Layanan Pengembangan Antibodi Monoklonal

Alpha Lifetech Inc.dapat menyediakan prediksi epitop, sintesis peptida, ekspresi protein, produksi antibodi poliklonal atau monoklonal, serta pemurnian antibodi dari kultur sel, cairan asites, atau serum utuh.

Alpha Lifetech Inc.berpengalaman dalam menyediakan berbagai layanan lini sel stabil kepada pelanggan, termasuk sel hibridoma, lini sel pengeditan genom, lini sel knockdown, dan lini sel overekspresi. Kami berupaya menawarkan layanan lini sel kustom tingkat lanjut kepada setiap klien, dan layanan kami telah terbukti dan terpercaya.

Strategi Pengembangan Antibodi

1. Desain dan persiapan antigen
Antigen ini dapat berupa protein, peptida, atau molekul lainnya. Mendesain imunogen membutuhkan pendekatan komprehensif yang mengintegrasikan pengetahuan tentang struktur antigen, imunologi, dan sistem pengiriman. Alpha Lifetech memiliki teknologi desain antigen yang dapat mendesain imunogen untuk pelanggan yang membutuhkannya.
Alpha Lifetech menyediakan produk protein rekombinan yang dapat dipilih pelanggan. Kami memiliki berbagai sistem ekspresi protein, seperti sistem ekspresi E. coli, sistem ekspresi ragi, sistem ekspresi baculovirus-serangga, sistem ekspresi mamalia, dan lain-lain, untuk menghasilkan protein rekombinan yang Anda butuhkan untuk penelitian.

2. Imunisasi hewan
Alpha Lifetech dapat menyediakan imunogen kepada pelanggan, dan hewan imun seperti tikus, kelinci, domba, alpaka, marmut, hamster, dll. tersedia untuk Anda pilih.

3. Metode produksi antibodi monoklonal

●Produksi Mabs dengan teknologi Hibridoma
Hibridoma adalah sel hibrida yang dihasilkan dari fusi dua jenis sel, yaitu sel mieloma tikus dan sel plasma (limfosit B), di mana sel heterozigot dapat menghasilkan antibodi kontinu terhadap antigen yang diinginkan secara in vitro. Produksi lini sel hibridoma terdiri dari tiga bagian: desain antigen (hapten, molekul kecil, dan peptida), imunisasi hewan, fusi sel, dan penyaringan klon positif. Dengan menggunakan metodologi imunisasi yang unik, kami memperoleh efisiensi fusi sel yang sangat tinggi (1-10 hibridoma per seribu sel B) dan titer antibodi yang tinggi, memaksimalkan tingkat keberhasilan kami dalam uji analitik selanjutnya yang meliputi penyaringan biokimia, uji berbasis sel in vitro, dan studi hewan.

●Produksi Mabs dengan teknologi tampilan fage
Phage display menawarkan metode lain untuk menghasilkan antibodi monoklonal. Limfosit B diisolasi dari darah hewan dan mRNA-nya diekstraksi. Melalui PCR, mRNA ini diubah menjadi cDNA, yang mengamplifikasi semua segmen VH dan VL. Segmen-segmen ini kemudian dikloning ke dalam vektor, biasanya sebagai fragmen variabel rantai tunggal (scFv), bersama dengan protein PIII dari bakteriofag. Selanjutnya, konstruksi ini digunakan untuk menginfeksi E. coli, menghasilkan pembuatan pustaka yang berisi sekitar 10^10 sel melalui inokulasi dengan fage pembantu. E. coli kemudian mampu mensekresikan bakteriofag yang mengandung segmen VH dan VL sebagai bagian dari selubungnya. Setelah itu, segmen VH dan VL spesifik yang menargetkan antigen yang diinginkan dapat dipilih dan digunakan untuk menginokulasi ulang E. coli dengan bakteriofag. Sel yang mengandung plasmid kemudian diisolasi dan diurutkan.

4. Penyaringan fusi

●Fusi dan Seleksi Sel
Sel B yang dipanen kemudian digabungkan dengan sel mieloma, yaitu sel kanker yang dapat berkembang biak tanpa batas dalam kultur. Penggabungan ini biasanya dicapai menggunakan teknik seperti fusi polietilen glikol (PEG).
Setelah fusi, sel hibridoma dikultur dalam medium selektif yang hanya memungkinkan sel hibridoma untuk bertahan hidup. Medium tersebut biasanya mengandung aminopterin, yang mencegah pertumbuhan sel mieloma yang tidak berfusi.

●Penyaringan dan Penggantungan
Sel-sel hibridoma yang dihasilkan kemudian disaring untuk produksi antibodi spesifik terhadap antigen target. Hal ini biasanya dilakukan menggunakan teknik seperti enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot, imunopresipitasi, dan flow cytometry.

Setelah sel hibridoma penghasil antibodi diidentifikasi, sel-sel tersebut dikloning untuk menghasilkan populasi sel yang identik. Hal ini memastikan bahwa antibodi yang diproduksi oleh setiap sel hibridoma adalah identik.

5. Verifikasi Fungsional Antibodi
Alpha Lifetech menyediakan validasi fungsional antibodi, seperti Western blotting, imunohistokimia, atau uji fungsional, untuk mengkarakterisasi antibodi monoklonal dan mengkonfirmasi spesifisitas, afinitas, dan fungsionalitas antibodi.

6. Optimalisasi antibodi
Pemurnian antibodi dari supernatan kultur menggunakan teknik seperti kromatografi afinitas protein A atau protein G, dan Alpha Lifetech juga dapat menyediakan metode modifikasi antibodi untuk meningkatkan afinitas antibodi.

7. Produksi antibodi
Alpha Lifetech dapat mengevaluasi kandidat antibodi untuk aplikasi penyaringan berkecepatan tinggi dan produksi skala besar.