Layanan Konstruksi Perpustakaan Naïve Fab

Pengenalan Layanan Konstruksi Perpustakaan Naïve FabLuar biasa

Teknologi tampilan fage (phage display) adalah teknik penyaringan in vitro yang dapat memilih antibodi target dari pustaka antibodi yang besar dan menampilkannya di permukaan bakteriofag. Sistem tampilan fage M13, yang terdiri dari lima protein kapsid, saat ini banyak digunakan untuk tampilan. Fungsi utama protein kapsid P III adalah penyaringan, dan gen target dapat dimasukkan ke dalam P III, serta jangkauan vektor yang dapat diaplikasikan juga sangat luas. Pada tahun 1985, teknologi tampilan fage diciptakan sebagai teknik untuk mempelajari epitop antigen. Tampilan fage terutama melibatkan penyisipan gen eksogen ke dalam protein kapsid fage melalui teknologi rekayasa genetika, sehingga protein yang dikodekan oleh gen eksogen dapat ditampilkan sebagai protein fusi tanpa mengubah struktur dan aktivitasnya. Kemudian, melalui beberapa putaran penyaringan, antibodi yang sangat spesifik yang dapat mengikat molekul target dipilih. Setelah bertahun-tahun pengembangan, teknologi tampilan fage telah diterapkan tidak hanya dalam studi epitop antigen, tetapi juga di bidang-bidang seperti transduksi sinyal sel, situs pengenalan protein, dan pengembangan obat. Dengan meluasnya penggunaan teknologi phage display, banyak penyakit diidentifikasi melalui teknologi phage display, yang memiliki keunggulan kecepatan, biaya yang relatif rendah, dan kapasitas pustaka yang besar. Dengan menyaring peptida bakteriofag yang berikatan dengan antigen spesifik, antibodi baru dapat dikembangkan atau antibodi yang sudah ada dapat ditingkatkan.

Fragmen Fab, juga dikenal sebagai fragmen pengikat antigen, adalah bagian penting dalam struktur antibodi yang dapat mengikat antigen. Fragmen Fab terdiri dari sebagian rantai ringan dan berat antibodi, yang dihubungkan oleh ikatan disulfida. Rantai ringan mengandung daerah variabel (VL) dan daerah konstan (CL), sedangkan rantai berat mengandung daerah variabel (VH) dan sebagian daerah konstan (CH1). VL dan VH membentuk situs pengikatan antigen (CDR) melalui interaksi hidrofobik dan ikatan hidrogen. Berat molekul fragmen Fab relatif kecil, biasanya antara 47-55 kDa, yang memberikan penetrasi jaringan yang baik dan imunogenisitas rendah. Fragmen Fab mempertahankan kemampuan pengikatan antigennya secara lengkap dan dapat mengikat antigen spesifik dengan afinitas tinggi. Karena tidak adanya segmen Fc dalam fragmen Fab, reaksi imun yang dimediasi oleh segmen Fc tidak dipicu, dan kemungkinan reaksi hipersensitivitas juga berkurang. Berat molekul yang lebih kecil memungkinkan fragmen Fab untuk lebih mudah menembus penghalang jaringan dan mencapai situs target. Waktu paruh fragmen Fab in vivo relatif singkat, yang membantu mengurangi potensi efek samping obat. Produksi antibodi Fab dapat dicapai melalui hidrolisis enzimatik, teknik rekayasa genetika, dan teknologi tampilan fage.

Pustaka Fab naif, juga dikenal sebagai pustaka Fab alami, adalah jenis pustaka antibodi dalam teknologi tampilan fage. Pustaka naif dibangun dengan mengkloning fragmen gen antibodi dari limfosit B alami yang tidak diimunisasi, terutama fragmen VH-CH dan VL-CL, yang dihubungkan bersama oleh ikatan disulfida untuk membentuk fragmen Fab. Pustaka naif mengandung sejumlah besar sekuens antibodi yang belum terpapar antigen atau disaring oleh sistem kekebalan tubuh, sehingga memiliki potensi dan keragaman pengikatan antigen yang luas.

