Platform Imunisasi Hewan

Sumber hewan Alpha Lifetech transparan, dengan izin inspeksi dan karantina, latar belakang genetik yang jelas, frekuensi imunisasi yang jelas, dan catatan rinci tentang interval imunisasi, sehingga memberikan layanan yang nyaman untuk produksi antibodi. Perusahaan ini terutama mengimunisasi hewan Camelidae (Alpaca Liama, dan Unta), yang menjadi dasar produksi nanobody. Selain itu, perusahaan juga dapat mengimunisasi hewan biasa (seperti kelinci putih Selandia Baru, tikus, dan hewan lainnya) sesuai dengan frekuensi imunisasi dan persyaratan imunogenisitas yang dibutuhkan pelanggan, mengekstrak dan mengisolasinya ke dalam PBMC, dan menggunakannya untuk eksperimen selanjutnya (seperti pengembangan antibodi monoklonal, antibodi poliklonal, dll.). Pelanggan dapat menyediakan imunogen mereka sendiri, dan kami akan melakukan kontrol kualitas yang ketat terhadapnya. Jika pelanggan menyediakan imunogen virus, imunogen tersebut perlu dinonaktifkan dan kami akan melakukan pengujian penonaktifan untuk memastikan keamanannya. Pada saat yang sama, kami juga dapat menyesuaikan imunogen yang sesuai dengan kebutuhan pelanggan.

Pengantar Imunisasi Hewan

Dalam memproduksi antibodi yang berasal dari hewan, seperti antibodi monoklonal, antibodi poliklonal, dan nanobodi, langkah pertama adalah mengimunisasi hewan dan memperoleh sel B, antibodi, atau PBMC yang sesuai untuk mempersiapkan produksi antibodi lebih lanjut, mempromosikan penelitian ilmiah dasar, mengembangkan alat diagnostik klinis, dan memfasilitasi penemuan dan pengembangan obat baru. Unta, alpaka, Liama, dan unta lainnya dalam famili Camelidae dapat menghasilkan pustaka nanobodi (antibodi domain tunggal) melalui pengumpulan darah imun dan ekstraksi PBMC. Kelinci dan hewan lain dapat diimunisasi dan antibodi dapat diekstrak dari tubuh mereka. Setelah dimurnikan, antibodi tersebut dapat digunakan untuk memproduksi antibodi poliklonal. Tikus, mencit, dll. dapat digunakan untuk memproduksi antibodi monoklonal dengan menggabungkan sel B yang diekstrak secara imun dengan sel mieloma. Sebelum imunisasi, perhatian harus diberikan pada prinsip 3R (penggantian, pengurangan, penyempurnaan), yang dapat secara signifikan mengurangi jumlah hewan yang digunakan hingga minimum yang diperlukan, meningkatkan prosedur eksperimental, dan meminimalkan penderitaan hewan. Desain eksperimen yang tepat, pemilihan antibodi yang sesuai, dan prosedur validasi yang ketat juga harus diikuti.

Klasifikasi imunogen - produksi nanobody

Jenis-jenis Imunogen	Contoh	Persiapan Imunogen	Catatan
Imunogen Protein	Enzim, protein, toksin bakteri, dan zat lainnya	Pilih sistem ekspresi protein yang berbeda: E. coli, ragi, sel serangga, sel mamalia, dan sistem bebas sel.	Perhatikan faktor-faktor seperti suhu, waktu, pH, dan badan inklusi yang memengaruhi ekspresi protein.
Imunogen Asam Nukleat	DNA, RNA	Imunogen DNA: Buat DNA plasmid, klon vektor ekspresi yang sesuai untuk gen target, kultur sel untuk memperbanyak DNA plasmid, dan ekstrak DNA plasmid dengan kemurnian tinggi. Imunogen RNA: Perlu Menambahkan Struktur Topi dan Ekor PoliA untuk Mencegah Degradasi	Saat menyiapkan imunogen DNA, perlu diperhatikan sel inang yang sesuai, dan saat menyiapkan imunogen RNA, perlu diperhatikan pencegahan degradasi RNA.
Imunogen Virus	Vaksin virus utuh yang dinonaktifkan, vaksin subunit, vaksin vektor virus (adenovirus, lentivirus, dll.), vaksin mRAN.	Saat menyiapkan vaksin virus utuh yang dinonaktifkan, virus terlebih dahulu dinonaktifkan untuk meningkatkan keamanan. Pengujian toksisitas digunakan untuk menentukan apakah penonaktifan telah selesai. Vaksin subunit hanya membutuhkan protein permukaan virus sebagai antigen dan perlu mempertimbangkan efektivitas imun.	Adjuvan perlu ditambahkan untuk memberikan efek imun, perhatian harus diberikan pada virus yang perlu dinonaktifkan, titer virus yang sesuai diperlukan untuk memastikan efek imun, dan keamanan proses preparasi harus dikontrol secara ketat.

Proses atau Garis Waktu Imunisasi Hewan

Seleksi Hewan dan Persiapan Antigen

Seleksi hewan: Pilih alpaka dengan umur yang tepat dan fisik yang sehat dari kelompok yang sehat, dan lakukan pemeriksaan darah serta skrining penyakit untuk memastikan tidak ada penyakit menular atau masalah kesehatan lainnya.

