Layanan Konstruksi Garis Sel Stabil

Alpha Lifetech telah lama berkecimpung dalam pengembangan proses konstruksi lini sel stabil. Perusahaan ini telah membangun platform proses konstruksi lini sel stabil yang sempurna, dengan lebih dari 300 jenis sel tumor dan sel primer, yang dapat menghasilkan lini sel stabil sekaligus menghemat waktu untuk penelitian ilmiah atau penelitian proyek, dan memfasilitasi produksi selanjutnya. Alpha Lifetech juga dapat menyediakan layanan kepada pelanggan seperti pengembangan proses strain, penyaringan strain, konstruksi strain, protein rekombinan, dan produksi antibodi, yang menyediakan dasar penelitian untuk obat-obatan baru.

Alpha Lifetech memiliki platform sel yang terinfeksi lentivirus, yang dapat menyesuaikan proses eksperimental untuk berbagai jenis strain transmutasi sel yang stabil. Kami menggunakan teknologi penghapusan gen untuk membangun lini sel knockout CRISPR/Cas9. Teknik ekspresi gen berlebih dan penekanan gen digunakan untuk menstabilkan strain transmutasi. Integrasi spesifik lokasi gen melengkapi layanan konstruksi lini sel integrasi verteks.

Pengantar konstruksi lini sel stabil

Garis sel stabil mengacu pada garis sel yang mengintegrasikan gen asing ke dalam genom sel inang sehingga gen asing tersebut dapat diekspresikan secara stabil dalam sel inang untuk waktu yang lama. Prinsipnya adalah mereduksi gen asing ke vektor dengan resistensi tertentu, mentransfeksi sel inang, mengintegrasikan gen asing ke dalam kromosom inang, dan menyaring gen resistensi yang terkandung dalam vektor untuk mendapatkan garis sel stabil dengan ekspresi protein target yang tinggi atau penekanan gen target yang stabil yang memenuhi persyaratan eksperimen.

Alpha Lifetech memiliki bengkel penyimpanan independen, sistem manajemen pembekuan dan penyimpanan sel yang sempurna, dan lebih dari 300 jenis sel tumor dan sel primer yang dapat Anda pilih, yang didedikasikan untuk penelitian ilmiah Anda.

Proses konstruksi lini sel stabil

Metode pembuatan lini sel stabil

Metode konstruksi lini sel stabil meliputi mediasi lentivirus, mediasi transposon, mediasi CRISPR/Cas9, dan penyaringan plasmid.

Metode yang dimediasi lentivirus adalah salah satu metode yang paling umum digunakan untuk membangun lini sel stabil. Pendekatan ini memiliki keunggulan dalam menginfeksi hampir semua jenis sel dan mengintegrasikan materi genetik ke dalam genom sel inang untuk ekspresi stabil dalam jangka waktu yang lama. Namun, sistem ini memiliki keterbatasan tertentu, dan lentivirus memiliki kapasitas pengemasan yang terbatas, sehingga tidak cocok untuk transkripsi gen dengan daerah transkripsi yang panjang.

Dibandingkan dengan metode yang dimediasi lentivirus, metode yang dimediasi transposon tidak memiliki batasan ukuran gen, dan dengan optimalisasi teknologi yang berkelanjutan, efisiensi penyisipan transposon telah meningkat beberapa kali lipat. Kerugiannya adalah adanya batasan tertentu pada sel primer dan sel yang sulit ditransfeksi.

Metode yang dimediasi CRISPR/Cas9 mencakup penghapusan gen CRISPR dan penyisipan gen CRISPR. Penghapusan gen CRISPR mengacu pada pemasukan fragmen DNA ganda yang terputus, yang mengakibatkan hilangnya fungsi gen target. Penyisipan gen CRISPR mengacu pada pemasukan fragmen DNA asing ke dalam gen tertentu, yang dapat digunakan untuk memperbaiki gen yang rusak atau memasukkan gen fungsional baru.

