Layanan Konstruksi Garis Sel yang Stabil

Alpha Lifetech telah terlibat secara mendalam dalam bidang pengembangan proses konstruksi lini sel yang stabil selama bertahun-tahun. Perusahaan ini telah membangun platform proses konstruksi lini sel yang stabil dan sempurna, dengan lebih dari 300 jenis sel tumor dan sel primer, yang dapat menghasilkan lini sel yang stabil sekaligus menghemat waktu untuk penelitian ilmiah atau penelitian proyek, dan memfasilitasi produksi selanjutnya. Alpha Lifetech juga dapat menyediakan layanan kepada pelanggan seperti pengembangan proses galur, penyaringan galur, konstruksi galur, protein rekombinan, dan produksi antibodi, yang menyediakan basis penelitian untuk obat-obatan baru.

Alpha Lifetech memiliki platform sel yang terinfeksi lentivirus, yang dapat menyesuaikan proses eksperimen untuk berbagai jenis galur transmutasi sel yang stabil. Kami menggunakan teknologi knockout gen untuk membangun lini sel knockout CRISPR/Cas9. Teknik overekspresi gen dan pembungkaman gen digunakan untuk menstabilkan galur transmutasi. Integrasi spesifik lokasi gen melengkapi layanan konstruksi lini sel integrasi verteks.

Pengantar konstruksi garis sel yang stabil

Garis sel yang stabil mengacu pada garis sel yang mengintegrasikan gen asing ke dalam genom sel inang sehingga gen asing dapat diekspresikan secara stabil dalam sel inang untuk waktu yang lama. Prinsipnya adalah mereduksi gen asing menjadi vektor dengan resistensi tertentu, mentransfeksi sel inang, mengintegrasikan gen asing ke dalam kromosom inang, dan menyaring gen resistensi yang terkandung dalam vektor untuk mendapatkan garis sel yang stabil dengan ekspresi protein target yang tinggi atau pembungkaman gen target yang stabil yang memenuhi persyaratan percobaan.

Alpha Lifetech memiliki bengkel penyimpanan independen, sistem manajemen penyimpanan dan pembekuan sel yang sempurna, dan lebih dari 300 jenis sel tumor dan sel primer untuk Anda pilih, yang didedikasikan untuk penelitian ilmiah Anda.

Proses konstruksi garis sel yang stabil

Metode konstruksi garis sel yang stabil

Metode konstruksi garis sel yang stabil meliputi penyaringan yang dimediasi lentivirus, yang dimediasi transposon, yang dimediasi CRISPR/Cas9, dan plasmid.

lentivirus-mediated merupakan salah satu metode yang paling umum digunakan untuk membangun garis sel yang stabil. Pendekatan ini memiliki keuntungan menginfeksi hampir semua jenis sel dan mengintegrasikan materi genetik ke dalam genom sel inang untuk ekspresi yang stabil dalam jangka waktu yang lama. Akan tetapi, sistem ini memiliki keterbatasan tertentu, dan lentivirus memiliki kapasitas pengemasan yang terbatas, sehingga tidak cocok untuk transkripsi gen dengan daerah transkripsi yang panjang.

Dibandingkan dengan yang dimediasi lentivirus, yang dimediasi transposon tidak memiliki batasan pada ukuran gen, dan dengan optimalisasi teknologi yang berkelanjutan, efisiensi penyisipan transposon telah ditingkatkan beberapa kali. Kerugiannya adalah bahwa pembatasan tertentu pada sel primer dan sel sulit untuk ditransfeksi.

CRISPR/Cas9-mediated mengandung crispr gene knockout dan crispr gene knockin. Crispr gene knockout mengacu pada pengenalan pemotongan untai ganda DNA, yang mengakibatkan hilangnya fungsi gen target. Crispr gene knockin mengacu pada fragmen DNA asing ke dalam gen tertentu, yang dapat digunakan untuk memperbaiki gen yang rusak atau memperkenalkan gen fungsional baru.

