարանից հատուկ հակամարմինների կլոնները նույնականացնելուց հետո դրանք կարող են հետագայում բնութագրվել և զանգվածաբար արտադրվել, ինչպես նաև մաքրվել՝ օգտագործելով այնպիսի տեխնիկաներ, ինչպիսիք են սպիտակուցային A/G աֆինային քրոմատոգրաֆիան՝ խմորիչի ցուցադրման սկրինինգի և հակամարմինների արտադրության ամբողջ գործընթացն ավարտելու համար:

Խմորիչների ցուցադրման գրադարանի սկրինինգի գործընթացը

Նկ. 2. Խմորիչների ցուցադրման գրադարանի սկրինինգի գործընթացը

Խմորիչների ցուցադրման գրադարանի ստուգման ծառայության աշխատանքային հոսք

Քայլեր	Ծառայության բովանդակություն	Ժամանակացույց
Հակածինի պատրաստում	Հակածինի տեսակ. Եթե հաճախորդը կարող է տրամադրել հակածիններ, համապատասխան նմուշները պետք է մատակարարվեն ըստ տեսակի. ռեկոմբինանտ սպիտակուցները պահանջում են 3-3.5 մգ՝ 85%-ից ավելի մաքրության պահանջով, փոքր մոլեկուլները պետք է կոնյուգացվեն 90%-ից ավելի մաքրության պահանջով, պեպտիդների սինթեզը պետք է կոնյուգացվի 90%-ից ավելի մաքրության պահանջով, նմուշների տեսակները, ինչպիսիք են վիրուսները, պետք է ինակտիվացվեն, ՌՆԹ-ն պետք է ստուգվի քայքայումը կանխելու համար, և վերը նշված հակածնի տեսակները նույնպես կարող են հարմարեցվել սինթեզի համար:	2-3 շաբաթ
Կենդանիների անձեռնմխելիություն	Կենդանիների պատվաստումների քանակը 5 է, և անհրաժեշտ է որոշել, թե արդյոք պատվաստումների քանակը ավելացնել՝ հիմնվելով շիճուկային տիտրերի թեստավորման վրա։ Հակածինային իմունիտետ. սպիտակուցի/վիրուսային անտիգենի հզորություն >105; պեպտիդի/փոքր մոլեկուլի անտիգենի հզորություն >10^4	5-6 շաբաթ
Կաղապարային կԴՆԹ-ի պատրաստում	Առանձնացրեք պլազմային PBMC-ները, արդյունահանեք ընդհանուր ՌՆԹ-ն (ՌՆԹ արդյունահանման հավաքածու) և հակադարձեք կԴՆԹ-ի։	1 օր
Գրադարանի շինարարություն	Օգտագործելով գրադարանի կԴՆԹ-ն որպես ձևանմուշ, VHH գենը ուժեղացվել է ՊՇՌ-ի երկու փուլով, և կառուցվել է VHH գենի սպլայսինգ խմորիչի ցուցադրման վեկտորը: Վեկտորը փոխակերպվել է խմորիչի բջիջների էլեկտրոպորացիայի միջոցով՝ հակամարմինների գրադարան կառուցելու համար: Պատահականորեն ընտրել 48 կլոն և ՊՇՌ մեթոդով որոշել դրական ցուցանիշը (>90%): Հաշվարկել գրադարանի տարողությունը (10^7-10^8), NGS հաջորդականացում՝ գրադարանի ներդրման ճիշտ ցուցանիշը (>90%) և գրադարանի բազմազանությունը որոշելու համար:	2 շաբաթ
Գրադարանի ցուցադրություն	Սկրինինգի լռելյայն երեք փուլեր՝ ֆլուորեսցենտային նշագրված սպիտակուցի FACS սկրինինգ, որին հաջորդում է NGS հաջորդականացում երրորդ փուլում: Դրական կլոնները ընտրվել են մեկ գրամ ինդուկցիոն արտահայտման և ELISA հայտնաբերման համար: Բոլոր դրական կլոնները ընտրվել են գեների հաջորդականացման համար, և ընտրվել են տարբեր CDR շրջանների հաջորդականություններ:	2-3 շաբաթ
Հակամարմինների ստուգում	Հակամարմինների հաջորդականությունների համար համապատասխան արտահայտման վեկտորների կառուցումը կարող է նպաստել հակամարմինների արտահայտմանը, հակամարմինների մաքրմանը, հակամարմինների հակածինի կապման ELISA և BLI վավերացմանը՝ հակամարմինների կապը ստուգելու համար, և հոսքային ցիտոմետրիայի բլոկադային՝ բջջային գործառույթը վավերացնելու համար։	1 շաբաթ

Խմորիչի մակերեսային ցուցադրման գրադարանի ցուցադրություն

Կոնֆորմացիոնալ ընտրողական նանոմարմինների արագ հայտնաբերման համար խմորիչի մակերեսային ցուցադրման հարթակի գրականության մեջ հեղինակները ստեղծել են խմորիչի մակերեսային ցուցադրման վրա հիմնված in vitro նանոմարմինների հայտնաբերման ամբողջական հարթակ: Նախ, նախագծվել է սինթետիկ նանոմարմինների գրադարան՝ սկսած ուղտի գեներից: Նկար D-ն ցույց է տալիս, որ նանոմարմինն ունի HA պիտակ կարբօքսիլային ծայրում, ապա նանոմարմինը կովալենտորեն ամրացվում է խմորիչի բջջային պատին: Նկար E-ն ցույց է տալիս նանոմարմինների սկրինինգի գործընթացը: Հակածինային կապակցվածության նանոմարմիններով խմորիչները մեկուսացվել, ուժեղացվել և բազմիցս ընտրվել են հակամարմինների համար FACS-ի միջոցով: Հեղինակները այս հարթակի միջոցով հայտնաբերել են կոնֆորմացիոն ընտրողական նանոմարմիններ, որոնք թիրախավորում են երկու տարբեր մարդկային GPCR-ներ: