Layanan Penyaringan Pustaka Tampilan Phage

Alpha Lifetech telah terlibat secara mendalam dalam teknologi tampilan Phage selama bertahun-tahun. Perusahaan ini telah membangun platform teknologi tampilan Phage yang sangat stabil yang menghemat waktu untuk penelitian ilmiah atau penelitian proyek dan memfasilitasi produksi selanjutnya. Alpha Lifetech juga dapat menyediakan layanan kepada pelanggan seperti produksi antibodi vhh, produksi antibodi scFv, produksi antibodi Fab.

Alpha Lifetech memiliki platform tampilan fag M13/T7 yang komprehensif untuk memastikan konstruksi dan produksi pustaka antibodi. Kami juga dapat menyediakan layanan yang disesuaikan, seperti produksi antibodi scFv dan penyaringan antibodi berthroughput tinggi, untuk memenuhi kebutuhan Anda.

Proses Konstruksi Perpustakaan Tampilan Phage

Proses pembuatan pustaka fag adalah sebagai berikut: primer spesifik dirancang untuk amplifikasi PCR yang memperoleh produk, yang diligasi enzim dengan vektor fag T7/M13, dan plasmid fag rekombinan berhasil dibuat. Plasmid fag rekombinan ditransformasikan ke dalam sel reseptor TG1, kemudian dilapisi pada media yang mengandung antibiotik yang sesuai, dan kultur yang diperluas dilakukan setelah penyaringan transformator. Setelah beberapa putaran kultur, fag mereplikasi waktu replikasi dalam bakteri dan berhasil mengekspresikan protein atau polipeptida target. Kemudian pustaka fag dimurnikan untuk menghilangkan beberapa pengotor dan fag yang tidak terikat.

Metode Penyaringan Pustaka Tampilan Fage

Keberhasilan produksi antibodi tampilan fag terutama bergantung pada pustaka tampilan fag antibodi, dan metode umum penyaringan fag adalah penyaringan fase padat dan fase cair. Penyaringan antigen fase padat memperkaya antibodi spesifik melalui 3-4 putaran elusi untuk mendapatkan pustaka tampilan fag antibodi; Penyaringan antigen fase cair dilakukan dengan menginkubasi target berlabel biotin dan pustaka tampilan fag antibodi dan menangkap fag terikat menggunakan manik-manik magnetik. Penyaringan fase padat mengonsumsi lebih banyak antigen dan beberapa epitop antigen dihancurkan. Penyaringan fase cair dicirikan oleh efisiensi dan pengayaan yang tinggi, tetapi antibodi yang diperoleh kurang spesifik. Metode penyaringan fag bergantung pada kebutuhan eksperimen, yang semuanya akan berdampak tertentu pada efek produksi antibodi tampilan fag.

Pemindaian Antibodi Berkemampuan Tinggi

Pengembangan antibodi telah berkembang pesat dalam pengobatan modern. Terdapat berbagai metode pengembangan antibodi, tetapi penyaringan antibodi dengan hasil tinggi lebih banyak digunakan dalam ilmu kedokteran. Proses ini dapat memperoleh keragaman repertoar antibodi dalam jumlah besar. Menggabungkan dengan metode penyaringan pustaka antibodi tradisional dapat meningkatkan kualitas penyaringan pustaka tampilan fag. Setelah penyaringan biologis, antibodi dapat dikarakterisasi dengan ELISA dengan hasil rendah atau penyaringan antibodi dengan hasil tinggi.

Gbr. 1 Bagan alir yang menguraikan urutan kejadian dari konstruksi perpustakaan antibodi fag hingga pembuatan antibodi monoklonal dengan afinitas tinggi terhadap antigen dan imunogenisitas rendah.(Sumber referensi:Teknologi Tampilan Fage sebagai Platform yang Kuat untuk Penemuan Obat Antibodi- PMC (nih.gov)

Tindakan pencegahan untuk pemeriksaan tampilan fag antibodiTindakan pencegahan

Pertimbangan Penyangga

Pemilihan buffer harus mempertimbangkan stabilitas target, lingkungan mikro pengikatan, dan pengikatan non-spesifik minimal dalam skenario aplikasi aktual. Protein yang tidak terkait, deterjen non-ionik, dan konsentrasi garam fisiologis kondusif untuk mengurangi latar belakang. Ada juga kondisi lain, seperti beberapa target mungkin memerlukan penambahan kation bivalen atau kofaktor lain ke buffer, kofaktor protein dapat difiksasi bersama dengan target, dapat ditambahkan ke buffer sortasi, dan bahkan dapat digunakan sebagai sarana untuk menangkap target.

