Layanan Analisis Interaksi Protein-Protein
Alpha Lifetech juga dapat menyediakan kepada pelanggan pengujian protein, analisis interaksi protein, pengujian interaksi protein-protein (CO-IP, Western Blot, pengujian imunopresipitasi kromatin), dan pengujian fungsi protein untuk memenuhi kebutuhan eksperimental dari berbagai pelanggan.
HUBUNGI KAMI01
Layanan Analisis Interaksi Protein-Protein
Alpha Lifetech telah lama berkecimpung dalam pengujian protein, membangun platform yang solid untuk pengujian fungsi protein, dan menguasai berbagai metode teknis untuk memverifikasi interaksi protein, yang dapat menghemat waktu penelitian ilmiah atau proyek penelitian sekaligus memberikan hasil yang stabil.
Alpha Lifetech juga dapat menyediakan kepada pelanggan pengujian protein, analisis interaksi protein, pengujian interaksi protein-protein (CO-IP, Western Blot, pengujian imunopresipitasi kromatin), dan pengujian fungsi protein untuk memenuhi kebutuhan eksperimental dari berbagai pelanggan.
Pengantar Pengujian Interaksi Protein-Protein
Protein adalah molekul pelaksana paling penting dalam semua bentuk kehidupan yang merespons instruksi yang tersimpan dalam materi genetik. Lebih sering, protein melakukan tugasnya dengan berperan sebagai pemain peran yang berinteraksi dengan protein lain, yang lebih jelas terlihat ketika fungsi suatu protein diperiksa dalam konteks sel yang sebenarnya. Mengidentifikasi interaksi antar protein sangat penting untuk investigasi biokimia suatu protein individu. Analisis interaksi protein dari jenis umum adalah sebagai berikut:
Uji Ko-imunopresipitasi
Prinsip metode ko-imunopresipitasi adalah mencampur protein target, antibodi spesifik, dan manik-manik magnetik protein A/G untuk diinkubasi. Supernatan protein yang tidak terikat dibuang melalui adsorpsi manik-manik magnetik pada rak magnetik, dan manik-manik magnetik dicuci untuk menghilangkan protein dan kotoran lainnya kecuali yang terikat secara spesifik.
Gambar 1. Diagram skematis dari pengujian Co-IP.(Sumber referensi: Uji koimunopresipitasi - PubMed (nih.gov))
Uji Tarik Turun
Uji pull-down dilakukan dengan menempelkan protein yang diketahui pada manik magnetik dan menambahkan zat yang akan dideteksi. Eluen kemudian dideteksi untuk melihat adsorpsi protein yang berinteraksi.
Pada tahun 1988, Smith dkk. memurnikan protein fusi GST, yang diterapkan dalam uji pull-down dan disebut Gst pull down, yaitu dengan menambahkan tag GST ke protein target, menangkap protein yang berinteraksi melalui GSH, mengelusi ikatan, dan memverifikasinya melalui uji Western Blot (WB).
Gambar 2. Diagram skematis dari uji pull-down GST.(Sumber referensi: Uji Tarik-Turun GST untuk Mempelajari Pengikatan PIF4 In Vitro - PubMed (nih.gov) )
Metode pull-down yang ia gunakan adalah dengan memanfaatkan ion logam seperti nikel atau kobalt sebagai medium, memurnikan protein melalui kromatografi afinitas, dan mengelusi ikatan melalui eksperimen Western Blot (WB) untuk verifikasi.
Selain itu, ada juga uji DNA Pull-down (uji pengikatan protein DNA), uji RNA Pull-down (uji interaksi protein RNA), dan uji pull-down molekul kecil.
DNA Pull-down (Uji pengikatan protein DNA) adalah metode in vitro untuk menentukan pengikatan protein pada DNA. Apakah protein spesifik mengikat DNA target dideteksi dengan uji Western Blot (WB); fragmen DNA yang tidak diketahui terikat pada protein, fragmen DNA mana yang diketahui melalui deteksi MS.
RNA Pull-down (Uji Interaksi Protein RNA) adalah metode in vitro untuk menentukan pengikatan RNA ke protein. Apakah protein spesifik mengikat RNA target dideteksi dengan uji Western Blot (WB); fragmen RNA yang tidak diketahui terikat pada protein, fragmen RNA mana yang diketahui melalui deteksi MS.