Persiapan imunogen: Imunogen adalah kunci untuk menginduksi respons imun dan memerlukan pemilihan protein, peptida, atau zat lain yang sesuai berdasarkan kebutuhan antibodi target.

Seekor alpaka dapat diimunisasi dengan 1-3 antigen secara bersamaan, dengan jumlah total antigen 1-2 mg per imunisasi dan volume kurang dari 2 mL. Sebelum imunisasi, antigen dan adjuvan diemulsikan dengan rasio 1:1 untuk membentuk campuran yang seragam, yang disimpan pada suhu 4 ℃.

Alpaka imunologis

Catat nomor telinga alpaka yang kosong dan mulailah percobaan imunisasi. Suntikkan ke kelenjar getah bening di dekat leher alpaka di kedua sisi, dengan 2 titik di setiap sisi dan sekitar 0,4 mL antigen yang diemulsikan disuntikkan di setiap titik. Setelah imunisasi, amati selama setengah jam untuk memastikan bahwa alpaka tidak menunjukkan gejala ketidaknyamanan. Imunisasi harus diberikan setiap 2 minggu, dengan minimal 4 kali imunisasi.

Pengambilan sampel darah

Setelah 4 kali imunisasi selama 5-7 hari, ambil 50 ml darah dari vena leher alpaka.

Pemisahan serum

Sampel darah dikumpulkan untuk evaluasi imun sebelum setiap imunisasi antigen, dengan 5 mL darah diambil setiap kali; Pada hari yang sama, darah disentrifugasi pada 400 xg selama 30 menit menggunakan sentrifugasi yang telah didinginkan sebelumnya pada suhu 25 ℃. Lapisan serum bagian atas dipisahkan dan disimpan untuk pengujian titer antibodi selanjutnya.

Limfosit terpisah

Pertama, tambahkan 15 mL larutan pemisah sel, kemudian perlahan tambahkan 15 mL darah ke dalam tabung sentrifugasi 50 mL. Berhati-hatilah dan lakukan secara perlahan saat menambahkan darah untuk mencegah pencampuran darah dan larutan pemisah. Sentrifugasi dengan pendinginan awal pada suhu 25 ℃, sentrifugasi pada 400 xg selama 30 menit, dan simpan serum bagian atas dalam tabung sentrifugasi baru pada suhu -80 ℃; Gunakan pipet untuk menyedot sel imun lapisan atas berbentuk kapas ke dalam tabung sentrifugasi 50 mL yang baru. Tambahkan 10 mL buffer PBS pada suhu ruang ke setiap tabung, sentrifugasi pada suhu 25 ℃ dan 400 xg selama 20 menit. Buang supernatan, tambahkan 5 mL buffer PBS pada suhu ruang ke setiap tabung, aduk perlahan hingga tercampur rata, hitung jumlah sel menggunakan hemositometer, lalu sentrifugasi pada suhu 25 ℃ dan 400 xg selama 20 menit. Buang supernatan dan larutkan limfosit yang diperoleh dengan RNAiso Plus berdasarkan jumlah sel untuk mendapatkan lisat sel 10^7/mL, yang disimpan pada suhu -80 ℃.

Gambar 1: Representasi Skematis Berbagai Strategi Penemuan Antibodi dan Tahapan Eksperimental yang Terlibat. (Sumber gambar: Laustsen, Andreas H. dkk.)

Pelanggan menyediakan imunogen—kontrol kualitas yang ketat.

Jenis-jenis Imunogen	Persyaratan	Metode Pengendalian Mutu
Sampel Peptida / Molekul Kecil	Kondisi pelarutan (terutama bergantung pada apakah akan menonaktifkan fage), struktur molekuler/urutan peptida, laporan sintesis (HPLC/MS/HNMR)	Deteksi HPLC/MS
Sampel Protein	SDS-PAGE/WB, kondisi rekonstitusi, buffer, informasi label, jumlah total (20-50ug), konsentrasi, kemurnian, dll.	SDS-PAGE/WB
Sampel Sel	Jenis sel (sel primer/sel hasil rekayasa genetik), bentuk sel (segar/beku yang dicairkan), tipe pertumbuhan (melekat/tersuspensi), persyaratan media kultur, jumlah sel yang disediakan, jumlah sel yang disediakan, sel hasil rekayasa genetik untuk memastikan ekspresi target skrining yang stabil (antibodi primer yang sesuai dengan pelanggan), sel beku yang dicairkan untuk menentukan tingkat pemulihan.	Terutama menargetkan sel yang telah diedit gennya, menggunakan antibodi primer yang disediakan pelanggan untuk identifikasi ekspresi target menggunakan ELISA (perusahaan kami menyediakan antibodi sekunder HRP), deteksi sitometri aliran (perusahaan kami dapat menyediakan antibodi sekunder fluoresen).

Apa saja aplikasi dari imunitas hewan?

