Layanan Konstruksi Garis Sel Stabil

Alpha Lifetech telah terlibat secara mendalam di bidang pengembangan proses konstruksi lini sel stabil selama bertahun-tahun. Platform proses konstruksi lini sel stabil yang sempurna telah dibangun, dengan lebih dari 300 jenis sel tumor dan sel primer. Platform ini dapat menghasilkan lini sel stabil sekaligus menghemat waktu untuk penelitian ilmiah atau riset proyek, dan memfasilitasi produksi selanjutnya. Alpha Lifetech juga dapat menyediakan layanan kepada pelanggan seperti pengembangan proses galur, skrining galur, konstruksi galur, protein rekombinan, dan produksi antibodi, yang menyediakan basis penelitian untuk obat-obatan baru.

Alpha Lifetech memiliki platform sel yang terinfeksi lentivirus, yang dapat menyesuaikan proses eksperimen untuk berbagai jenis galur transmutasi sel yang stabil. Kami menggunakan teknologi knockout gen untuk membangun lini sel knockout CRISPR/Cas9. Teknik overekspresi gen dan pembungkaman gen digunakan untuk menstabilkan galur transmutasi. Integrasi spesifik lokasi gen melengkapi layanan konstruksi lini sel integrasi verteks.

Pengantar konstruksi garis sel yang stabil

Lini sel stabil mengacu pada lini sel yang mengintegrasikan gen asing ke dalam genom sel inang sehingga gen asing dapat diekspresikan secara stabil di dalam sel inang untuk jangka waktu yang lama. Prinsipnya adalah mereduksi gen asing menjadi vektor dengan resistensi tertentu, mentransfeksi sel inang, mengintegrasikan gen asing ke dalam kromosom inang, dan menyaring gen resistensi yang terkandung dalam vektor untuk mendapatkan lini sel stabil dengan ekspresi protein target yang tinggi atau pembungkaman gen target yang stabil dan memenuhi persyaratan percobaan.

Alpha Lifetech memiliki bengkel penyimpanan independen, sistem manajemen penyimpanan dan pembekuan sel yang sempurna, dan lebih dari 300 jenis sel tumor dan sel primer untuk Anda pilih, yang didedikasikan untuk penelitian ilmiah Anda.

Proses konstruksi garis sel yang stabil

Metode konstruksi garis sel yang stabil

Metode konstruksi garis sel yang stabil meliputi penyaringan yang dimediasi lentivirus, penyaringan yang dimediasi transposon, penyaringan CRISPR/Cas9, dan penyaringan plasmid.

Metode lentivirus merupakan salah satu metode yang paling umum digunakan untuk membangun lini sel yang stabil. Pendekatan ini memiliki keuntungan menginfeksi hampir semua jenis sel dan mengintegrasikan materi genetik ke dalam genom sel inang untuk ekspresi yang stabil dalam jangka waktu yang panjang. Namun, sistem ini memiliki beberapa keterbatasan, dan lentivirus memiliki kapasitas pengemasan yang terbatas, sehingga tidak cocok untuk transkripsi gen dengan daerah transkripsi yang panjang.

Dibandingkan dengan yang dimediasi lentivirus, yang dimediasi transposon tidak memiliki batasan ukuran gen, dan dengan optimalisasi teknologi yang berkelanjutan, efisiensi penyisipan transposon telah ditingkatkan beberapa kali lipat. Kerugiannya adalah adanya batasan tertentu pada sel primer dan sel yang sulit ditransfeksi.

CRISPR/Cas9 yang dimediasi mengandung knockout gen crispr dan knockin gen crispr. Knockout gen Crispr mengacu pada pemutusan untai ganda DNA, yang mengakibatkan hilangnya fungsi gen target. Knockin gen Crispr mengacu pada fragmen DNA asing ke dalam gen spesifik, yang dapat digunakan untuk memperbaiki gen yang rusak atau memperkenalkan gen fungsional baru.

