Antibodi VHH adalah antibodi rantai ringan (VL) alami yang hilang yang ditemukan dalam serum hewan unta. Struktur antibodi VHH sederhana dan hanya terdiri dari dua rantai berat (VH). Nanobodi terdiri dari daerah variabel rantai berat (VHH) dengan berat molekul sekitar 15 kDa. Antibodi VHH memiliki kemampuan normal untuk mengenali antigen dan menunjukkan afinitas yang sangat baik, spesifisitas yang sangat baik, stabilitas yang sangat baik, dan penetrasi yang sangat baik. Antibodi terhadap struktur ini kemudian ditemukan pada hewan lain, seperti alpaka dan hiu. Nanobodi, yang hanya mengandung satu daerah variabel rantai berat dan dua daerah CH2 dan CH3 konvensional, meskipun tidak memiliki domain VL, adalah antibodi domain tunggal yang sangat stabil dan unit pengikat terkecil yang diketahui dengan aktivitas antibodi. Alpha Lifetech dapat menyediakan layanan kepada pelanggan termasuk persiapan nanobody, pembuatan dan penyaringan pustaka nanobody, ekspresi nanobody VHH, dan serangkaian layanan lainnya. Melalui platform pengembangan sintesis nanobody dan phage display, kami dapat secara efisien membangun dan menyaring berbagai jenis pustaka antibodi fage, serta menyediakan solusi antibodi yang spesifik dan ber-spesifisitas tinggi kepada pelanggan kami. Kami juga dapat mengembangkan strategi humanisasi antibodi profesional untuk klien kami, yang dapat dihumanisasi untuk nanobody, dan produk perusahaan kami hampir setara dengan antibodi manusia.

Pertama, alpaka yang tidak sakit memungkinkan imunogen untuk menstimulasi sistem kekebalannya menghasilkan respons imun, dan hewan-hewan ini dapat menghasilkan antibodi domain tunggal. Kemudian, kami mengisolasi sel B tunggal dari PBMC alpaka, dan RNA dari sel B diekstrak dan ditranskripsikan menjadi cDNA. Akhirnya digunakan sebagai templat dan kami menyaring sekuens VHH target kami dengan elektroforesis. Selanjutnya, kami melakukan analisis sekuensing dari sekuens antibodi VHH yang telah disaring, yang dapat meningkatkan stabilitas dan afinitas antibodi VHH yang disiapkan. Pada saat yang sama, kami juga dapat melakukan mutagenesis terarah dan penyaringan stabilitas antibodi VHH. Kami dapat memperoleh stabilitas mutan antibodi VHH yang lebih tinggi dengan memperkenalkan metode khusus seperti mutasi spesifik tertentu untuk penyaringan. Kemudian, insinyur memasukkan sekuens VHH yang dihasilkan ke dalam vektor ekspresi yang sesuai (seperti plasmid, virus, dll.) untuk ekspresi antibodi VHH. Terakhir, melalui teknologi phage display atau teknologi yeast display, antibodi VHH diekspresikan pada permukaan inang, dan kemudian nanoantibodi yang dapat mengikat antigen target secara spesifik dipilih dengan menggunakan antigen berlapis dan ELISA. Alpha Lifetech juga melakukan sekuensing dan verifikasi nanobodi yang dipilih untuk memastikan kebenaran dan aktivitas fungsional dari sekuens nanobodi yang dikirimkan kepada pelanggan.

Teknologi VHH memanfaatkan berbagai kemajuan dalam rekayasa genetika, sehingga gen target disambung ulang dan disusun kembali dalam keadaan normal, yang dapat menyediakan alat pengikat yang sangat kuat untuk teknologi lain, yang dapat mengandung berbagai tag, dan antibodi yang dihasilkan oleh teknologi VHH mudah dimurnikan. Dengan menggunakan teknik penyaringan berkecepatan tinggi, Alpha Lifetech dapat menyaring antibodi VHH dengan fungsi spesifik yang dibutuhkan klien dari sejumlah besar antibodi dalam waktu singkat. Sementara itu, antibodi VHH dapat diproduksi tanpa batas dan ekonomis, ketika antibodi VHH terpapar suhu tinggi dan pelarut lainnya. Antibodi VHH dapat dimanipulasi secara genetik untuk menghasilkan kegunaan lain, seperti menjadi perancah, pelabelan, dan mengubah asam amino tertentu. Antibodi VHH cocok untuk platform umum apa pun yang menggunakan antibodi konvensional, seperti pelat mikrotiter, biosensor elektrokimia, dan perangkat aliran lateral. Karena ukurannya yang lebih kecil, antibodi VHH dapat memiliki kepadatan yang lebih tinggi di domain pengikatan, sehingga antibodi VHH memiliki keunggulan luar biasa dalam peningkatan sinyal dan karenanya sensitivitas yang lebih tinggi. Pada saat yang sama, antibodi VHH memiliki aplikasi yang sangat luas dalam diagnosis dan pengobatan tumor, diagnosis peradangan, pengobatan penyakit sistem saraf pusat, dan bidang lainnya. Antibodi VHH sangat berguna untuk memantau mikotoksin dalam makanan dan pakan karena mudah direkayasa secara genetik dan memiliki stabilitas yang sangat baik.

