Mælingarpallur fyrir skyldleika

Alpha Lifetech, sem byggir á Octet og Biacore-T2000 kerfum, getur veitt áreiðanlegar þjónustur við að ákvarða sækni. Við getum veitt sækniákvörðun fyrir fjölmörg sýni, svo sem mótefni, frumur, prótein, smásameindir o.s.frv. Til eru ýmsar aðferðir til að ákvarða sækni, þar á meðal mæling á yfirborðsplasmónóm (SPR) og mæling á sækni með líflagsinterferens (BLI).

Alpha Lifetech býður upp á faglegan og nákvæman vettvang fyrir sækniákvörðun sem sameinar ELISA og sækniákvörðun og veitir viðskiptavinum um allan heim faglegar, skilvirkar, hraðar og nákvæmar niðurstöður í sækniákvörðun. Við bjóðum viðskiptavinum tvær aðferðir til að velja úr: Hraða sækniákvörðun og nákvæma sækniákvörðun. Hraða sækniákvörðun er ákvörðun á einum styrk, en nákvæm sækniákvörðun getur mælt sækni mismunandi styrkja. Notað til rannsókna á víxlverkunum milli ýmissa smásameindasambanda, peptíða, próteina, oligonúkleótíða og oligómera, svo og lípíða, bakteríufaga, veira og frumna. Sækniákvörðunarvettvangurinn getur lagt grunn að lyfjaprófunum og skimun fyrir sækni, mótefnauppgötvun og auðveldað síðari rannsóknir.

Inngangur að bindingarskyldleika

Sækni er mikilvæg við mat á millisameindavíxlverkunum, sækniprófum fyrir lyf og lyfjaskimun. Millisameindavíxlverkunum má lýsa með jöfnum: L + R = LR, þar sem L táknar frjálsa bindla, R táknar óbundna viðtaka og LR táknar bundna bindla-viðtaka fléttur. Bindingarviðbrögð skilgreina millisameindavíxlverkanir, þar sem kraftmikil skipti eiga sér stað milli bundinna og óbundinna ástönda meðan á viðbrögðunum stendur þar til jafnvægi er náð. Þetta má lýsa með tveimur hraðastuðlum, Kon (bindingarhraðastuðull) og Koff (sundrunarhraðastuðull), viðbragðsins. Kd gildið, sem er gagnkvæmt bindingarstuðullinn (Ka), er Koff/Kon, mikilvægur fasti fyrir sækni viðbragða. Þess vegna, því þéttari sem bindingin er milli tveggja sameinda, því meiri er sæknin. Því lægra sem Kd gildið er, því öfugt. Þessa jöfnu má tákna sem S-laga feril á hálf-lógaritmískum grafi, með bindlaþéttni á x-ásnum (á lógaritmískum kvarðaásnum) og brotmörkum á y-ásnum. Strikamerkið táknar styrk bindils við Kd (1 nM) með 0,5 bindingarhlutfalli.

Mynd 1: Sigmoidal bindingarkúrfa fyrir mismunandi styrk bindils sem er bundinn við frumuyfirborðsviðtaka. (Heimild: Hunter SA, Cochran JR. Frumubindandi prófanir til að ákvarða sækni prótein-prótein víxlverkunar: Tækni og atriði sem þarf að hafa í huga.)

Aðferðir til að ákvarða skyldleika

ELISA bindingarpróf

Þessi aðferð, sem er mikið notuð til að rannsaka sækni mótefna, byggir á ELISA aðferðinni, sem einkennist af þægindum, hraða, einfaldleika, mikilli næmni og sterkri sértækni. Hún getur notað lítið magn af hvarfefnum (þ.e. mótefnum og mótefnavaka) og mælt sækni mótefna án þess að þörf sé á hreinsunarhvarfefnum. Með því að festa mótefnavakann á föstu yfirborði og greina hann með aðalmótefni, hvarfast merkta aukamótefnið við aðalmótefnið til að lesa og greina gögnin í ELISA lesara (ensímtengdri ónæmisbælandi greiningu).

Mynd 2: ELISA-lík próf til að meta bindingu peptíðanna sem hönnuð eru við markmið sín. (Heimild: Hajikarimlou, Maryam, o.fl., 2022. Tölvuaðferð til að hanna peptíð sem greina yfirborðsprótein S á SARS-CoV-2 hratt.)

