Dýrabólusetningarvettvangur

Dýrauppspretta Alpha Lifetech er skýr, með skoðunar- og sóttkvíarleyfi, skýrum erfðafræðilegum bakgrunni, skýrri bólusetningartíðni og nákvæmum skrám yfir bólusetningartímabil, sem veitir þægilega þjónustu við mótefnaframleiðslu. Það bólusetir aðallega úlfalda (Alpakka Liama og úlfalda) og leggur þar með grunninn að nanólíkamaframleiðslu. Að auki getur það einnig bólusett venjuleg dýr (eins og nýsjálensk hvít kanínur, mýs og önnur dýr) í samræmi við bólusetningartíðni og ónæmingarkröfur viðskiptavina, dregið þau út og einangrað í PBMC og notað þau í síðari tilraunir (eins og þróun einstofna mótefna, fjölstofna mótefna o.s.frv.). Viðskiptavinir geta útvegað sín eigin ónæmisvaka og við munum framkvæma strangt gæðaeftirlit með þeim. Ef viðskiptavinir útvega veiruónæmisvaka þarf að óvirkja þá og við munum framkvæma óvirkjunarprófanir til að tryggja öryggi. Á sama tíma getum við einnig aðlagað samsvarandi ónæmisvaka eftir þörfum viðskiptavina.

Kynning á bólusetningu dýra

Þegar mótefni úr dýrum eru framleidd, svo sem einstofna mótefni, fjölstofna mótefni og nanólíköm, er fyrsta skrefið að ónæmisvæða dýrin og fá samsvarandi B-frumur, mótefni eða PBMC til að undirbúa frekari mótefnaframleiðslu, efla grunnvísindarannsóknir, þróa klínísk greiningartól og auðvelda uppgötvun og þróun nýrra lyfja. Úlfaldar, alpakkar, Liama og aðrir úlfaldar af úlfaldaætt geta framleitt nanólíkamasöfn (eitt léns mótefni) með blóðsöfnun ónæmiskerfisins og útdrætti PBMC. Hægt er að ónæmisvæða kanínur og önnur dýr og draga mótefni úr líkama þeirra. Eftir hreinsun er hægt að nota þau til að framleiða fjölstofna mótefni. Mýs, rottur o.s.frv. er hægt að nota til að framleiða einstofna mótefni með því að sameina ónæmisútdrættar B-frumur við mergæxlisfrumur. Fyrir ónæmisvæðingu skal huga að 3R meginreglunum (skiptingu, minnkun, hreinsun), sem geta dregið verulega úr fjölda dýra sem notuð eru í nauðsynlegt lágmark, bætt tilraunaaðferðir og lágmarkað þjáningar dýra. Einnig verður að fylgja réttri tilraunahönnun, vali á viðeigandi mótefnum og ströngum staðfestingaraðferðum.