Pertimbangan Tekanan

Pertimbangan umum mengenai tekanan seleksi meliputi konsentrasi molekul target, waktu pengikatan, intensitas pencucian, dll. Teknik lain untuk meningkatkan tekanan seleksi meliputi penggunaan denaturan (seperti asam, urea, dan guanidin), pelarut organik, peningkatan suhu, atau peningkatan konsentrasi ligan atau target yang bersaing dalam buffer pencucian.
Di antara semuanya, putaran penyaringan pertama adalah yang penting. Putaran penyaringan pertama adalah untuk menangkap sebanyak mungkin klon positif dari pustaka yang dibangun sambil membuang klon yang tidak spesifik. Target berlapis berpori atau sejumlah besar target yang dapat larut harus digunakan untuk memastikan bahwa sejumlah besar fag terikat ditangkap untuk mempertahankan keragaman pustaka. Dalam putaran penyaringan berikutnya, tekanan seleksi harus ditingkatkan dengan peningkatan pengayaan, pencucian berulang, dan peningkatan waktu pencucian, klon dengan afinitas tinggi dapat disaring.

Strategi Penyaringan Negatif

Tag antigen dan bahan pembawa proses penyaringan adalah untuk menyaring semua zat pada konjugat antigen, seperti tag, protein fusi, dan substrat pendukung. Penyaringan negatif terhadap non-target dapat membatasi pengayaan antibodi selain antigen target.
Sel utuh, liposom, cakram nano-fosfolipid, dan VLP dapat disaring secara negatif menggunakan sel-sel yang ditransfeksi yang disimulasikan atau sel-sel yang tidak ditransfeksi saat menyaring lini sel yang ditransfeksi.
Penghapusan campuran antigen kompleks Penyaringan negatif yang ketat dapat dilakukan untuk molekul target yang tidak diketahui atau kompleks, seperti sel utuh atau protein tidak murni.
Strategi antibodi terhadap situs antigen spesifik, yang pertama adalah dengan mengeluasi antibodi yang dapat bersaing dengan ligan dengan cara menambahkan konsentrasi ligan yang tinggi, dan yang kedua adalah dengan memblokir antibodi.

Aplikasi Tampilan Fag

*Penemuan antibodi telah menjadi semakin penting dalam pengobatan modern. Berbagai pendekatan penemuan antibodi telah ada, tetapi teknologi tampilan fag lebih banyak digunakan dalam ilmu kedokteran. Sejak tahun 1990, berbagai format antibodi telah digunakan untuk membangun perpustakaan fag, termasuk VH, VHH, scFv, diabodi, dan antibodi Fab.
*Perpustakaan peptida fag memungkinkan penentuan cepat urutan epitop protein dan telah menjadi alat yang ampuh untuk menyelidiki interaksi antara epitop dan reseptor antigen.
*Fragmen antibodi dipadukan dengan G3P dari fag M13, dan dengan mengkloning sejumlah besar gen yang mengkodekan fragmen antibodi, pustaka antibodi tampilan fag yang besar dapat dihasilkan dari mana banyak antibodi yang beragam dapat dipilih.
*Sistem tampilan fag T7 memiliki banyak keunggulan, termasuk kesederhanaan, keamanan tinggi, stabilitas, penyimpanan mudah, dan transportasi, sehingga sistem ini digunakan dalam vaksin pencegahan dan terapeutik.
*Sistem tampilan fag T7 dapat mendeteksi berbagai antigen, seperti antigen permukaan mikroorganisme patogen dan antigen kanker.

Fag