Platform Imunisasi Hewan

Sumber hewani Alpha Lifetech jelas, dengan izin inspeksi dan karantina, latar belakang genetik yang jelas, frekuensi imunisasi yang jelas, dan catatan terperinci tentang interval imunisasi, menyediakan layanan yang nyaman untuk produksi antibodi. Ini terutama mengimunisasi hewan Camelidae (Alpaca Liama, dan Unta), meletakkan dasar untuk produksi nanobodi. Selain itu, juga dapat mengimunisasi hewan biasa (seperti kelinci putih Selandia Baru, tikus, dan hewan lainnya) sesuai dengan frekuensi imunisasi yang diperlukan dan persyaratan imunogenisitas pelanggan, mengekstraksi dan mengisolasinya menjadi PBMC, dan menggunakannya untuk eksperimen berikutnya (seperti antibodi monoklonal, pengembangan antibodi poliklonal, dll.). Pelanggan dapat menyediakan imunogen mereka sendiri, dan kami akan melakukan kontrol kualitas yang ketat pada mereka. Jika pelanggan menyediakan imunogen virus, mereka perlu dinonaktifkan dan kami akan melakukan pengujian inaktivasi untuk memastikan keamanan. Pada saat yang sama, kami juga dapat menyesuaikan imunogen yang sesuai menurut kebutuhan pelanggan.

Pengantar Imunisasi Hewan

Saat memproduksi antibodi yang berasal dari hewan seperti antibodi monoklonal, antibodi poliklonal, dan nanobodi, langkah pertama adalah mengimunisasi hewan dan memperoleh sel B, antibodi, atau PBMC yang sesuai untuk mempersiapkan produksi antibodi lebih lanjut, mendorong penelitian ilmiah dasar, mengembangkan alat diagnostik klinis, dan memfasilitasi penemuan dan pengembangan obat baru. Unta, alpaka, Liama, dan unta lain dalam Camelidae dapat memproduksi pustaka nanobodi (antibodi domain tunggal) melalui pengumpulan darah imun dan ekstraksi PBMC. Kelinci dan hewan lain dapat diimunisasi dan antibodi dapat diekstraksi dari tubuh mereka. Setelah pemurnian, mereka dapat digunakan untuk memproduksi antibodi poliklonal. Tikus, mencit, dll. dapat digunakan untuk memproduksi antibodi monoklonal dengan menggabungkan sel B yang diekstraksi secara imun dengan sel mieloma. Sebelum imunisasi, perhatian harus diberikan pada prinsip 3R (penggantian, pengurangan, penyempurnaan), yang dapat secara signifikan mengurangi jumlah hewan yang digunakan hingga minimum yang diperlukan, meningkatkan prosedur eksperimen, dan meminimalkan penderitaan hewan. Desain eksperimen yang tepat, pemilihan antibodi yang tepat, dan prosedur validasi yang ketat juga harus diikuti.

Klasifikasi imunogen - produksi nanobodi

Jenis-jenis Imunogen	Contoh	Persiapan Imunogen	Catatan
Imunogen Protein	Enzim, protein, racun bakteri, dan zat lainnya	Pilih sistem ekspresi protein yang berbeda: E. coli, ragi, sel serangga, sel mamalia, dan sistem bebas sel	Perhatikan faktor-faktor seperti suhu, waktu, pH, dan badan inklusi yang mempengaruhi ekspresi protein
Imunogen Asam Nukleat	DNA dan RNA	Imunogen DNA: Membangun DNA plasmid, mengkloning vektor ekspresi yang sesuai untuk gen target, membudidayakan sel untuk memperbanyak DNA plasmid, dan mengekstrak DNA plasmid dengan kemurnian tinggi. Imunogen RNA: Perlu Menambahkan Struktur Topi dan Ekor PolyA untuk Mencegah Degradasi	Saat menyiapkan imunogen DNA, perhatian harus diberikan pada sel inang yang sesuai, dan saat menyiapkan imunogen RNA, perhatian harus diberikan pada pencegahan degradasi RNA.
Imunogen Virus	Vaksin virus utuh yang diinaktifkan, vaksin subunit, vaksin vektor virus (adenovirus, lentivirus, dll.), vaksin mRAN.	Saat menyiapkan vaksin yang diinaktivasi dengan virus utuh, virus tersebut diinaktivasi terlebih dahulu untuk meningkatkan keamanan. Pengujian toksisitas digunakan untuk menentukan apakah inaktivasi telah tuntas. Vaksin subunit hanya memerlukan protein permukaan virus sebagai antigen dan perlu mempertimbangkan kemanjuran imun.	Adjuvan perlu ditambahkan untuk memberikan efek kekebalan, perhatian harus diberikan pada virus yang perlu dinonaktifkan, titer virus yang tepat diperlukan untuk memastikan efek kekebalan, dan keamanan proses persiapan harus dikontrol secara ketat.

Proses atau Garis Waktu Imunisasi Hewan

Pemilihan Hewan dan Persiapan Antigen

Pemilihan hewan: Pilih alpaka yang usianya tepat dan berbadan sehat dari kelompok yang sehat, dan lakukan pemeriksaan darah dan skrining penyakit untuk memastikan tidak ada penyakit menular atau masalah kesehatan lainnya.