Penyaringan plasmid adalah skema konstruksi lini sel paling primitif, yang hanya perlu berhasil mentransfeksi plasmid target ke dalam sel dan menggunakan resistensi yang sesuai dalam penyaringan jangka panjang. Kemudian, ada probabilitas tertentu untuk mendapatkan lini sel yang stabil.

Metode untuk membangun berbagai lini sel stabil.

Metode Mediasi	Sistem Lentivirus	Sistem Transposon	Dimediasi oleh CRISP/Cas9	Penyaringan Plasmid
Kapasitas Pembawa	5 kb	10 kb	5 kb	10 kb
Efisiensi yang Dimediasi	Tinggi	Normal	Normal	Rendah
Garis waktu	1-2 minggu	3-4 minggu	3-4 minggu	4-6 minggu
Keuntungan	Cepat dan efisien	Keamanan dan stabilitas	Integrasi titik tetap	Biaya lebih rendah
Kekurangan	Risiko keamanan hayati	Kelimpahan ekspresi normal	Transduksi CAS9 sulit dan mahal.	Efisiensi rendah dan ketidakstabilan

Kesulitan teknis dalam pembuatan lini sel stabil.

Sebelum meningkatkan skala proses, bioreaktor kecil digunakan untuk menentukan parameter seperti gas, sistem fluida kultur, tekanan hidrodinamik minimum yang diterapkan pada sel, dll., untuk memastikan kultur lintas skala. Namun, meskipun parameter proses yang sesuai telah ditentukan, lingkungan bioreaktor besar di produsen akan tidak merata, dan mudah gagal. Alpha Lifetech memiliki pengalaman bertahun-tahun dalam peningkatan skala proses kultur, yang dapat menghindari kesalahan sampai batas tertentu, mengurangi risiko, dan sangat meningkatkan tingkat keberhasilan. Pada saat yang sama, Alpha Lifetech memastikan konsistensi bahan baku dan batch media yang digunakan, mengurangi tingkat kegagalan peningkatan skala proses kultur sel.

Alpha Lifetech memiliki platform pengembangan proses lini sel stabil yang komprehensif untuk memastikan stabilitas lini sel selama produksi. Kami juga dapat menyediakan layanan yang disesuaikan untuk memenuhi kebutuhan Anda.

Konten Layanan Konstruksi Garis Sel Stabil

Isi	Garis waktu
Kultur sel HEK293 disediakan oleh pelanggan.	3-5 bulan
Konstruksi plasmid sgRNA-Cas9 (dengan gen penyaringan G418).
sgRNA-Cas9 dan templat DNA perbaikan ditransfer bersamaan ke lini sel HEK293.
Penyaringan lini sel monoklonal (gen GFP) (klon positif knockin).
Pengiriman: Vektor, strain penyisipan gen GFP, hasil sekuensing, semua data mentah, laporan laboratorium.

Sel dapat dilacak

Sel-sel tersebut dibeli dari organisasi profesional seperti ATCC dan dapat memberikan bukti untuk memenuhi persyaratan pendaftaran Anda.

Keunggulan produksi

Alpha Lifetech memiliki pengalaman bertahun-tahun untuk memenuhi beragam kebutuhan pengembangan; Kami memiliki berbagai macam sel penyimpanan, bengkel penyimpanan independen, pembekuan sel yang sempurna, dan sistem manajemen penyimpanan.

Pengendalian mutu proyek

Setiap proyek menjalani proses kontrol kualitas yang ketat untuk memastikan pengiriman lini sel yang memenuhi standar tinggi kepada pelanggan.

Keunggulan teknis

Selain para insinyur dengan pengalaman seluler yang luas, kami memiliki algoritma evolusi teknologi canggih untuk meningkatkan kondisi reaktor dan memodifikasi parameter proses.

Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami kapan saja.

Leave Your Message

Layanan Unggulan

0102