Layanan Analisis Interaksi Protein-Protein
Alpha Lifetech juga dapat menyediakan pelanggan dengan uji protein, analisis interaksi protein, uji interaksi protein-protein (CO-IP, Western Blot, uji imunopresipitasi kromatin), dan uji fungsi protein untuk memenuhi kebutuhan eksperimen berbagai pelanggan.
HUBUNGI KAMI01
Layanan Analisis Interaksi Protein-Protein
Alpha Lifetech telah terlibat secara mendalam dalam pengujian protein selama bertahun-tahun, membangun platform yang kokoh untuk pengujian fungsi protein, dan menguasai berbagai cara teknis untuk memverifikasi interaksi protein, yang dapat menghemat waktu penelitian ilmiah atau penelitian proyek sekaligus memberikan hasil yang stabil.
Alpha Lifetech juga dapat menyediakan pelanggan dengan uji protein, analisis interaksi protein, uji interaksi protein-protein (CO-IP, Western Blot, uji imunopresipitasi kromatin), dan uji fungsi protein untuk memenuhi kebutuhan eksperimen berbagai pelanggan.
Pengantar Uji Interaksi Protein-Protein
Protein merupakan molekul eksekutif yang paling penting dalam bentuk kehidupan apa pun yang merespons instruksi yang tersimpan dalam materi genetik. Lebih sering, protein menjalankan tugasnya dengan bertindak sebagai pelaku peran yang berinteraksi dengan protein lain, yang lebih jelas terlihat ketika fungsi protein diperiksa dalam konteks sel yang sebenarnya. Mengidentifikasi interaksi antara protein sangat penting untuk penyelidikan biokimia terhadap protein individual. Analisis interaksi protein dari berbagai jenis umum adalah sebagai berikut:
Uji Ko-imunopresipitasi
Prinsip metode ko-imunopresipitasi adalah mencampur protein target, antibodi spesifik, dan manik-manik magnetik protein A/G untuk inkubasi, supernatan protein yang tidak terikat dibuang melalui penyerapan manik-manik magnetik pada rak magnetik, dan manik-manik magnetik dicuci untuk menghilangkan protein dan kotoran lainnya kecuali yang terikat secara khusus.
Gbr. 1 Diagram skema pengujian Co-IP.(Sumber referensi:Uji koimunopresipitasi - PubMed (nih.gov))
Uji Tarik-Turun
Uji tarik-turun dilakukan dengan memfiksasi protein yang diketahui pada manik magnetik dan menambahkan zat yang akan dideteksi. Eluen dideteksi untuk penyerapan protein yang berinteraksi.
Pada tahun 1988, Smith dan kawan-kawan memurnikan protein fusi GST, yang diaplikasikan dalam uji tarik-turun dan disebut tarik-turun GST, yakni menambahkan tag GST ke protein target, menangkap protein yang berinteraksi melalui GSH, mengeluasi pengikatan, dan memverifikasinya melalui uji WB.
Gambar 2 Diagram skematik pengujian tarik-turun GST.(Sumber referensi:Uji Tarik-Turun GST untuk Mempelajari Pengikatan PIF4 secara In Vitro - PubMed (nih.gov))
Penarikannya adalah dengan menggunakan ion logam seperti nikel atau kobalt sebagai medium, memurnikan protein melalui kromatografi afinitas, dan mengeluasi ikatan melalui eksperimen WB untuk verifikasi.
Selain itu, ada DNA Pull-down (Uji pengikatan protein dna), RNA Pull-down (Uji interaksi protein rna), dan uji tarik molekul kecil.
DNA Pull-down (Protein dna binding assay) merupakan metode in vitro untuk menentukan pengikatan DNA terhadap protein. Apakah protein tertentu terikat pada DNA target dideteksi oleh uji WB; Fragmen DNA yang tidak diketahui terikat pada protein, fragmen DNA mana yang diketahui oleh deteksi MS
RNA Pull-down (Protein rna interaction assay) adalah metode in vitro untuk menentukan pengikatan RNA ke protein. Apakah protein tertentu mengikat RNA target terdeteksi oleh uji WB; Fragmen RNA yang tidak diketahui terikat pada protein, fragmen RNA mana yang diketahui oleh deteksi MS
SM pull-down (small molecule pull-down assays) dapat menemukan protein target yang mengikat secara spesifik pada molekul kecil, dan bila dikombinasikan dengan MS, protein target molekul kecil dapat disaring secara akurat, yang dapat dibagi menjadi metode pelabelan in vitro dan metode ortogonal biologis.