Flokkun ónæmisvaka - framleiðsla nanólíkama

Tegundir ónæmisvaka	Dæmi	Undirbúningur ónæmisvaka	Athugasemdir
Próteinónæmisvakar	Ensím, prótein, bakteríueiturefni og önnur efni	Veldu mismunandi próteintjáningarkerfi: E. coli, ger, skordýrafrumur, spendýrafrumur og frumulaus kerfi	Gefðu gaum að þáttum eins og hitastigi, tíma, sýrustigi og innfelldum hlutum sem hafa áhrif á próteinframleiðslu.
Kjarnsýruónæmisvakar	DNA, RNA	DNA ónæmisvaka: Smíða plasmíð DNA, klóna hentuga tjáningarvigra fyrir markgen, rækta frumur til að magna plasmíð DNA og vinna út hreint plasmíð DNA. RNA ónæmisvaka: Þarf að bæta við hattbyggingu og PolyA hala til að koma í veg fyrir niðurbrot	Við undirbúning DNA-ónæmisvaka skal gæta að viðeigandi hýsilfrumum og við undirbúning RNA-ónæmisvaka skal gæta að því að koma í veg fyrir niðurbrot RNA.
Veiruónæmisvaka	Bóluefni sem er óvirkjað með heilum veirum, bóluefni gegn undireiningum, veirubóluefni sem er vektorbóluefni (adenóveira, lentiveira o.s.frv.), mRAN bóluefni.	Þegar bóluefni gegn heilum veirum er búið til er veiran fyrst óvirkjuð til að auka öryggi. Eiturefnaprófanir eru notaðar til að ákvarða hvort óvirkjunin sé fullkomin. Undireiningabóluefni þurfa aðeins yfirborðsprótein veirunnar sem mótefnavaka og þarf að taka tillit til ónæmisvirkni.	Bæta þarf við hjálparefnum til að veita ónæmisáhrif, huga skal að veirunni sem þarf að óvirkja, viðeigandi veirutítra er nauðsynlegur til að tryggja ónæmisáhrif og öryggi undirbúningsferlisins ætti að vera strangt stýrt.

Ónæmingarferli dýra eða tímalína

Val á dýrum og undirbúningur mótefnavaka

Val á dýrum: Veljið alpakka á réttum aldri og með heilbrigða líkamsbyggingu úr heilbrigðum hópum og framkvæmið blóðprufur og sjúkdómsskimun til að tryggja að engir smitsjúkdómar eða önnur heilsufarsvandamál séu til staðar.

Undirbúningur ónæmisvaka: Ónæmisvakar eru lykillinn að því að örva ónæmissvörun og krefjast þess að viðeigandi prótein, peptíð eða önnur hentug efni séu valin út frá kröfum markmótefnisins.

Hægt er að bólusetja alpakka með 1-3 mótefnavökum samtímis, með heildarmagni mótefnavaka upp á 1-2 mg í hverri bólusetningu og rúmmáli minna en 2 ml. Fyrir bólusetningu eru mótefnavakinn og hjálparefnið blandað saman í 1:1 hlutfalli til að mynda einsleita blöndu, sem er geymd við 4 ℃.

Ónæmisfræðileg alpakka

Skráið eyranúmerið á alpakka og hefjið bólusetningartilraunina. Sprautið í eitla nálægt hálsi alpakka báðum megin, með tveimur punktum hvoru megin og sprautið um það bil 0,4 ml af fleytu mótefnavaka á hverjum punkti. Eftir bólusetningu skal fylgjast með í hálftíma til að staðfesta að alpakka sýnir engin óþægindi. Bólusetning ætti að fara fram á tveggja vikna fresti, með að minnsta kosti fjórum bólusetningum.

Blóðsöfnun

Eftir fjórar bólusetningar í 5-7 daga skal safna 50 ml af blóði úr hálsæð alpakka.

Aðskilnaður sermis

Blóðsýni eru tekin til ónæmismats fyrir hverja mótefnavakabólusetningu, þar sem 5 ml af blóði eru teknir í hvert skipti; Sama dag var blóðið skilvindað við 400 xg í 30 mínútur með forkældri 25 ℃ skilvindu. Efra lagið af sermi var aðskilið og geymt til síðari mótefnamælinga.

Aðskildar eitilfrumur

Fyrst skal bæta 15 ml af frumuskiljunarlausn út í, síðan hægt og rólega 15 ml af blóði í 50 ml skilvinduglas. Gætið varúðar og hægt þegar blóði er bætt út í til að koma í veg fyrir að blóð og aðskiljunarlausn blandist saman. Forkælið skilvinduna við 25 ℃, skilvindið við 400 xg í 30 mínútur og geymið efri serminn í nýju skilvinduglasi við -80 ℃. Notið pípettu til að sjúga miðhluta bómullarlaga efri lags ónæmisfrumnanna út í nýtt 50 ml skilvinduglas. Bætið 10 ml af PBS stuðpúða við stofuhita í hvert glas, skilvindið við 25 ℃ og 400 xg í 20 mínútur. Fjarlægið ofanvökvann, bætið 5 ml af PBS stuðpúða við stofuhita í hvert glas, blandið varlega vel saman, reiknað út fjölda frumna með blóðfrumumæli og skilvindið síðan við 25 ℃ og 400 xg í 20 mínútur. Fjarlægið ofanfljótandi vökvann og leysið upp eitilfrumurnar sem fengust með RNAiso Plus, miðað við fjölda frumna, til að fá 10 ^ 7/mL frumulýsat, sem er geymt við -80 ℃.