Dalam proses imunisasi, kita menggunakan berbagai macam imunogen. Berdasarkan sifat-sifat imunogen, kita dapat membaginya menjadi antigen alami, antigen rekombinan, antigen sintetik, dan antigen molekul kecil. Antigen alami meliputi imunogen virus. Proses pemurnian imunogen alami rumit, lebih sulit daripada imunogen lainnya, dan biaya pemurniannya juga lebih tinggi. Imunogen virus dibagi menjadi vaksin virus utuh yang diinaktivasi, vaksin subunit, vaksin vektor virus, dan vaksin mRNA. Vaksin virus utuh yang diinaktivasi dapat merangsang tubuh untuk menghasilkan respons imun, tetapi virus perlu diinaktivasi sepenuhnya, dan proses persiapannya lebih rumit. Untuk vaksin subunit, kita hanya menggunakan protein permukaan virus sebagai antigen, sehingga keamanan imunogen ini tinggi, tetapi perlu ditambahkan adjuvan untuk meningkatkan efek imun. Setelah modifikasi genetik, adenovirus dan lentivirus digunakan sebagai vektor untuk menginduksi terjadinya respons imun melalui replikasi dan ekspresi virus. Efek imunnya efisien dan tahan lama, tetapi proses persiapannya kompleks, sehingga kita perlu mengontrol keamanan hayati secara ketat. Sementara mRNA dapat langsung diimpor ke dalam sel, sehingga sel dapat mengekspresikan antigen dan merangsang terjadinya respons imun, proses ini lebih sulit, yang mengharuskan kita untuk memastikan stabilitas dan efisiensi pengiriman mRNA. Meskipun antigen rekombinan berbeda dalam konformasi dari antigen alami, mereka dapat menjalani produksi industri yang luas. Protein molekul kecil atau antigen polipeptida, dapat disiapkan dengan metode sintesis in vitro. Strukturnya dapat dikontrol, tetapi desainnya bisa rumit. Antigen molekul kecil sebagian besar adalah senyawa molekul kecil seperti peptida dan nukleotida, karena mereka sendiri tidak imunogenik, sehingga mereka hanya dapat digunakan sebagai imunogen setelah dihubungkan dengan pembawa makromolekul.

Berat molekuler nanoantibodi sangat kecil, biasanya sekitar 12-15 kDa, hanya sepersepuluh dari antibodi IgG tradisional. Struktur kristalnya berbentuk bola rugby dengan diameter sekitar 2,5 nm dan panjang sekitar 4,2 nm. Struktur molekuler yang unik memungkinkan penetrasi jaringan yang baik, waktu paruh yang lebih pendek, dan pembersihan ginjal yang lebih tinggi, melalui sawar darah-otak. Nanoantibodi terdiri dari daerah penentu komplementer dan daerah tulang punggung. Daerah penentu komplementer meliputi CDR 1, CDR 2, dan CDR 3. Rentang panjang 3 hingga 28 asam amino di daerah CDR 3 memastikan kapasitas penyimpanan pustaka nanoantibodi. Dibandingkan dengan daerah CDR 3 antibodi tradisional yang hanya memiliki 8 hingga 15 asam amino, beberapa daerah CDR 3 dengan CDR 3 yang lebih panjang membantu kita mengidentifikasi epitop tersembunyi di permukaan antigen. Bagian utama dari nanobodi mencakup FR 1, FR 2, FR 3, dan FR 4, dengan empat mutasi asam amino hidrofilik pada FR 2, dan mutasi ini meningkatkan kelarutan antibodi dalam air. Ikatan disulfida khusus antara CDR 1 dan CDR 3 meningkatkan stabilitas antibodi di bawah tekanan tinggi, suhu tinggi, denaturant, dan kondisi lainnya, yang bermanfaat untuk produksi dan pengawetan nanobodi, serta menciptakan kemungkinan metode pemberian baru.