Layanan Pematangan Afinitas Antibodi

Alpha Lifetech Inc.Kami dapat menawarkan layanan pematangan afinitas antibodi dengan menggunakan teknologi mutasi dan seleksi. Kami biasanya menggunakan scFv sebagai format antibodi dalam proses layanan pematangan afinitas dan sistem fagemid tampilan monovalen yang telah digunakan untuk mengurangi efek aviditas selama penyaringan pengikatan antigen. Tim profesional kami juga dapat menyediakan layanan pematangan afinitas untuk antibodi domain tunggal.

Alpha Lifetech Inc.dengan bangga menawarkan layanan komprehensif untuk memenuhi beragam kebutuhan klien global. Tujuan kami adalah untuk memahami dan memenuhi tuntutan pelanggan yang berbeda serta membantu mengatasi masalah yang akan datang dan muncul dalam pekerjaan penelitian.

Apa Itu Pematangan Afinitas?

Pematangan afinitas adalah proses di mana antibodi mengalami mutasi dan seleksi berulang untuk meningkatkan afinitasnya terhadap antigen spesifik. Terutama terjadi di pusat germinal organ limfoid sekunder, sel B mengalami hipermutasi somatik dan seleksi di bawah pengaruh sel T dan sel dendritik folikuler.
Selama proses pematangan afinitas, sel B dengan reseptor imunoglobulin permukaan berafinitas rendah diaktifkan oleh pertemuan antigen dan mengalami proliferasi serta diferensiasi. Melalui pematangan afinitas hipermutasi somatik, substitusi nukleotida acak terjadi di wilayah variabel gen imunoglobulin, yang mengarah pada produksi berbagai varian antibodi. Setelah hipermutasi somatik, seleksi yang didorong oleh antigen dilakukan pada sel B dengan reseptor imunoglobulin yang bermutasi. Sel B yang menghasilkan antibodi dengan afinitas antigenik yang meningkat lebih disukai untuk dipertahankan dan dibiarkan berproliferasi, sementara sel B dengan afinitas yang menurun atau tidak berubah mengalami apoptosis. Proses mutasi dan seleksi berulang ini mengarah pada produksi klon sel B, yang menghasilkan antibodi dengan afinitas yang secara bertahap lebih tinggi terhadap antigen.

Layanan Pematangan Afinitas Antibodi

Keunggulan utama metode berbasis PCR adalah mutasi ditargetkan secara tepat pada fragmen yang diamplifikasi; tingkat kesalahan mudah dikendalikan dan metode ini cepat dan mudah disiapkan serta tidak menggunakan bahan kimia berbahaya. Sudah diketahui bahwa Taq DNA polimerase menduplikasi DNA dengan fidelitas rendah, terutama karena tidak adanya aktivitas koreksi kesalahan (proofreading) 3' hingga 5'.Alpha LifetechPlatform rekayasa antibodi menerapkan pendekatan PCR yang rawan kesalahan untuk memutasi terutama wilayah CDR selama konstruksi sub-pustaka. Dan seringkali kami membuat mutasi pada posisi yang sepenuhnya acak di seluruh fragmen VH dan VL, untuk meningkatkan keragaman genetik sub-pustaka. Setelah konstruksi pustaka gen antibodi yang bermutasi dengan PCR yang rawan kesalahan, seleksi varian afinitas tinggi (afinitas antibodi scFv dapat mencapai 10^8 - 10^10 M) dilakukan dengan panning dalam larutan atau pada antigen yang diimobilisasi dengan kondisi pencucian yang dioptimalkan untuk seleksi yang bergantung pada laju pelepasan.
  
Para ilmuwan diAlpha Lifetech Inc.Penggunaan strain mutator Escherichia coli mutAD5TM sebagai salah satu dari beberapa strategi mutasi untuk memperkenalkan mutasi acak, dan dengan demikian memodifikasi afinitas dan ekspresi fragmen antibodi rekombinan. Kondisi seleksi dapat dimodifikasi untuk fragmen antibodi dengan peningkatan tingkat produksi. Kondisi pertumbuhan dalam sel mutator Escherichia coli dapat disesuaikan untuk memperkenalkan satu mutasi titik acak per kilobase DNA, hampir setara dengan satu perubahan kodon per fragmen scFv. Setelah beberapa siklus mutasi, tampilan, dan seleksi, kita dapat meningkatkan konstanta afinitas dari 10^5 - 10^6 M menjadi 10^8 - 10^10 M.

Meningkatkan Strategi Pematangan Afinitas

Posisi-posisi tertentu pada antibodi dapat diacak pada keragaman yang telah ditentukan (seperti pengacakan penuh dengan semua 20 asam amino atau pengacakan bias dengan asam amino terpilih pada persentase tetap) untuk meningkatkan afinitas. Kami memiliki dua strategi untuk meningkatkan afinitas antibodi: pertama, mutasi diperkenalkan pada posisi terbatas di daerah penentu komplemen (CDR) melalui mutagenesis terarah situs; kedua, mutasi diperkenalkan ke seluruh daerah pengkodean V melalui mutagenesis acak. Dengan menggunakan kedua metode ini, urutan asam amino yang terkonservasi atau seluruh daerah kerangka antibodi akan digantikan oleh asam amino lain, yang dikombinasikan dengan teknologi pemindaian pustaka peptida kami, dapat sangat meningkatkan afinitas antibodi yang diinginkan hingga tingkat yang sangat tinggi.

Tampilan Fag-Afinitas Antibodi

Setelah pustaka mutan scFv dibangun, tersedia dua strategi penyaringan: biopanning dan penyortiran antigen padat. Pada strategi pertama, konsentrasi substrat subtraktif digunakan untuk mengisolasi antibodi dengan afinitas tinggi, karena mutan dengan afinitas rendah akan tercuci, sehingga hanya menyisakan partikel fage dengan aviditas tinggi. Strategi kedua menggunakan antigen berlabel dalam larutan, seleksi berdasarkan konstanta kesetimbangan (Kd), dan seleksi berdasarkan kinetika pengikatan; pendekatan seleksi ini memilih varian antibodi dengan Kd yang lebih baik.

Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami kapan saja.