Antibodi monoklonal (mAb) sebagai pelopor obat antibodi, lebih dari 100 antibodi monoklonal telah disetujui untuk pengobatan kanker, penyakit menular, pasar pengembangan obat sendiri, dan menunjukkan nilai terapeutiknya yang unik. Teknologi antibodi sel B tunggal, sebagai generasi baru teknologi pengembangan antibodi, dapat secara efisien dan cepat mengisolasi antibodi dari sel B tunggal, yang merupakan terobosan dalam teknologi produksi antibodi setelah hibridoma dan tampilan fag. Teknologi penyortiran sel B tunggal dapat digunakan untuk pembuatan antibodi terhadap berbagai spesies seperti kelinci, tikus, unta, domba, dan ayam. Teknologi sel B tunggal memiliki keunggulan luar biasa seperti spesifisitas tinggi, aktivitas tinggi, dan afinitas tinggi. Berdasarkan platform penyortiran sel B tunggal, Alpha Lifetech memiliki keunggulan dalam waktu penyaringan dan memperoleh antibodi berkualitas tinggi. Dapat menyediakan desain antigen, sintesis, dan modifikasi, kekebalan hewan, penyaringan pengayaan sel B tunggal, pengurutan sel tunggal, penyaringan throughput tinggi, ekspresi, dan pemurnian, Layanan teknis satu atap seperti verifikasi fungsional untuk memenuhi berbagai kebutuhan pelanggan.

Pilih antigen yang tepat untuk hewan percobaan (seperti tikus, kelinci, dll.) untuk stimulasi imun, sehingga mereka dapat menghasilkan antibodi spesifik terhadap antigen tersebut.

Imunisasi hewan merupakan tahap awal pembentukan antibodi. Imunisasi hewan merupakan pemanfaatan mekanisme respons imun humoral dari organisme itu sendiri, melalui stimulasi antigen secara terus-menerus, hewan menghasilkan respons imun yang kuat, kemudian mengeluarkan antibodi spesifik terhadap antigen spesifik.

Sel B diisolasi dari darah tepi, limpa, atau kelenjar getah bening hewan yang kebal. Sel B ini telah distimulasi secara imunologis untuk menghasilkan antibodi terhadap antigen tertentu.

Dengan metode fisik atau kimia (seperti sentrifugasi gradien densitas, pemisahan manik magnetik, dll.) pengayaan sel B, pembuangan sel pengotor, peningkatan kemurnian sel B dan efisiensi pemisahan selanjutnya.

Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS), Magnetic Cell Separation (MACS), Microfluidic Cell Sorter (MCS) atau teknik penyaringan berthroughput tinggi lainnya, dikombinasikan dengan pelabelan spesifik antigen, dapat digunakan untuk menyaring sel B individual dari sel B yang diperkaya untuk menghasilkan antibodi yang ditargetkan.

Ketika sel B tunggal diisolasi dari populasi sel B campuran, gen antibodinya perlu diurutkan dengan teknologi pengurutan sel tunggal dan dianalisis untuk memperoleh informasi urutan DNA dari daerah variabel rantai berat (VH) dan daerah variabel rantai ringan (VL). Teknologi pengurutan sel tunggal terutama mencakup tiga langkah: isolasi sel tunggal, amplifikasi asam nukleat intraseluler, dan analisis pengurutan. Prinsip pengurutan sel tunggal adalah untuk mengamplifikasi jejak DNA atau RNA genom utuh dari sel tunggal yang diisolasi untuk memperoleh genom atau transkriptom lengkap dengan cakupan tinggi untuk pengurutan berthroughput tinggi.

Melalui penyaringan berthroughput tinggi, sekuens gen antibodi dari ribuan sel B dapat diperoleh pada satu waktu, sehingga mempercepat penemuan antibodi. Informasi sekuens ini selanjutnya dapat digunakan untuk konstruksi dan penyaringan pustaka antibodi.

Gbr.2 Diagram skema penangkapan sel B tunggal, konstruksi perpustakaan, penyaringan dan pengurutan berthroughput tinggi.(Sumber referensi:Pengurutan reseptor sel B tunggal paralel secara masif memungkinkan penemuan cepat berbagai antibodi reaktif antigen.)

(1)Protein rekombinan: ≥2,5 mg, kemurnian protein >85%, berat molekul protein lebih besar dari 10 kDa, konsentrasi protein terlarut antara 0,5 dan 5 mg/mL. Jika diperlukan pemurnian afinitas antigen, diperlukan tambahan 10 mg protein rekombinan.

(2)Polipeptida dan molekul kecil: Peptida polos ≥10 mg, kemurnian peptida >90%, tidak kurang dari 10 AA, menggabungkan KLH/BSA/OVA atau protein pembawa lainnya; Molekul kecil memerlukan evaluasi struktural terlebih dahulu.