Pada tahun 1960, konsep antibodi bispesifik diusulkan. Antibodi bispesifik, juga dikenal sebagai antibodi monoklonal bispesifik, adalah antibodi yang disintesis secara artifisial menggunakan teknologi rekayasa genetika. Sebagai antibodi buatan hasil rekayasa, antibodi bispesifik biasanya termasuk dalam subkelas IgG dan mengandung fragmen pengikat antigen yang menargetkan subunit CD3. Antibodi bispesifik memiliki dua situs pengikatan antigen spesifik yang dapat secara simultan mengikat dan mengenali dua antigen berbeda, atau dua epitop berbeda dari suatu antigen. Dibandingkan dengan antibodi monoklonal, antibodi bispesifik memiliki situs pengikatan antigen spesifik tambahan, sehingga memiliki spesifisitas dan kemampuan penargetan yang lebih kuat, yang dapat menargetkan sel tumor dengan lebih akurat dan mengurangi toksisitas di luar target. Antibodi bispesifik dapat secara simultan melakukan berbagai fungsi biologis, seperti merekrut sel imun, memblokir jalur pensinyalan, dan membunuh sel tumor secara langsung. Antibodi bispesifik awal sebagian besar disiapkan melalui konjugasi kimia atau fusi sel, tetapi metode ini mungkin berkembang lambat karena kombinasi acak dan kesulitan dalam mengisolasi kombinasi target. Dengan perkembangan teknologi rekayasa genetika yang berkelanjutan, banyak platform teknologi baru telah dikembangkan, seperti knots in holes (KIH), CrossMab, DVD Ig, dan lain-lain. Platform-platform ini secara efektif memecahkan masalah seperti ketidaksesuaian rantai berat dan rantai ringan, serta meningkatkan keseragaman dan hasil antibodi bispesifik.

Metode utama untuk produksi antibodi bispesifik meliputi penggabungan kimia, hibridoma empat sumber, dan preparasi antibodi rekayasa genetika. Di antaranya, metode penggabungan kimia menggabungkan dua IgG utuh atau dua fragmen antibodi F(ab')2 menjadi antibodi bispesifik menggunakan agen penggabungan kimia seperti ftalimida dan asam ditioasilbenzoat. Metode ini sederhana dan mudah dioperasikan, tetapi dapat merusak situs pengikatan antigen, mengurangi aktivitas antibodi, dan agen penggabungan itu sendiri juga memiliki tingkat karsinogenisitas tertentu. Metode hibridoma empat sumber didasarkan pada fusi sel somatik dari dua lini sel hibridoma yang berbeda untuk mengekspresikan IgG tikus yang sesuai. Melalui teknologi rekayasa genetika, antibodi dapat dimodifikasi secara genetik untuk membentuk antibodi bispesifik. Dua antibodi monoklonal yang berbeda dibangun, dan fragmen Fab atau daerah variabel rantai berat dan rantai ringan dari kedua antibodi tersebut dipotong secara terpisah. Melalui reaksi ikatan silang atau teknologi rekombinasi rantai, kedua fragmen tersebut digabungkan untuk membentuk antibodi bispesifik. Meskipun kompleksitas teknologi rekayasa genetika relatif tinggi, saat ini metode ini merupakan metode yang paling umum digunakan untuk produksi antibodi bispesifik guna menyesuaikan struktur dan fungsi antibodi. Dalam melakukan desain antibodi bispesifik, prinsip reaktivitas silang antibodi dapat dimanfaatkan, tetapi reaktivitas silang antibodi dapat menyebabkan reaksi non-spesifik, sehingga perlu dipertimbangkan dengan cermat dalam aplikasi praktis desain antibodi bispesifik, seperti terapi antibodi bispesifik.

Pemurnian antibodi bispesifik adalah proses mengisolasi dan memurnikan antibodi target dengan kemurnian tinggi. Dua metode, sentrifugasi dan filtrasi dalam, digunakan untuk menghilangkan beberapa pengotor terlarut. Antibodi bispesifik target awalnya ditangkap dengan kromatografi afinitas. Untuk antibodi bispesifik seperti IgG, digunakan kromatografi afinitas protein A, sedangkan untuk antibodi bispesifik non-IgG, dapat digunakan kromatografi afinitas berbasis rantai ringan. Setelah itu, antibodi diinkubasi dalam kondisi pH rendah selama periode waktu tertentu, menyebabkan struktur protein pada permukaan selubung virus terganggu, sehingga kehilangan kemampuan untuk menginfeksi sel. Filtrasi dalam perantara dilakukan untuk menghilangkan lebih lanjut pengotor seperti protein sel inang (HCP). Kemurnian antibodi ditingkatkan melalui metode seperti kromatografi pertukaran ion, dan virus residual dihilangkan melalui teknik nanofiltrasi atau ultrafiltrasi. Akhirnya, sampel dikonsentrasikan dan diganti dengan buffer formulasi yang sesuai.