Layanan Pengembangan Antibodi Monoklonal

Alpha Lifetech Inc.dapat memberikan prediksi epitop, sintesis peptida, ekspresi protein, produksi antibodi poliklonal atau monoklonal serta pemurnian antibodi dari kultur sel, cairan asites atau serum lengkap.

Alpha Lifetech Inc.berpengalaman dalam menyediakan berbagai layanan lini sel stabil kepada pelanggan, termasuk sel hibridoma, lini sel penyuntingan genom, lini sel knockdown, dan lini sel overekspresi. Kami mencoba menawarkan layanan lini sel kustom tingkat lanjut kepada setiap klien dan layanan kami terbukti dan tepercaya.

Strategi Pengembangan Antibodi

1. Desain dan persiapan antigen
Antigen ini dapat berupa protein, peptida, atau molekul lainnya. Merancang imunogen memerlukan pendekatan komprehensif yang memadukan pengetahuan tentang struktur antigen, imunologi, dan sistem pengiriman. Alpha Lifetech memiliki teknologi desain antigen yang dapat merancang imunogen bagi pelanggan yang membutuhkan.
Alpha Lifetech menyediakan produk protein rekombinan untuk dipilih pelanggan. Kami memiliki berbagai sistem ekspresi protein, seperti sistem ekspresi E. coli, sistem ekspresi ragi, sistem ekspresi serangga baculovirus, sistem ekspresi mamalia, dll., untuk menghasilkan protein rekombinan yang Anda butuhkan untuk penelitian.

2. Imunisasi Hewan
Alpha Lifetech dapat menyediakan imunogen kepada pelanggan, dan hewan yang kebal seperti tikus, kelinci, domba, alpaka, marmut, hamster, dll. tersedia untuk Anda pilih.

3.Metode produksi antibodi monoklonal

●Produksi Mabs dengan teknologi Hybridoma
Hibridoma adalah sel hibrida yang dihasilkan dari fusi dua jenis sel, yaitu sel myeloma tikus dan sel plasma (limfosit B), di mana sel heterozigot dapat menghasilkan antibodi berkelanjutan terhadap antigen yang diinginkan secara in vitro. Produksi sel hibridoma terdiri dari tiga bagian: desain antigen (hapten, molekul kecil, dan peptida), imunisasi hewan, fusi sel, dan penyaringan klon positif. Dengan memanfaatkan metodologi imunisasi yang unik, kami memperoleh efisiensi fusi sel yang sangat tinggi (1-10 hibridoma per seribu sel B) dan titer antibodi yang tinggi, memaksimalkan tingkat keberhasilan kami dalam uji analitis berikutnya yang mencakup penyaringan biokimia, pengujian berbasis sel in-vitro, dan studi hewan.

●Produksi Mabs dengan teknologi tampilan fage
Tampilan fag menawarkan metode lain untuk menghasilkan antibodi monoklonal. Limfosit B diisolasi dari darah hewan dan mRNA-nya diekstraksi. Melalui PCR, mRNA ini diubah menjadi cDNA, yang mengamplifikasi semua segmen VH dan VL. Segmen-segmen ini kemudian dikloning ke dalam vektor, biasanya sebagai fragmen variabel rantai tunggal (scFv), di samping protein PIII dari bakteriofag. Selanjutnya, konstruksi ini digunakan untuk menginfeksi E. coli, yang menghasilkan terciptanya perpustakaan yang berisi sekitar 10^10 sel melalui inokulasi dengan fag pembantu. E. coli kemudian dapat mengeluarkan bakteriofag yang mengandung segmen VH dan VL sebagai bagian dari lapisannya. Setelah ini, segmen VH dan VL spesifik yang menargetkan antigen yang diinginkan dapat dipilih dan digunakan untuk menginokulasi ulang E. coli dengan bakteriofag. Sel-sel yang mengandung plasmid kemudian diisolasi dan diurutkan.

4. Skrining fusi

●Fusi dan Seleksi Sel
Sel B yang dipanen kemudian digabungkan dengan sel mieloma, yang merupakan sel kanker yang dapat berkembang biak tanpa batas dalam kultur. Penggabungan ini biasanya dilakukan dengan menggunakan teknik seperti fusi polietilen glikol (PEG).
Setelah fusi, sel hibridoma dikulturkan dalam media selektif yang memungkinkan hanya hibridoma yang bertahan hidup. Media tersebut biasanya mengandung aminopterin, yang mencegah pertumbuhan sel mieloma yang tidak menyatu.

●Penyaringan dan Penjepitan
Sel hibridoma yang dihasilkan disaring untuk produksi antibodi yang spesifik terhadap antigen target. Hal ini biasanya dilakukan dengan menggunakan teknik seperti enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot, immunoprecipitation, dan flow cytometry.

Setelah sel hibridoma yang memproduksi antibodi teridentifikasi, sel tersebut dikloning untuk menghasilkan populasi sel yang identik. Hal ini memastikan bahwa antibodi yang diproduksi oleh setiap sel hibridoma identik.

5. Verifikasi Fungsional Antibodi
Alpha Lifetech menyediakan validasi fungsional antibodi, seperti Western blotting, imunohistokimia, atau uji fungsional, untuk mengkarakterisasi antibodi monoklonal dan mengonfirmasi spesifisitas, afinitas, dan fungsionalitas antibodi.

6. Optimasi antibodi
Pemurnian antibodi dari supernatan kultur menggunakan teknik seperti kromatografi afinitas protein A atau protein G, dan Alpha Lifetech juga dapat menyediakan metode modifikasi antibodi untuk meningkatkan afinitas antibodi.

7. Produksi antibodi
Alpha Lifetech dapat mengevaluasi kandidat antibodi untuk aplikasi penyaringan berthroughput tinggi dan produksi skala besar.