Persiapan imunogen: Imunogen adalah kunci untuk menginduksi respons imun dan memerlukan pemilihan protein, peptida, atau zat lain yang sesuai berdasarkan kebutuhan antibodi target.

Alpaka dapat diimunisasi dengan 1-3 antigen secara bersamaan, dengan jumlah antigen total 1-2 mg per imunisasi dan volume kurang dari 2 mL. Sebelum imunisasi, antigen dan adjuvan diemulsikan dalam rasio 1:1 untuk membentuk campuran yang seragam, yang disimpan pada suhu 4 ℃.

Alpaka imunologi

Catat nomor telinga alpaka yang kosong dan mulailah percobaan imunisasi. Suntikkan ke kelenjar getah bening di dekat leher alpaka di kedua sisi, dengan 2 titik di setiap sisi dan sekitar 0,4 mL antigen emulsi disuntikkan di setiap titik. Setelah imunisasi, amati selama setengah jam untuk memastikan bahwa alpaka tidak memiliki gejala ketidaknyamanan. Imunisasi harus diberikan setiap 2 minggu, dengan setidaknya 4 imunisasi.

Pengambilan darah

Setelah 4 imunisasi selama 5-7 hari, kumpulkan 50ml darah dari vena leher alpaka.

Pemisahan serum

Sampel darah dikumpulkan untuk evaluasi imun sebelum setiap imunisasi antigen, dengan 5 mL darah diambil setiap kali; Pada hari yang sama, darah disentrifugasi pada 400 xg selama 30 menit menggunakan sentrifus 25 ℃ yang didinginkan sebelumnya. Lapisan atas serum dipisahkan dan disimpan untuk pengujian titer antibodi berikutnya.

Limfosit terpisah

Pertama tambahkan 15mL larutan pemisah sel, kemudian perlahan tambahkan 15mL darah ke tabung sentrifus 50mL. Berhati-hatilah dan pelan-pelan saat menambahkan darah untuk mencegah tercampurnya darah dan larutan pemisah. Sentrifus yang sudah didinginkan sebelumnya pada suhu 25 ℃, sentrifus pada 400 xg selama 30 menit, dan simpan serum atas dalam tabung sentrifus baru pada suhu -80 ℃; Gunakan pipet untuk menyedot sel imun lapisan atas berbentuk kapas tengah ke dalam tabung sentrifus 50ml baru. Tambahkan 10mL buffer PBS pada suhu ruangan ke setiap tabung, sentrifus pada suhu 25 ℃ dan 400 xg selama 20 menit. Buang supernatan, tambahkan 5mL buffer PBS pada suhu ruangan ke setiap tabung, aduk perlahan hingga rata, hitung jumlah sel menggunakan hemocytometer, kemudian sentrifus pada suhu 25 ℃ dan 400 xg selama 20 menit. Buang supernatan dan larutkan limfosit yang diperoleh dengan RNAiso Plus berdasarkan jumlah sel untuk memperoleh lisat sel 10 ^ 7/mL, yang disimpan pada suhu -80 ℃.

Gambar 1: Representasi Skema Berbagai Strategi Penemuan Antibodi dan Tahap Eksperimen yang Terlibat. (Sumber gambar:Laustsen, Andreas H. dan kawan-kawan.)

Pelanggan menyediakan imunogen-kontrol kualitas yang ketat

Jenis-jenis Imunogen	Persyaratan	Metode Kontrol Kualitas
Sampel Peptida/Molekul Kecil	Kondisi pelarutan (terutama tergantung pada apakah mereka akan menonaktifkan fag), struktur molekul/urutan peptida, laporan sintesis (HPLC/MS/HNMR)	Deteksi HPLC/MS
Sampel Protein	SDS-PAGE/WB, kondisi rekonstitusi, buffer, informasi label, jumlah total (20-50ug), konsentrasi, kemurnian, dll.	SDS-PAGE/WB
Sampel Sel	Jenis sel (sel primer/sel yang diedit gennya), bentuk sel (segar/beku yang dicairkan), jenis pertumbuhan (melekat/tersuspensi), kebutuhan media kultur, jumlah sel yang disediakan, jumlah sel yang disediakan, sel yang diedit gennya untuk memastikan ekspresi target skrining yang stabil (antibodi primer yang sesuai dengan pelanggan), sel yang dibekukan dan dicairkan untuk menentukan tingkat pemulihan	Terutama menargetkan sel yang diedit gennya, menggunakan antibodi primer yang disediakan pelanggan untuk identifikasi ELISA terhadap ekspresi target (perusahaan kami menyediakan antibodi sekunder HRP), deteksi flow cytometry (perusahaan kami dapat menyediakan antibodi sekunder fluoresens).

Apa saja penerapan kekebalan hewan?