Mynd 1: Skýringarmynd af mismunandi aðferðum til að finna mótefni og þeim tilraunastigum sem um ræðir. (Heimild myndar: Laustsen, Andreas H. o.fl.)

Viðskiptavinir veita strangt gæðaeftirlit með ónæmisvökum

Tegundir ónæmisvaka	Kröfur	Gæðaeftirlitsaðferð
Peptíð / smásameindasýni	Upplausnarskilyrði (aðallega eftir því hvort þau muni gera faga óvirka), sameindabygging/peptíðröð, myndunarskýrsla (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS greining
Próteinsýni	SDS-PAGE/WB, blöndunarskilyrði, stuðpúði, upplýsingar um merkingu, heildarmagn (20-50µg), styrkur, hreinleiki o.s.frv.	Öryggisblaðsíða/WB
Frumusýni	Frumugerð (frumfrumur/genbreyttar frumur), frumuform (ferskar/frosnar, uppþíddar), vaxtartegund (viðloðandi/svifleyg), kröfur um ræktunarmiðil, fjöldi frumna sem gefnar eru, fjöldi frumna sem gefnar eru, erfðabreyttar frumur til að tryggja stöðuga tjáningu skimunarmarkmiða (viðskiptavinur samsvarandi frummótefni), frystar, uppþíddar frumur til að ákvarða endurheimtarhlutfall	Aðallega miðað á erfðabreyttar frumur, með því að nota frummótefni frá viðskiptavini til ELISA auðkenningar á marktjáningu (fyrirtækið okkar útvegar HRP auka mótefni), flæðisfrumugreiningu (fyrirtækið okkar getur útvegað flúrljómandi auka mótefni).

Hver eru notkunarmöguleikar dýraónæmis?

+

Hægt er að framleiða fjölstofna mótefni með ónæmingu dýra, einstofna mótefni er hægt að framleiða með því að sameina B-frumur við mergæxlisfrumur og hægt er að vinna PBMC úr úlfaldauppruna (alpakka, úlfalda, alpakka o.s.frv.) til að framleiða ýmsar mótefnabrotaform eins og nanólíkaminn, Fab-brot, scFv-mótefnabrot o.s.frv.
Hvaða varúðarráðstafanir eru gerðar til að tryggja ónæmi dýra?

+

Til að framleiða nanómótefni fyrir dýr af úlfaldaætt þarf 5-6 bólusetningar. Blóðsýni ættu að vera tekin sem samanburðarpróf fyrir bólusetningu, með tveggja vikna millibili á milli hverrar bólusetningar. Eftir fjórðu bólusetningu ætti að taka jákvætt blóð og neikvætt blóð úr óbólusettu blóði til ELISA prófs til að ákvarða títerinn. Ef títerinn er undir 10 ^ 6 ætti að auka fjölda bólusetninga þar til títerinn nær viðeigandi stigi. Fyrir aðrar dýrabólusetningar eins og kanínubólusetningu (besti eða algengi próteinmótefnavakastig fyrir kanínubólusetningu er 50-1000 µg), músabólusetningu (besti eða algengi próteinmótefnavakastig fyrir músabólusetningu er 5-50 µg, sem krefst 10^6 frumna ef um frumu er að ræða, og 10-50 µg fyrir kjarnsýrur eða kolvetni), geitabólusetningu (besti eða algengi próteinmótefnavakastig fyrir geitabólusetningu er 250-5000 µg) o.s.frv., skal huga að skömmtum, öryggi og virkni ónæmisvaka.
Hvernig á að velja ónæm dýr?

