Layanan Penyaringan Perpustakaan Phage Display

Alpha Lifetech telah berkecimpung dalam teknologi Phage Display selama bertahun-tahun. Perusahaan ini telah membangun platform teknologi Phage Display yang stabil dan sempurna yang menghemat waktu untuk penelitian ilmiah atau penelitian proyek dan memfasilitasi produksi selanjutnya. Alpha Lifetech juga dapat menyediakan layanan kepada pelanggan seperti produksi antibodi vhh, produksi antibodi scFv, dan produksi antibodi Fab.

Alpha Lifetech memiliki platform tampilan fage M13/T7 yang komprehensif untuk memastikan konstruksi dan produksi pustaka antibodi. Kami juga dapat menyediakan layanan yang disesuaikan, seperti produksi antibodi scFv dan penyaringan antibodi berkecepatan tinggi, untuk memenuhi kebutuhan Anda.

Proses Konstruksi Perpustakaan Phage Display

Proses pembuatan pustaka fage adalah sebagai berikut: primer spesifik dirancang untuk amplifikasi PCR yang menghasilkan produk, yang kemudian diikat secara enzimatik dengan vektor fage T7/M13, dan plasmid fage rekombinan berhasil dibuat. Plasmid fage rekombinan ditransformasikan ke dalam sel reseptor TG1, kemudian dilapisi pada media yang mengandung antibiotik yang sesuai, dan kultur diperbanyak setelah penyaringan transformator. Setelah beberapa putaran kultur, fage bereplikasi beberapa kali dalam bakteri dan berhasil mengekspresikan protein atau polipeptida target. Kemudian pustaka fage dimurnikan untuk menghilangkan beberapa pengotor dan fage yang tidak terikat.

Metode Penyaringan Pustaka Phage Display

Keberhasilan produksi antibodi phage display terutama bergantung pada pustaka antibodi phage display, dan metode umum phage panning adalah skrining fase padat dan fase cair. Skrining antigen fase padat memperkaya antibodi spesifik melalui 3-4 putaran elusi untuk mendapatkan pustaka antibodi phage display; skrining antigen fase cair dilakukan dengan menginkubasi target berlabel biotin dan pustaka antibodi phage display serta menangkap fage yang terikat menggunakan manik-manik magnetik. Skrining fase padat mengkonsumsi lebih banyak antigen dan beberapa epitop antigen hancur. Skrining fase cair dicirikan oleh efisiensi dan pengayaan yang tinggi, tetapi antibodi yang diperoleh kurang spesifik. Metode phage panning bergantung pada kebutuhan eksperimen, yang semuanya akan memiliki dampak tertentu pada efek produksi antibodi phage display.

Penyaringan Antibodi Berkecepatan Tinggi

Pengembangan antibodi telah berkembang pesat dalam kedokteran modern. Berbagai metode pengembangan antibodi ada, tetapi penyaringan antibodi berkapasitas tinggi lebih banyak digunakan dalam ilmu kedokteran. Proses ini dapat menghasilkan keragaman repertoar antibodi dalam jumlah besar. Kombinasi dengan metode penyaringan pustaka antibodi tradisional dapat meningkatkan kualitas penyaringan pustaka tampilan fage. Setelah penyaringan biologis, antibodi dapat dikarakterisasi dengan ELISA berkapasitas rendah atau penyaringan antibodi berkapasitas tinggi.

Gambar 1. Bagan alur yang menguraikan urutan kejadian dari pembuatan pustaka antibodi fage hingga pembuatan antibodi monoklonal dengan afinitas tinggi terhadap antigen dan imunogenisitas rendah.(Sumber referensi: Teknologi Phage Display sebagai Platform yang Ampuh untuk Penemuan Obat Antibodi - PMC (nih.gov))

Tindakan Pencegahan untuk Penyaringan Tampilan Fag AntibodiTindakan pencegahan

Pertimbangan Penyangga

Pemilihan larutan penyangga harus mempertimbangkan stabilitas target, lingkungan mikro pengikatan, dan minimalisasi pengikatan non-spesifik dalam skenario aplikasi sebenarnya. Protein yang tidak terkait, deterjen non-ionik, dan konsentrasi garam fisiologis bermanfaat untuk mengurangi latar belakang. Ada juga kondisi lain, seperti beberapa target mungkin memerlukan penambahan kation bivalen atau kofaktor lain ke dalam larutan penyangga, kofaktor protein dapat diikat bersama dengan target, dapat ditambahkan ke dalam larutan penyangga penyortiran, dan bahkan dapat digunakan sebagai cara untuk menangkap target.