Alpha Lifetech Dapat Menyediakan

Alpha Lifetech memiliki pengalaman luas dalam penemuan antibodi melalui metode phage display. Platform phage display kami sudah mapan dan telah kami gunakan untuk berbagai jenis fage. Platform fage M13 adalah yang paling banyak digunakan untuk phage display. Platform ini juga banyak digunakan di berbagai bidang penelitian. Tersedia berbagai layanan phage display melalui sistem fage T4 dan T7, yang dapat menawarkan berbagai pilihan menjanjikan tergantung pada keunggulan masing-masing.

Alpha Lifetech memiliki pengalaman bertahun-tahun di bidang antibodi dan telah membangun platform penemuan antibodi yang komprehensif, mulai dari penemuan antibodi monoklonal, pengembangan antibodi poliklonal, pengembangan antibodi monoklonal rekombinan hingga berbagai jenis layanan persiapan dan pengembangan antibodi. Berdasarkan berbagai teknologi dan platform persiapan antibodi, Alpha Lifetech menyediakan layanan yang disesuaikan untuk antibodi monoklonal dan poliklonal dari berbagai spesies. Selain produksi antibodi fab, kami juga dapat menyediakan serangkaian layanan pemurnian antibodi fab, pengurutan antibodi, validasi antibodi, dan layanan lainnya. Kami dapat menyediakan produk dan layanan antibodi dan protein rekombinan yang terjamin kualitasnya kepada pelanggan kami. Kami dapat menyiapkan antibodi dengan efikasi tinggi, spesifisitas kuat, dan stabilitas yang baik. Alpha Lifetech memiliki berbagai instrumen dan peralatan pemurnian antibodi fab, yang dapat menyediakan layanan pemurnian antibodi dari berbagai sumber seperti antibodi monoklonal kelinci, domba, ayam, dan tikus, serta layanan pemurnian afinitas Protein A/G dan layanan pemisahan dan pemurnian antibodi. Dan kami akan memilih metode pemurnian berdasarkan tujuan spesifik pelanggan. Berdasarkan pembangunan sistem platform komprehensif dari platform antibodi, platform protein, dll., kami mencakup layanan hulu dan hilir produksi antibodi fab, dan dapat menyediakan layanan teknis mulai dari persiapan antibodi, pemurnian antibodi dan pemisahan serta pemurnian antibodi, pengurutan antibodi, validasi antibodi, dll.

Layanan Konstruksi Perpustakaan Antibodi Fab Naif

Limfosit B diisolasi dari darah tepi hewan yang belum diimunisasi, dan karena limfosit B ini belum diimunisasi, sekuens gen antibodi yang dikandungnya beragam. Fragmen gen yang mengkode antibodi VH-CH dan VL-CL diamplifikasi dari limfosit B dengan PCR, dan fragmen gen ini mengandung daerah variabel antibodi. Fragmen gen antibodi yang diamplifikasi digabungkan dengan gen protein kapsid fage, diekspresikan, dan ditampilkan di permukaan fage. Setiap bakteriofage dapat membawa sekuens antibodi spesifik dan dapat diamplifikasi dan disaring secara ekstensif in vitro, sehingga menghasilkan konstruksi pustaka antibodi yang mengandung sejumlah besar sekuens antibodi yang berbeda.

Alur Kerja Pembuatan Pustaka Antibodi Fab Naif

Tangga	Spesifikasi	Garis waktu
Langkah 1: Ekstraksi Sel B	Membangun kumpulan sel B yang beragam yang dikumpulkan dari darah hewan.	1 hari
Langkah 2: Isolasi RNA	RNA diekstraksi dari sel-sel B ini, dengan fokus pada mRNA.	1 hari
Langkah 3: Sintesis cDNA	Dengan menggunakan transkripsi terbalik, mRNA diubah menjadi DNA komplementer (cDNA).	1 hari
Langkah 4: Amplifikasi Wilayah Variabel	Kemudian, daerah variabel dari rantai berat (VH) dan rantai ringan (VL) antibodi diperkuat menggunakan PCR.	1 hari
Langkah 5: Konstruksi Pustaka Antibodi Fab	Wilayah VH dan VL dihubungkan dengan wilayah konstan untuk membentuk fragmen Fab.	2 hari
Langkah 6: Kloning Pustaka Antibodi Fab	Fragmen Fab dikloning ke dalam vektor tampilan fage.	3 hari
Langkah 7: Tampilan Fag	Pustaka Fab ditampilkan di permukaan bakteriofag, kemudian dilakukan penyaringan berkecepatan tinggi.	1 minggu