Skrining plasmid adalah skema konstruksi lini sel paling primitif, yang hanya perlu mentransfeksi plasmid target ke dalam sel dan menggunakan resistensi yang sesuai dalam skrining jangka panjang. Dengan demikian, terdapat probabilitas tertentu untuk mendapatkan lini sel yang stabil.

Metode untuk membangun berbagai garis sel yang stabil

Metode Mediasi	Sistem Lentivirus	Sistem Transposon	Dimediasi CRISP/Cas9	Skrining Plasmid
Kapasitas Pengangkut	5 kb	10 kb	5 kb	10 kb
Efisiensi yang Dimediasi	Tinggi	Normal	Normal	Rendah
Garis waktu	1-2 minggu	3-4 minggu	3-4 minggu	4-6 minggu
Keuntungan	Cepat dan efisien	Keamanan dan stabilitas	Integrasi titik tetap	Biaya lebih rendah
Kekurangan	Risiko keamanan hayati	Kelimpahan ekspresi normal	Transduksi CAS9 sulit dan mahal	Efisiensi rendah dan ketidakstabilan

Kesulitan teknis dalam konstruksi garis sel yang stabil

Sebelum proses peningkatan skala, bioreaktor kecil digunakan untuk menentukan parameter seperti gas, sistem fluida kultur, tekanan hidrodinamik minimum yang diterapkan pada sel, dll., guna memastikan kultur lintas skala. Namun, meskipun parameter proses yang sesuai telah ditentukan, lingkungan bioreaktor besar di pabrik akan tidak merata, dan mudah mengalami kegagalan. Alpha Lifetech memiliki pengalaman bertahun-tahun dalam kultur peningkatan skala proses, yang dapat menghindari kesalahan hingga batas tertentu, mengurangi risiko, dan meningkatkan tingkat keberhasilan secara signifikan. Di saat yang sama, Alpha Lifetech memastikan konsistensi bahan baku dan batch media yang digunakan, sehingga mengurangi tingkat kegagalan peningkatan skala proses kultur sel.

Alpha Lifetech memiliki platform pengembangan proses lini sel yang komprehensif dan stabil untuk memastikan stabilitas lini sel selama produksi. Kami juga dapat menyediakan layanan yang disesuaikan untuk memenuhi kebutuhan Anda.

Konten Layanan Konstruksi Garis Sel Stabil

Isi	Garis waktu
Kultur garis sel HEK293 disediakan oleh pelanggan.	3-5 bulan
Konstruksi plasmid sgRNA-Cas9 (dengan gen penyaringan G418).
Template sgRNA-Cas9 dan DNA perbaikan ditransfer bersama ke lini sel HEK293.
Skrining garis sel monoklonal (GFP gene klon positif knockin).
Pengiriman: Vektor, strain knock-in gen GFP, hasil sekuensing, semua data mentah, laporan lab

Sel dapat dilacak

Sel-sel tersebut dibeli dari organisasi profesional seperti ATCC dan dapat memberikan bukti untuk memenuhi persyaratan pendaftaran Anda.

Keunggulan produksi

Alpha Lifetech memiliki pengalaman bertahun-tahun untuk memenuhi beragam kebutuhan pengembangan; Kami memiliki berbagai sel, bengkel penyimpanan independen, pembekuan sel yang sempurna, dan sistem manajemen penyimpanan.

Kontrol Kualitas Proyek

Setiap proyek menjalani proses pengendalian mutu yang ketat untuk memastikan pengiriman lini sel yang memenuhi standar tinggi kepada pelanggan.

Keunggulan teknis

Selain insinyur dengan pengalaman seluler yang luas, kami memiliki algoritma evolusi teknologi canggih untuk meningkatkan kondisi reaktor dan memodifikasi parameter proses.

Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami kapan saja.

Leave Your Message

Layanan Unggulan

0102