Skrining plasmid merupakan skema konstruksi lini sel yang paling primitif, yang hanya perlu mentransfeksi plasmid target ke dalam sel dan menggunakan resistensi yang sesuai dalam skrining jangka panjang. Maka ada kemungkinan tertentu untuk memperoleh lini sel yang stabil.

Metode untuk membangun berbagai garis sel yang stabil

Metode Mediasi	Sistem Lentivirus	Sistem Transposon	Dimediasi CRISP/Cas9	Skrining Plasmid
Kapasitas Pengangkut	5kb	10kb	5kb	10kb
Efisiensi yang Dimediasi	Tinggi	Normal	Normal	Rendah
Garis Waktu	1-2 minggu	3-4 minggu	3-4 minggu	4-6 minggu
Keuntungan	Cepat dan efisien	Keamanan dan stabilitas	Integrasi titik tetap	Biaya lebih rendah
Kekurangan	Risiko Keamanan Hayati	Kelimpahan ekspresi normal	Transduksi CAS9 sulit dan mahal	Efisiensi rendah dan ketidakstabilan

Kesulitan teknis dalam konstruksi garis sel yang stabil

Sebelum meningkatkan skala proses, bioreaktor kecil digunakan untuk menentukan parameter seperti gas, sistem cairan kultur, tekanan hidrodinamik minimum yang diterapkan pada sel, dll., untuk memastikan kultur lintas skala. Namun, bahkan jika parameter proses yang sesuai ditentukan, lingkungan bioreaktor besar di produsen akan tidak merata, dan mudah gagal. Alpha Lifetech memiliki pengalaman bertahun-tahun dalam kultur peningkatan skala proses, yang dapat menghindari kesalahan sampai batas tertentu, mengurangi risiko, dan sangat meningkatkan tingkat keberhasilan. Pada saat yang sama, Alpha Lifetech memastikan konsistensi bahan baku dan media yang digunakan, mengurangi tingkat kegagalan peningkatan skala proses kultur sel.

Alpha Lifetech memiliki platform pengembangan proses lini sel yang stabil dan komprehensif untuk memastikan stabilitas lini sel selama produksi. Kami juga dapat menyediakan layanan yang disesuaikan untuk memenuhi kebutuhan Anda.

Layanan Konstruksi Garis Sel Stabil

Isi	Garis Waktu
Kultur garis sel HEK293 disediakan oleh pelanggan.	3-5 bulan
Konstruksi plasmid sgRNA-Cas9 (dengan gen penyaringan G418).
Template sgRNA-Cas9 dan DNA perbaikan ditransfer bersama ke lini sel HEK293.
Skrining garis sel monoklonal (GFP gen) mengetuk klon positif).
Pengiriman: Vektor, strain knock-in gen GFP, hasil sekuensing, semua data mentah, laporan lab

Sel dapat dilacak

Sel dibeli dari organisasi profesional seperti ATCC dan dapat memberikan bukti untuk memenuhi kebutuhan persyaratan pendaftaran Anda.

Keunggulan produksi

Alpha Lifetech memiliki pengalaman bertahun-tahun untuk memenuhi beragam kebutuhan pengembangan; Kami memiliki berbagai sel, bengkel penyimpanan independen, pembekuan sel yang sempurna, dan sistem manajemen penyimpanan.

Kontrol Kualitas Proyek

Setiap proyek menjalani proses pengendalian mutu yang ketat untuk memastikan pengiriman lini sel yang memenuhi standar tinggi kepada pelanggan.

Keunggulan teknis

Selain teknisi yang memiliki pengalaman seluler luas, kami juga memiliki algoritma evolusi teknologi canggih untuk meningkatkan kondisi reaktor dan memodifikasi parameter proses.

Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami kapan saja.

Leave Your Message

Layanan Unggulan

01tanggal 02