Pertimbangan Tekanan

Pertimbangan umum tekanan seleksi meliputi konsentrasi molekul target, waktu pengikatan, intensitas pencucian, dan lain-lain. Teknik lain untuk meningkatkan tekanan seleksi meliputi penggunaan denaturan (seperti asam, urea, dan guanidin), pelarut organik, peningkatan suhu, atau peningkatan konsentrasi ligan atau target yang bersaing dalam larutan pencuci.
Di antara tahapan tersebut, tahap penyaringan pertama sangat penting. Tahap penyaringan pertama bertujuan untuk menangkap sebanyak mungkin klon positif dari pustaka yang telah dibuat sambil menghilangkan klon yang tidak spesifik. Target berlapis pori atau sejumlah besar target terlarut harus digunakan untuk memastikan bahwa sejumlah besar fage yang terikat ditangkap untuk mempertahankan keragaman pustaka. Pada tahap penyaringan selanjutnya, tekanan seleksi harus ditingkatkan dengan peningkatan pengayaan, pencucian berulang, dan peningkatan waktu pencucian, sehingga klon dengan afinitas tinggi dapat disaring.

Strategi Penyaringan Negatif

Penanda antigen dan bahan pembawa: proses penyaringan bertujuan untuk menyaring semua zat pada konjugat antigen, seperti penanda, protein fusi, dan substrat pendukung. Penyaringan negatif terhadap non-target dapat membatasi pengayaan antibodi selain antigen target.
Sel utuh, liposom, cakram nano-fosfolipid, dan VLP dapat disaring secara negatif menggunakan sel transfectan simulasi atau sel yang tidak ditransfectan saat melakukan penyaringan lini sel transfectan.
Penghapusan campuran antigen kompleks. Penyaringan negatif yang ketat dapat dilakukan untuk molekul target yang tidak dikenal atau kompleks, seperti sel utuh atau protein yang tidak murni.
Strategi antibodi terhadap situs spesifik antigen, salah satunya adalah dengan mengelusi antibodi yang dapat bersaing dengan ligan dengan menambahkan konsentrasi ligan yang tinggi, dan yang lainnya adalah dengan memblokir antibodi tersebut.

Penerapan Phage Display

*Penemuan antibodi menjadi semakin penting dalam kedokteran modern. Berbagai pendekatan penemuan antibodi ada, tetapi teknologi tampilan fage lebih banyak digunakan dalam ilmu kedokteran. Sejak tahun 1990, berbagai format antibodi telah digunakan untuk membangun pustaka fage, termasuk VH, VHH, scFv, diabodi, dan antibodi Fab.
*Pustaka peptida fage memungkinkan penentuan urutan epitop protein secara cepat dan telah menjadi alat yang ampuh untuk menyelidiki interaksi antara epitop dan reseptor antigen.
*Fragmen antibodi digabungkan ke G3P dari fage M13, dan dengan mengkloning sejumlah besar gen yang mengkode fragmen antibodi, pustaka antibodi tampilan fage yang besar dapat dihasilkan dari mana banyak antibodi yang beragam dapat dipilih.
*Sistem tampilan fage T7 memiliki banyak keunggulan, termasuk kesederhanaan, keamanan tinggi, stabilitas, kemudahan penyimpanan, dan transportasi, sehingga sistem ini digunakan dalam vaksin pencegahan dan pengobatan.
*Sistem tampilan fage T7 dapat mendeteksi berbagai antigen, seperti antigen permukaan mikroorganisme patogen dan antigen kanker.

Fag