SM pull-down (pengujian penarikan molekul kecil) dapat menemukan protein target yang berikatan secara spesifik dengan molekul kecil, dan bila dikombinasikan dengan MS, protein target molekul kecil dapat disaring secara akurat, yang dapat dibagi menjadi metode pelabelan in vitro dan metode ortogonal biologis.
Percobaan WB
Eksperimen WB (juga dikenal sebagai eksperimen Western Blot atau Western blot), intinya adalah reaksi spesifik antara antigen dan antibodi. Prinsip dasarnya adalah memisahkan protein yang telah didenaturasi melalui elektroforesis gel poliakrilamida SDS dan mentransfernya ke pembawa fase padat (seperti membran PVDF, membran NC) melalui transfer membran (rotasi basah atau semi-kering). Setelah pemblokiran (menggunakan BSA, buttermilk, dll.), antibodi primer diaplikasikan untuk mengikat secara spesifik protein, dan antibodi sekunder berlabel fluorescein ditambahkan setelah pencucian film. Dengan mengikat antibodi sekunder dengan antibodi primer, protein target dapat diamati melalui pengembangan warna substrat dan kemiluminesensi. Secara umum digunakan untuk menentukan apakah protein spesifik diekspresikan dalam sampel dan menganalisis secara kasar tingkat ekspresinya.
Perbandingan Metode Interaksi Protein-Protein
Pengujian protein pull-down mirip dengan pengujian Co-IP, keduanya termasuk dalam eksperimen deteksi interaksi protein. Perbedaan antara kedua metode tersebut adalah bahwa pengujian Co-IP memperoleh protein yang berinteraksi dengan protein yang sudah dikenal, yang memiliki keaslian tertentu tetapi tidak dapat memastikan apakah protein yang berinteraksi tersebut berinteraksi secara langsung atau tidak langsung. Pengujian pull-down bertujuan untuk menemukan protein yang tidak dikenal yang berinteraksi dengan protein yang sudah dikenal. Pengujian ini dapat secara langsung memastikan apakah protein yang sudah dikenal berinteraksi dengan protein yang terdeteksi, tetapi tidak dapat mengetahui situasi pengikatan secara in vivo.
Teknologi ko-imunopresipitasi digunakan untuk menganalisis apakah ada interaksi antara dua atau lebih protein, berdasarkan eksperimen imunopresipitasi. Dibandingkan dengan teknik eksperimental analisis interaksi protein lainnya (GST Pull-down, Western Blot, uji imunopresipitasi kromatin, dll.), teknologi Co-IP memiliki spesifisitas, sensitivitas, dan pengulangan yang lebih tinggi, yang dapat menghindari gangguan pengikatan non-spesifik dan mencerminkan interaksi protein dalam keadaan alami.
| GST (Pajak Barang dan Jasa) Tarik ke bawah | Ko-IP | WB | |
|---|---|---|---|
| Keuntungan | *Mudah dioperasikan *Cocok untuk pemurnian berbagai protein | *Untuk analisis interaksi in vivo *Hal ini dapat diidentifikasi dengan protein hilir | *Spesifisitas yang kuat *Kualitatif dan kuantitatif in vitro |
| Keterbatasan | *Mungkin pengikatan nonspesifik *Diperlukan validasi lebih lanjut terhadap interaksi tersebut. | *Ketergantungan yang kuat pada antibodi *Pengikatan nonspesifik dapat terjadi | *Memakan waktu *Sulit digunakan untuk analisis protein skala besar |
| Contoh Aplikasi | *Identifikasi interaksi *Kompleks protein yang dimurnikan | *Mempelajari transduksi sinyal *Mekanisme penyakit | Analisis selanjutnya terhadap interaksi protein-protein, protein-DNA, dan protein-RNA. |
Disesuaikan
Sesuaikan layanan untuk memenuhi kebutuhan Anda.
Pengalaman
Pengalaman bertahun-tahun dalam produksi protein
Teknologi
Hasil pengiriman berkualitas tinggi
Proses Eksperimen
Proses manajemen kualitas yang ketat
Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami kapan saja.
Leave Your Message
16 Juli 2018 
0102