+

Eftir því hvaða mótefni viðskiptavinurinn þarfnast, ef þú þarft að framleiða nanólíkneski eða önnur mótefnabrot, geturðu valið dýr sem eru af úlfaldaætt (úlfalda, alpakka, alpakka) til ónæmingar. Ef þú þarft að framleiða einstofna eða fjölstofna mótefni þarftu að velja samsvarandi tegund út frá magni sermis, mótefnavaka og mótefnavakauppsprettu. Hámarks sermismagn fyrir kanínur er 500 ml, sem krefst lítils magns af mótefnavaka og er aðalvalkosturinn til að framleiða fjölstofna mótefni. Hámarks sermismagn fyrir mýs er 2 ml og hámarks sermismagn fyrir rottur er 20 ml, sem er venjulega besti kosturinn fyrir einstofna mótefni. Mótefni sem eru framleidd úr geitum hafa mikla sækni og Alpha Lifetech getur sérsniðið sérsniðna ónæmingaráætlun fyrir þig í samræmi við þínar kröfur.
Þarf að nota mótefnavaka ásamt hjálparefnum? Hvernig á að velja?

+

Til eru tvær gerðir af hjálparefnum: olíubundin og vatnsbundin. Skynsamleg notkun hjálparefna er mikilvæg til að framkalla sterk mótefnasvörun við leysanlegum mótefnavökum. Langvarandi losun hjálparefna þýðir að hægt er að nota færri skammta af mótefnavökum og mótefnasvörunin er lengri. Fyrsta inndælingin ætti að vera notuð í samsetningu við hjálparefni. Almennt er mælt með því að nota Freunds hjálparefni þegar magn ónæmisvaka er lítið.
Varúðarráðstafanir við bólusetningu alpakka?

+

(1) Val á alpakka og mótefnavaka ónæmis eru lykillinn að vel heppnaðri ónæmisaðgerð. Það er ekki ráðlegt að velja vel hlutfallslegan úlfalda. Hreinleiki og rétt bygging ónæmisvaka eru lykilatriði til að skima fyrir hentugum mótefnum fyrir síðari notkun eftir ónæmingu með alpökkum. Hreinleiki próteinmótefnavaka er almennt ekki minni en 90%.

(2) Aðskilnaður eitilfrumna: Tímabær frumuskilnaður getur á áhrifaríkan hátt komið í veg fyrir blóðrauða eftir blóðsöfnun til að ná sem bestum aðskilnaðaráhrifum.

(3) Ónæmishringrásin getur haft áhrif á ónæmissvörunina: 1-2 vikna ónæmisbil gerir alpökkum kleift að hafa gott ónæmissvörun við flestum mótefnavökum.

sjálfstætt þróað hjálparefni

Einstök formúla hjálparefnis okkar hefur verið fínstillt fyrir ónæmiskerfi alpakka og veitir meiri virkni og sértækni en hefðbundin hjálparefni.

Bólusetningarafhending
staðall

Við lofum að ljúka bólusetningu innan tilgreinds tíma, útvega sermi með háum títra og skrá hvert skref með ítarlegum skýrslum.

Gæðaeftirlit verkefnis

Hvert verkefni gengst undir strangar gæðaeftirlitsferla til að tryggja afhendingu mótefna sem uppfylla strangar kröfur til viðskiptavina.

greinilegaAlpakkaBakgrunnur

Við höfum heilbrigðan alpakkastofn sem styður við ýmis bólusetningaráætlanir.

Ef þú hefur einhverjar spurningar, vinsamlegast hafðu samband við okkur hvenær sem er.

Leave Your Message

Valin þjónusta

0102