Pada tahun 1960, konsep antibodi bispesifik diajukan. Antibodi bispesifik, yang juga dikenal sebagai antibodi monoklonal bispesifik, adalah antibodi yang disintesis secara artifisial menggunakan teknologi rekayasa genetika. Sebagai antibodi buatan yang direkayasa, antibodi bispesifik biasanya termasuk dalam subkelas IgG dan mengandung fragmen pengikat antigen yang menargetkan subunit CD3. Antibodi bispesifik memiliki dua tempat pengikatan antigen spesifik yang secara bersamaan dapat mengikat dan mengenali dua antigen yang berbeda, atau dua epitop antigen yang berbeda. Dibandingkan dengan antibodi monoklonal, antibodi bispesifik memiliki tempat pengikatan antigen spesifik tambahan, sehingga memiliki spesifisitas dan kemampuan penargetan yang lebih kuat, yang dapat menargetkan sel tumor dengan lebih akurat dan mengurangi toksisitas yang tidak sesuai target. Antibodi bispesifik dapat secara bersamaan melakukan beberapa fungsi biologis, seperti merekrut sel imun, memblokir jalur pensinyalan, dan membunuh sel tumor secara langsung. Antibodi bispesifik awal sebagian besar disiapkan melalui konjugasi kimia atau fusi sel, tetapi metode ini mungkin berkembang lambat karena kombinasi acak dan kesulitan dalam mengisolasi kombinasi target. Dengan terus berkembangnya teknologi rekayasa genetika, banyak platform teknologi baru telah dikembangkan, seperti simpul dalam lubang (KIH), CrossMab, DVD Ig, dll. Platform ini secara efektif memecahkan masalah seperti ketidaksesuaian rantai berat dan rantai ringan, dan meningkatkan keseragaman dan hasil antibodi bispesifik.

Metode utama untuk produksi antibodi bispesifik meliputi penggabungan kimia, hibridoma empat sumber, dan persiapan antibodi rekayasa genetika. Di antaranya, metode penggabungan kimia menggabungkan dua IgG utuh atau dua fragmen antibodi F (ab')2 menjadi antibodi bispesifik menggunakan agen penggabungan kimia seperti ftalimida dan asam ditioasilbenzoat. Metode ini sederhana dan mudah dioperasikan, tetapi dapat merusak tempat pengikatan antigen, mengurangi aktivitas antibodi, dan agen penggabungan itu sendiri juga memiliki tingkat karsinogenisitas tertentu. Metode hibridoma empat sumber didasarkan pada fusi sel somatik dari dua garis sel hibridoma yang berbeda untuk mengekspresikan IgG tikus yang sesuai. Melalui teknologi rekayasa genetika, antibodi dapat dimodifikasi secara genetik untuk membentuk antibodi bispesifik. Dua antibodi monoklonal yang berbeda dibuat, dan fragmen Fab atau daerah variabel rantai berat dan rantai ringan dari kedua antibodi dibelah secara terpisah. Melalui reaksi ikatan silang atau teknologi rekombinasi rantai, kedua fragmen tersebut digabungkan untuk membentuk antibodi bispesifik. Meskipun kompleksitas teknologi rekayasa genetika relatif tinggi, saat ini merupakan metode yang paling umum digunakan untuk produksi antibodi bispesifik guna menyesuaikan struktur dan fungsi antibodi. Saat melakukan perancangan antibodi bispesifik, prinsip reaktivitas silang antibodi dapat digunakan, tetapi reaktivitas silang antibodi dapat menyebabkan reaksi non-spesifik, sehingga akan dipertimbangkan secara cermat dalam penerapan praktis perancangan antibodi bispesifik, seperti terapi antibodi bispesifik.

Pemurnian antibodi bispesifik adalah proses mengisolasi dan memurnikan antibodi target dengan kemurnian tinggi. Dua metode, sentrifugasi dan filtrasi dalam, digunakan untuk menghilangkan beberapa pengotor yang larut. Antibodi bispesifik target awalnya ditangkap oleh kromatografi afinitas. Untuk antibodi bispesifik seperti IgG, kromatografi afinitas protein A digunakan, sedangkan untuk antibodi bispesifik seperti non IgG, kromatografi afinitas berbasis rantai ringan dapat digunakan. Setelah itu, antibodi diinkubasi dalam kondisi pH rendah untuk jangka waktu tertentu, yang menyebabkan struktur protein pada permukaan selubung virus terganggu, sehingga kehilangan kemampuan untuk menginfeksi sel. Filtrasi dalam menengah dilakukan untuk lebih menghilangkan pengotor seperti protein sel inang (HCP). Kemurnian antibodi ditingkatkan melalui metode seperti kromatografi pertukaran ion, dan virus yang tersisa dihilangkan melalui teknik nanofiltrasi atau ultrafiltrasi. Akhirnya, sampel dipekatkan dan diganti dengan buffer formulasi yang sesuai.