Antibodi VHH adalah antibodi rantai ringan (VL) alami yang hilang yang ditemukan dalam serum hewan unta. Struktur antibodi VHH sederhana dan hanya terdiri dari dua rantai berat (VH). Nanobodi terdiri dari daerah variabel rantai berat (VHH) dengan berat molekul sekitar 15 kDa. Antibodi VHH memiliki kemampuan normal untuk mengenali antigen dan menunjukkan afinitas yang sangat baik, spesifisitas yang sangat baik, stabilitas yang sangat baik, dan penetrasi yang sangat baik. Antibodi terhadap struktur tersebut sejak itu telah ditemukan pada hewan lain, seperti alpaka dan hiu. Nanobodi, yang hanya mengandung satu daerah variabel rantai berat dan dua daerah CH2 dan CH3 konvensional, meskipun tidak memiliki domain VL, adalah antibodi domain tunggal yang sangat stabil dan unit pengikat terkecil yang diketahui dengan aktivitas antibodi. Alpha Lifetech dapat menyediakan pelanggan dengan termasuk persiapan nanobody, konstruksi dan penyaringan pustaka nanobody, ekspresi nanobody VHH, dan serangkaian layanan, melalui platform sintesis nanobody dan pengembangan tampilan fag, dapat secara efisien membangun dan menyaring termasuk berbagai jenis pustaka antibodi fag, menyediakan solusi antibodi yang spesifik dan sangat spesifik bagi pelanggan kami. Kami juga dapat mengembangkan strategi humanisasi antibodi profesional untuk klien kami, yang dapat dihumanisasi untuk nanobody, dan perusahaan kami hampir setara dengan antibodi manusia.

Pertama, alpaka tanpa penyakit apa pun, memungkinkan imunogen untuk merangsang sistem imunnya untuk menghasilkan respons imun, dan hewan-hewan ini dapat menghasilkan antibodi domain tunggal. Kemudian, kami mengisolasi sel-sel B tunggal dari PBMC alpaka, dan RNA dari sel-sel B diekstraksi dan ditranskripsi menjadi cDNA. Akhirnya akhirnya digunakan sebagai templat dan menyaring urutan VHH target kami dengan elektroforesis. Selanjutnya, kami melakukan analisis sekuensing dari urutan antibodi VHH yang disaring, yang dapat meningkatkan stabilitas dan afinitas antibodi VHH yang disiapkan. Pada saat yang sama, kami juga dapat melakukan mutagenesis yang diarahkan pada lokasi dan penyaringan stabilitas antibodi VHH. Kami dapat memperoleh stabilitas mutan antibodi VHH yang lebih tinggi dengan memperkenalkan metode khusus seperti mutasi spesifik tertentu untuk penyaringan. Insinyur kemudian memasukkan urutan VHH yang dihasilkan ke dalam vektor ekspresi yang sesuai (seperti plasmid, virus, dll.) untuk ekspresi antibodi VHH. Terakhir, melalui teknologi tampilan fag atau teknologi tampilan ragi, antibodi VHH diekspresikan pada permukaan inang, lalu nanoantibodi yang secara spesifik dapat mengikat antigen target dipilih dengan menggunakan antigen berlapis dan ELISA. Alpha Lifetech juga mengurutkan dan memverifikasi nanobodi terpilih untuk memastikan kebenaran dan aktivitas fungsional dari urutan nanobodi yang dikirimkan kepada pelanggan.

Teknologi VHH memanfaatkan berbagai kemajuan dalam rekayasa genetika, sehingga gen target disambung ulang dan disusun ulang bersama-sama dalam keadaan normal, yang dapat menyediakan alat pengikat yang sangat baik untuk teknologi lain, yang dapat berisi berbagai tag, dan antibodi yang diproduksi oleh teknologi VHH mudah untuk dimurnikan. Dengan menggunakan teknik penyaringan berthroughput tinggi, Alpha Lifetech dapat menyaring antibodi VHH dengan fungsi-fungsi khusus yang dibutuhkan oleh klien dari sejumlah besar antibodi dalam waktu singkat. Sementara itu, antibodi VHH dapat diproduksi tanpa batas waktu dan ekonomis, ketika antibodi VHH terpapar pada suhu tinggi dan pelarut lainnya. Antibodi VHH dapat dimanipulasi secara genetik untuk menghasilkan penggunaan lain, seperti menjadi perancah, pelabelan, dan mengubah asam amino tertentu. Antibodi VHH cocok untuk platform umum apa pun yang menggunakan antibodi konvensional, seperti pelat mikrotiter, biosensor elektrokimia, dan perangkat aliran lateral. Karena ukurannya yang lebih kecil, antibodi VHH dapat memiliki kepadatan yang lebih tinggi dalam domain pengikatan, sehingga antibodi VHH memiliki keunggulan luar biasa dalam peningkatan sinyal dan karenanya sensitivitas yang lebih tinggi. Pada saat yang sama, antibodi VHH memiliki aplikasi yang sangat luas dalam diagnosis dan pengobatan tumor, diagnosis peradangan, pengobatan penyakit sistem saraf pusat, dan bidang lainnya. Antibodi VHH sangat berguna untuk memantau mikotoksin dalam makanan dan pakan karena mudah direkayasa secara genetik dan memiliki stabilitas yang sangat baik.