SPR-bindingarpróf fyrir yfirborðsplasmónóm (Surface Plasmon Resonance)

SPR-tækni greinir aðallega breytingar á ljósbrotsstuðli. Með hjálp hefðbundinna sjónrænna fyrirbæra og ljósóms er hægt að smíða líffræðilega greiningartækni fyrir víxlverkun milli líffræðilegra sameinda til að greina víxlverkun milli bindla og greiniefna á líffræðilegum skynjunarflögum. Hægt er að fá sértæk merki um bindingu og víxlverkun milli líffræðilegra sameinda með því að fylgjast með breytilegum breytingum á SPR-hornum meðan á líffræðilegum viðbrögðum stendur.

Mynd 3: Greining á yfirborðsplasmónómunar (SPR) á H10/AGR2 bindingu. (Heimild: Garri, Carolina, o.fl., 2018. Auðkenning, einkenni og notkun nýs peptíðs gegn fremri stigulshliðstæðu 2 (AGR2).)

Bindingarpróf fyrir lífræna lagsröskun (BLI)

Tækni til að greina truflanir á líffilmu er merkingarlaus, rauntíma eftirlitstækni sem aðallega er notuð til ítarlegrar megindlegrar greiningar á milliverkunum milli sameinda og ákvörðunar á próteinþéttni. Þessi tækni notar lífskynjara sem byggir á mæli til að greina beint breytingar á þykkt líffilmunnar á sýninu. Með því að greina breytingar á tilfærslu truflunarrófsins er binding og sundrun milli lífsameinda sem hafa samskipti á yfirborði skynjarans greind og rauntíma tilfærsla (nm) truflunarrófsins er sýnd.

Mynd 4: BLI-prófun (biolayer interferometry) milli aLDRG og kítínólígósakkaríða. (Heimild: Li, Bing, 2023. Einkenni samanburðar umritunar milli rhizomorphs og hyphae af Armillaria sp. 541 sem taka þátt í sveppasamlífi með áherslu á LysM lén.)

Samanburður á BLI og SPR tækni

Nafn tækni	BLI (Bíólags-interferómetry)	SPR (yfirborðsplasmónóm)
Meginregla	Mælir breytingar á truflunarmynstri endurkastaðs ljóss á yfirborði skynjarans og greinir sameindavíxlverkanir í gegnum breytingar á ljósþykkt á líflaginu. Það veitir rauntíma bindingarkúrfu (bein mæling).	Mælir sameindavíxlverkanir með því að greina breytingar á merkjum í ljósbrotsstuðlinum nálægt yfirborði skynjaraflísins (gerist þegar ljós hefur samskipti við tengifleti gulls og gler, sem veldur breytingum á ljósbrotsstuðlinum). Gögnin endurspeglast sem breytingar á ómsveifluhorninu (óbein mæling).
Framleiðandi	Sartorius	GE
Hljóðfæri	ForteBio líffræðilegir skynjarar	Opna SPR tækið
Kerfi	ForteBio Octet kerfið (fyrir greiningu á sameindavíxlverkun)	TraceDrawer (þróað af Ridgeview Instruments, Svíþjóð)
Kostir	1. Víðtæk samhæfni sýna, framúrskarandi stöðugleiki, sérstaklega til að greina litlar sameindir (sérstakar kröfur um hreinleika sýna og stuðpúðaskilyrði eru ekki eins strangar). SSA flísar eru hagkvæmar fyrir bindingarrannsóknir. 2. Hraðari afköst og styttri tilraunatími samanborið við SPR.	1. Lengri þróunarsaga, sem býður upp á meiri næmni í samanburði við BLI. 2. Meiri nákvæmni og traustleiki fyrir tiltekin forrit, svo sem að greina sjaldgæf eða verðmæt prótein með meiri sækni og sértækni.
Ókostir	1. Nákvæmni gagna er örlítið lægri samanborið við SPR. 2. Krefst vandlegrar viðhalds á tækinu. 3. Kostnaður við SSA flís er tiltölulega hár.	1. Stöðulausnir til að greina mjög litlar sameindir geta verið krefjandi, sem eykur hættuna á að greiningin mistakist. 2. Flögur eru almennt dýrari en þær sem notaðar eru í BLI. 3. Uppgufun sýna við langvarandi tilraunir getur verið vandamál.
Tegund flísar	SSA flís	NTA flís

Umfang skyldleikamælinga

Sækniákvörðun getur falið í sér mótefnavaka-mótefni (sterkt mótefnavaka-mótefni, veikt mótefnavaka-mótefni), prótein-prótein, prótein-peptíð, prótein-smásameind og prótein-DNA/RNA (aptamer). Þegar KD er mælt er nauðsynlegt að vita einn af mólþéttnunum. Þegar litlar sameindir bindast getur mólþyngd einans ekki verið minni en 150 dalton.