+

Antibodi poliklonal dapat diproduksi melalui imunisasi hewan, antibodi monoklonal dapat diproduksi dengan menggabungkan sel B dengan sel mieloma, dan PBMC dapat diekstrak dari sumber unta (alpaka, unta, alpaka, dll.) untuk menghasilkan berbagai bentuk fragmen antibodi seperti nanobodi, fragmen Fab, fragmen antibodi scFv, dll.
Apa saja tindakan pencegahan untuk kekebalan hewan?

+

Untuk menghasilkan nanoantibodi untuk hewan yang berasal dari unta, diperlukan 5-6 kali imunisasi. Sampel darah harus dikumpulkan sebagai kontrol sebelum imunisasi, dengan interval 2 minggu antara setiap imunisasi. Setelah imunisasi keempat, darah positif dan darah negatif yang tidak diimunisasi harus dikumpulkan untuk ELISA guna menentukan titer. Jika titer di bawah 10^6, jumlah imunisasi harus ditingkatkan hingga titer mencapai tingkat yang sesuai. Untuk imunisasi hewan lain seperti imunisasi kelinci (tingkat antigen protein optimal atau umum untuk imunisasi kelinci adalah 50-1000 ug), imunisasi tikus (tingkat antigen protein optimal atau umum untuk imunisasi tikus adalah 5-50 ug, yang membutuhkan 10^6 sel jika berupa sel, dan 10-50 ug untuk asam nukleat atau karbohidrat), imunisasi kambing (tingkat antigen protein optimal atau umum untuk imunisasi kambing adalah 250-5000 ug), dan lain-lain, perlu diperhatikan dosis, keamanan, dan kemanjuran imunogen.
Bagaimana cara memilih hewan yang kebal?

+

Tergantung pada jenis antibodi yang dibutuhkan pelanggan, jika Anda perlu memproduksi nanobodi atau fragmen antibodi lainnya, Anda dapat memilih hewan yang berasal dari unta (unta, alpaka) untuk imunisasi. Jika Anda perlu memproduksi antibodi monoklonal atau poliklonal, Anda perlu memilih spesies yang sesuai berdasarkan jumlah serum, antigen, dan sumber antigen. Jumlah serum maksimum untuk kelinci adalah 500 ml, yang membutuhkan jumlah antigen yang rendah dan merupakan pilihan utama untuk memproduksi antibodi poliklonal. Jumlah serum maksimum untuk tikus adalah 2 ml, dan jumlah serum maksimum untuk tikus adalah 20 ml, yang biasanya merupakan pilihan optimal untuk antibodi monoklonal. Antibodi yang diproduksi kambing memiliki afinitas tinggi, dan Alpha Lifetech dapat menyesuaikan rencana imunisasi eksklusif untuk Anda sesuai dengan kebutuhan Anda.
Apakah antigen perlu digunakan bersama dengan adjuvan? Bagaimana cara memilihnya?

+

Terdapat dua jenis adjuvan: berbasis minyak dan berbasis air. Penggunaan adjuvan yang tepat sangat penting untuk menginduksi respons antibodi yang kuat terhadap antigen terlarut. Pelepasan adjuvan yang berkelanjutan berarti bahwa lebih sedikit dosis antigen yang dapat digunakan, dan respons antibodi lebih tahan lama. Suntikan pertama harus digunakan bersamaan dengan adjuvan. Umumnya disarankan untuk menggunakan adjuvan Freund ketika jumlah imunogennya sedikit.
Tindakan pencegahan untuk imunisasi alpaka?

+

(1) Pemilihan alpaka dan antigen imun merupakan kunci keberhasilan imunisasi. Memilih unta yang proporsinya baik tidak disarankan. Kemurnian dan konformasi antigen imun yang benar sangat penting untuk penyaringan antibodi yang sesuai untuk aplikasi selanjutnya setelah imunisasi dengan alpaka. Kemurnian antigen protein umumnya tidak kurang dari 90%.

(2) Pemisahan limfosit: Pemisahan sel tepat waktu dapat secara efektif mencegah hemolisis setelah pengambilan darah untuk mencapai efek pemisahan terbaik.

(3) Siklus imun dapat mempengaruhi respons imun: interval imun 1-2 minggu memungkinkan alpaka memiliki respons imun yang baik terhadap sebagian besar antigen.

adjuvan yang dikembangkan secara independen

Formula adjuvan unik kami telah dioptimalkan untuk sistem kekebalan tubuh alpaka, memberikan potensi dan spesifisitas yang lebih tinggi daripada adjuvan tradisional.

Pemberian imunisasi
standar

Kami berjanji untuk menyelesaikan imunisasi dalam waktu yang ditentukan, menyediakan serum dengan titer tinggi, dan mencatat setiap langkah melalui laporan terperinci.

Pengendalian mutu proyek

Setiap proyek menjalani proses kontrol kualitas yang ketat untuk memastikan pengiriman antibodi yang memenuhi standar tinggi kepada pelanggan.

jelasAlpakaLatar belakang

Kami memiliki populasi alpaka yang sehat yang mendukung berbagai program imunisasi.

Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami kapan saja.

Leave Your Message

Layanan Unggulan

0102