+

Antibodi poliklonal dapat diproduksi melalui imunisasi hewan, antibodi monoklonal dapat diproduksi melalui penggabungan sel B dengan sel mieloma, dan PBMC dapat diekstraksi dari sumber unta (alpaka, unta, alpaka, dll.) untuk menghasilkan berbagai bentuk fragmen antibodi seperti nanobodi, fragmen Fab, fragmen antibodi scFv, dll.
Apa saja tindakan pencegahan untuk kekebalan hewan?

+

Untuk memproduksi nanoantibodi pada hewan yang berasal dari unta, diperlukan 5-6 imunisasi. Sampel darah harus diambil sebagai kontrol sebelum imunisasi, dengan interval 2 minggu di antara setiap imunisasi. Setelah imunisasi keempat, darah positif dan darah negatif yang tidak diimunisasi harus diambil untuk ELISA guna menentukan titer. Jika titer di bawah 10 ^ 6, jumlah imunisasi harus ditingkatkan hingga titer mencapai tingkat yang sesuai. Untuk imunisasi hewan lainnya seperti imunisasi kelinci (kadar antigen protein umum atau optimal untuk imunisasi kelinci adalah 50-1000ug), imunisasi tikus (kadar antigen protein umum atau optimal untuk imunisasi tikus adalah 5-50ug, yang memerlukan 10 ^ 6 sel jika berupa sel, dan 10-50ug untuk asam nukleat atau karbohidrat), imunisasi kambing (kadar antigen protein umum atau optimal untuk imunisasi kambing adalah 250-5000ug), dll., perhatian harus diberikan pada dosis, keamanan, dan kemanjuran imunogen.
Bagaimana cara memilih hewan yang kebal?

+

Bergantung pada jenis antibodi yang dibutuhkan oleh pelanggan, jika Anda perlu memproduksi nanobodi atau fragmen antibodi lainnya, Anda dapat memilih hewan yang berasal dari unta (unta, alpaka, alpaka) untuk imunisasi. Jika Anda perlu memproduksi antibodi monoklonal atau poliklonal, Anda perlu memilih spesies yang sesuai berdasarkan jumlah serum, antigen, dan sumber antigen. Jumlah serum maksimum untuk kelinci adalah 500 ml, yang memerlukan jumlah antigen yang rendah dan merupakan pilihan utama untuk memproduksi antibodi poliklonal. Jumlah serum maksimum untuk tikus adalah 2 ml, dan jumlah serum maksimum untuk tikus adalah 20 ml, yang biasanya merupakan pilihan optimal untuk antibodi monoklonal. Antibodi yang diproduksi kambing memiliki afinitas tinggi, dan Alpha Lifetech dapat menyesuaikan rencana imunisasi eksklusif untuk Anda sesuai dengan kebutuhan Anda.
Apakah antigen perlu digunakan bersama dengan adjuvan? Bagaimana cara memilihnya?

+

Ada dua jenis adjuvan: berbasis minyak dan berbasis air. Penggunaan adjuvan yang wajar sangat penting untuk menginduksi respons antibodi yang kuat terhadap antigen yang larut. Pelepasan adjuvan yang berkelanjutan berarti lebih sedikit dosis antigen yang dapat digunakan, dan respons antibodi lebih tahan lama. Suntikan pertama harus digunakan dalam kombinasi dengan adjuvan. Umumnya direkomendasikan untuk menggunakan adjuvan Freund ketika jumlah imunogennya kecil.
Tindakan pencegahan untuk imunisasi alpaka?

+

(1) Pemilihan alpaka dan antigen imunitas merupakan kunci keberhasilan imunisasi. Memilih unta yang berbadan proporsional tidaklah disarankan. Kemurnian dan konformasi antigen imun yang benar sangat penting untuk menyaring antibodi yang sesuai untuk aplikasi selanjutnya setelah imunisasi dengan alpaka. Kemurnian antigen protein umumnya tidak kurang dari 90%.

(2) Pemisahan limfosit: Pemisahan sel yang tepat waktu dapat secara efektif mencegah hemolisis setelah pengambilan darah untuk mencapai efek pemisahan terbaik.

(3) Siklus imun dapat mempengaruhi respon imun: interval imun 1-2 minggu memungkinkan alpaka memiliki respon imun yang baik terhadap sebagian besar antigen.

adjuvant yang dikembangkan secara independen

Formula adjuvan unik kami telah dioptimalkan untuk sistem kekebalan tubuh alpaka, memberikan potensi dan spesifisitas yang lebih tinggi daripada adjuvan tradisional.

Pemberian imunisasi
standar

Kami berjanji untuk menyelesaikan imunisasi dalam waktu yang ditentukan, menyediakan serum titer tinggi, dan mencatat setiap langkah melalui laporan terperinci.

Kontrol Kualitas Proyek

Setiap proyek menjalani proses pengendalian mutu yang ketat untuk memastikan pengiriman antibodi yang memenuhi standar tinggi kepada pelanggan.

jelasAlpakaLatar belakang

Kami memiliki populasi alpaka yang sehat yang menyediakan dukungan untuk berbagai program imunisasi.

Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami kapan saja.

Leave Your Message

Layanan Unggulan

01tanggal 02