Tegund	Gildissvið	Varúðarráðstafanir
1. Mótefnisvaka	10^-6 til 10^-12	Kd-gildi flestra mótefna eru á bilinu 10^-6-10^-7 til 10^-9. Almennt er talið að mótefni með mikla sækni séu innan við 10^-9, en mótefni með mikla sækni séu innan við 10^-12.
2. Prótein - Smásameindir	10^-4 til 10^-5	KD lítilla sameinda og próteina er á milli 10^-4 og 10^-5, en 10^-3 og 10^-7 eru eðlileg og geta ekki náð 10^-10. Samgildar litlar sameindir geta náð 10^-10.
3. Avídín-Bíótín	10^-14	Sækni getur auðveldlega gengist undir ósértæka bindingu og hægt er að nota streptavíðín eða afglýkósýleraða sækni.
4. DNA-prótein	10^-8 til 10^-10	Hágæða og heilt DNA; gætið þess að koma í veg fyrir áhrif rafgreiningar.

Kröfur um sýni til að ákvarða sækni

Dæmi	Kröfur
1. Stórt sameindasýni	Prótein > 50 µg, mótefni > 100 µg, bíótínýlerað prótein > 200 µg; prótein án bíótíns > 2 mg, hreinleikakröfur > 90%, stuðpúðalausn: PBS, HEPBS. Má ekki innihalda imídasólhópa; gæðaeftirlit er nauðsynlegt.
2. Smásameindasýni	Magn >1 mg, duft eða vökvi, vökvinn þarf að vera leysanlegur í vatni eða DMSO. Reynið að innihalda ekki glýseról, imídasól, trehalósa eða önnur sölt; reynið að forðast hvarfefni með amínóhópum eins og Tris í stuðpúðanum, yfirleitt PBS, HEPPS, o.s.frv. án lífrænna hvarfefna.

Kostir mælingapalls fyrir skyldleika

Greining á mörgum sýnum

Alpha Lifetech getur framkvæmt sækniprófanir fyrir ýmis sýni, þar á meðal mótefni, frumur, prótein og aðrar lífsameindir.

Þroskaður tæknivettvangur

Við höfum háþróaða tækni eins og spr-bindingarpróf, bli-bindingarpróf og elisa-bindingarpróf.

Sveigjanlegt verkefnaval

Viðskiptavinir geta valið á milli hraðrar sækniákvörðunar og nákvæmrar sækniákvörðunar.

Niðurstöður með mikilli nákvæmni

Faglegt tækniteymi okkar getur tryggt skilvirkar, nákvæmar og áreiðanlegar niðurstöður skyldleikaákvörðunar.

DæmisagaMÁLI

BLI hraðpróf fyrir sækni mótefna og aptamer próf fyrir sækni

Fangið bíótínýleruð aptamera með SA-sértækni og leysið þau upp. Leysið sýnið upp og þynnið það í fastan styrk, storknið mælikvarðasértæku fanguðu Target 1-5 aptamera og bindið sýninu eftir merkjamettun. Bætið þeim síðan við 96 hols plötu.

Mynd 5: Dreifing greiningarstaða fyrir 96-holu plötusýni. B vísar til stuðpúðans sem er notaður til að jafna og aðskilja skynjara. L: Bíótín Target 1-5 aptamerar, 221: Sýni.

Gætið þess að bora til að tryggja stöðugleika og nákvæmni gagnanna og stillið viðeigandi forrit til að fá niðurstöðurnar:

Mynd 6: Skýringarmynd af víxlverkun milli aptamera Target 1, 2 og 3 og sýna. (CH1 \3 \5 táknar merki og gögn um víxlverkun milli storknaðs Target 1 \2 \3 aptamera rannsakanda og sýnisins.)

Mynd 7: Mynd af víxlverkunaraðlögun milli aptamera Target 4 og 5 og sýna. (CH 1 \ 3 táknar merki og gögn um víxlverkun milli storknaðs Target 4 \ 5 aptamera rannsakanda og sýnisins.)

niðurstöður sýna

Eftirfarandi niðurstöður fengust: Sækni millistykkis Target 1 við sýnið eftir aðlögun var 9,41 ^ -8; sækni millistykkis Target 2 við sýnið eftir aðlögun er 8,32 ^ -8; sækni millistykkis Target 3 við sýnið eftir aðlögun er 8,64 ^ -8; sækni millistykkis Target 4 við sýnið eftir aðlögun er 3,70 ^ -8; sækni millistykkis Target 5 við sýnið eftir aðlögun er 3,01 ^ -8.

Ef þú hefur einhverjar spurningar, vinsamlegast hafðu samband við okkur hvenær sem er.

Leave Your Message

Valin þjónusta

0102