Dalam proses imunisasi, kami menggunakan berbagai imunogen. Menurut sifat imunogen, kami dapat membaginya menjadi antigen alami, antigen rekombinan, antigen sintetis, dan antigen molekul kecil. Antigen alami termasuk imunogen virus. Proses pemurnian imunogen alami rumit, yang juga lebih sulit daripada imunogen lainnya, dan biaya pemurniannya juga lebih tinggi. Imunogen virus dibagi menjadi vaksin inaktif virus utuh, vaksin subunit, vaksin vektor virus, dan vaksin mRNA. Vaksin inaktif virus utuh dapat merangsang tubuh untuk menghasilkan respons imun, tetapi virus perlu dinonaktifkan sepenuhnya, dan proses persiapannya lebih rumit. Untuk vaksin subunit, kami hanya menggunakan protein permukaan virus sebagai antigen, sehingga keamanan imunogen ini tinggi, tetapi adjuvan perlu ditambahkan untuk meningkatkan efek imun. Setelah modifikasi genetik, adenovirus dan lentivirus digunakan sebagai vektor untuk menginduksi terjadinya respons imun melalui replikasi dan ekspresi virus. Efek imunnya efisien dan tahan lama, tetapi proses persiapannya rumit, jadi kita perlu mengendalikan biosafety secara ketat. Sementara mRNA dapat langsung diimpor ke dalam sel, sehingga sel dapat mengekspresikan antigen dan merangsang terjadinya respons imun, proses ini lebih sulit, yang mengharuskan kita untuk memastikan stabilitas dan efisiensi pengiriman mRNA. Meskipun antigen rekombinan berbeda dalam konformasi dari antigen alami, mereka dapat menjalani produksi industri yang luas. Protein molekul kecil atau antigen polipeptida, dapat disiapkan dengan metode sintesis in vitro. Strukturnya dapat dikontrol, tetapi dapat menjadi rumit dalam desain. Antigen molekul kecil sebagian besar adalah senyawa molekul kecil seperti peptida dan nukleotida, karena mereka tidak imunogenik dengan sendirinya, sehingga mereka hanya dapat digunakan sebagai imunogen setelah koneksi dengan pembawa makromolekul.

Berat molekul nanoantibodi sangat kecil, biasanya sekitar 12-15 kDa, hanya sepersepuluh dari antibodi IgG tradisional. Struktur kristal adalah bola rugby dengan diameter sekitar 2,5 nm dan panjang sekitar 4,2 nm. Struktur molekul yang unik memungkinkan penetrasi jaringan yang baik, waktu paruh yang lebih pendek, dan pembersihan ginjal yang lebih tinggi, melalui penghalang darah-otak. Nanoantibodi terdiri dari daerah penentu dan tulang punggung yang komplementer. Daerah keputusan komplementer meliputi CDR 1, CDR 2, dan CDR 3. Kisaran panjang 3 hingga 28 asam amino di daerah CDR 3 memastikan kapasitas penyimpanan perpustakaan nanoantibodi. Dibandingkan dengan daerah antibodi tradisional CDR 3 yang hanya 8 hingga 15 asam amino, beberapa daerah CDR 3 dengan CDR 3 yang lebih panjang membantu kami mengidentifikasi epitop tersembunyi di permukaan antigen. Wilayah tulang punggung nanobodi mencakup FR 1, FR 2, FR 3, dan FR 4, dengan empat mutasi asam amino hidrofilik pada FR 2, dan mutasi ini meningkatkan kelarutan antibodi dalam air. Ikatan disulfida khusus antara CDR 1 dan CDR 3 meningkatkan stabilitas antibodi di bawah tekanan tinggi, suhu tinggi, denaturan, dan kondisi lainnya, yang mendukung produksi dan pengawetan nanobodi, dan juga menciptakan kemungkinan metode pemberian baru.