Percobaan WB
Percobaan WB (juga dikenal sebagai percobaan Western Blot atau Western blot), esensinya adalah reaksi spesifik antigen dan antibodi, prinsip dasarnya adalah memisahkan protein terdenaturasi melalui elektroforesis gel poliakrilamid SDS dan mentransfernya ke pembawa fase padat (seperti membran PVDF, membran NC) melalui transfer membran (rotasi basah atau semi-kering). Setelah pemblokiran (menggunakan BSA, buttermilk, dll.), antibodi primer diterapkan untuk mengikat secara spesifik ke protein, dan antibodi sekunder berlabel fluorescein ditambahkan setelah mencuci film. dengan mengikat antibodi kedua dengan antibodi primer, protein target dapat diamati dengan perkembangan warna substrat dan chemiluminescence. Umumnya digunakan untuk menentukan apakah protein tertentu diekspresikan dalam sampel dan menganalisis secara kasar tingkat ekspresinya.
Perbandingan Metode Interaksi Protein-Protein
Pengujian protein pull-down serupa dengan pengujian Co-IP, keduanya termasuk dalam pendeteksian eksperimen interaksi protein. Perbedaan antara kedua metode tersebut adalah pengujian Co-IP memperoleh protein yang berinteraksi dari protein yang diketahui, yang memiliki keaslian tertentu tetapi tidak dapat memastikan apakah protein yang berinteraksi berinteraksi secara langsung atau tidak langsung. Pengujian pull-down bertujuan untuk menemukan protein yang tidak diketahui yang berinteraksi dengan protein yang diketahui. Pengujian ini dapat secara langsung memastikan apakah protein yang diketahui berinteraksi dengan protein yang terdeteksi tetapi tidak dapat mengetahui situasi pengikatan secara in vivo.
Teknologi ko-imunopresipitasi digunakan untuk menganalisis apakah ada interaksi antara dua atau lebih protein, berdasarkan percobaan imunopresipitasi. Dibandingkan dengan analisis interaksi protein teknik eksperimen lainnya (GST Pull-down, Western Blot, uji imunopresipitasi kromatin, dll.), Teknologi Co-IP memiliki spesifisitas, sensitivitas, dan pengulangan yang lebih tinggi, yang dapat menghindari gangguan pengikatan non-spesifik dan mencerminkan interaksi protein dalam keadaan alami.
| Tarik ke bawah GST | Ko-IP | WB | |
|---|---|---|---|
| Keuntungan | *Mudah dioperasikan *Cocok untuk pemurnian berbagai protein | *Untuk analisis interaksi in vivo *Dapat diidentifikasi dengan protein hilir | *Spesifisitas yang kuat *Kualitatif dan kuantitatif in vitro |
| Keterbatasan | *Mungkin pengikatan nonspesifik *Validasi interaksi lebih lanjut diperlukan | *Ketergantungan kuat pada antibodi *Pengikatan nonspesifik mungkin terjadi | *Memakan waktu *Sulit digunakan untuk analisis protein skala besar |
| Contoh Aplikasi | *Identifikasi interaksi *Kompleks protein murni | *Pelajari transduksi sinyal *Mekanisme penyakit | Analisis selanjutnya mengenai interaksi protein-protein, protein-DNA, dan protein-RNA |
Disesuaikan
Sesuaikan layanan untuk memenuhi kebutuhan Anda
Pengalaman
Bertahun-tahun pengalaman produksi protein
Teknologi
Hasil pengiriman berkualitas tinggi
Proses Percobaan
Proses manajemen kualitas yang ketat
Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami kapan saja.
Leave Your Message
Tanggal 16 Juli 2018 
01tanggal 02