Þróunarvettvangur fyrir mótefnisvæðingu

Manngerð mótefni valda litlum eða engum viðbrögðum frá ónæmiskerfi manna. Samkvæmt Cognitive Market Research er heimsmarkaðurinn fyrir manngerð mótefna 92,5 milljónir Bandaríkjadala árið 2024 og mun stækka um 13,00% samsettan árlegan vöxt (CAGR) frá 2024 til 2031. Alpha Lifetech býr yfir þroskuðum vettvangi fyrir manngerð mótefna, með yfir 98% velgengnihlutfalli fyrir manngerð mótefni. Við höfum margar manngerðingaraðferðir, þar á meðal CDR-ígræðslu, SDR-ígræðslu, keðjubreytingu, fagasýningu o.s.frv., sem hægt er að velja eftir tilraunaþörfum þínum. Við getum ekki aðeins veitt manngerð mótefna frá mörgum tegundum, svo sem músum, kanínum, alpökkum, úlföldum o.s.frv., heldur einnig manngerð mótefna í ýmsum myndum, svo sem scFv, Fab og nanólíkömum. Við höfum fagfólk til að veita mótefnaframleiðslu, hreinsun og staðfestingarþjónustu, þar á meðal framleiðslu á einstofna músamótefnum, framleiðslu á kímærum mótefnum, tjáningu og hreinsun manngerðra mótefna, og einkenningu og greiningu á manngerðum mótefnum. Með mikilli velgengni, miklum hreinleika og lágri ónæmissvörun tryggjum við framleiðslu á manngerðum mótefnum.

Inngangur að manngerð mótefna

Meðferð með einstofna mótefnum getur verið notuð til að meðhöndla sjálfsofnæmissjúkdóma, krabbamein og aðra sjúkdóma. Einstofna mótefni eru framleidd með því að bólusetja mús eða önnur dýr. Þegar þau eru notuð til að meðhöndla sjúkdóma á síðari stigum framleiðslu einstofna mótefna er ekki hægt að hunsa ónæmissvörun mótefna sem ekki eru úr mönnum. Meginreglan um mannvæðingu er að samþætta leifar úr ramma sem ekki eru úr mönnum, svo sem breytileg viðbótarákvarðandi svæði (CDR), í ramma manna, og framleiða þannig raðir sem halda upprunalegum mótefnaeiginleikum en koma í veg fyrir ónæmissvörun. Ónæmisvæðing músa og síðari mannvæðing músaröðar eru tvær af helstu leiðunum til að uppgötva meðferðarmótefni, sem fara aðallega í gegnum nokkur stig: framleiðslu músamótefna, kímeriseringu einstofna mótefna, kímerískt músamannlegt einstofna mótefni og þróunarferli fullkomlega mannvædds einstofna mótefnis. Rannsóknirnar sem nú standa yfir fela aðallega í sér erfðabreyttar mýs (flutning gena úr B-frumum manna yfir í mýs), háafköstaskimun með ger- eða fagaskjátækni, CDR-ígræðslu (þar sem foreldrar-CDR eru settir inn í raðir manna), ígræðslusértækar ákvörðunarleifar (SDR), rammabreytingar og aðrar aðferðir.

Mynd 1: Skýringarmynd af manngerð mótefna úr músamótefnum (grænum lénum) í fullkomlega mannamótefni.

Aðferð til að gera mótefni manngerða

CDR ígræðslu

CDR-ígræðsla er framkvæmd með spendýratjáningarkerfi sem byggir á erfðatækni í endurröðun DNA og helstu skrefin eru:

(1) Þróa samsvarandi mótefni í músum (eða öðrum uppruna en mönnum), einangra mótefni sem umrita DNA og klóna þau í vektora til raðgreiningar (eða framkvæma beint raðgreiningu á einstökum frumum).

(2) Til að ákvarða DNA-röðina sem samsvarar mótefnis-CDR og til að ákvarða sértækni markbindingar;

(3) Veljið rammasvæðið fyrir mann (FR) til að ígræða CDR-prótein sem ekki eru úr mönnum og smíða nýtt mótefnagen.

(4) Framkvæma þrívíddargreiningu á átökum milli CDR-próteina sem ekki eru úr mönnum og FR-próteina úr mönnum til að mynda endurheimtarstökkbreytingar til að koma í veg fyrir að lykkjunni verði stöðugri og komið í veg fyrir tap á sækni eða byggingarheilleika lokamótefnisins sem er búið til úr mönnum.

Mynd 2: Skýringarmynd af ígræðslu á komplementaritetsákvörðunarsvæði (CDR).

Rammabreyting

Rammabreyting byggir á fagasýningartækni og skimunartækni fagasafna til að fá mótefni með mikilli sækni. Ólígónúkleótíð sem kóða fyrir þungkeðjuramma mannamótefna eru notuð sem sniðmát, CDR-svæði eru kóðuð sem praimerar og PCR-magnun er framkvæmd til að denatúrera PCR-afurðina til að fá einþátta DNA. Einþátta DNA úr VL og VH genum sem hreinsuð eru með streptavíðíni er endurgert á vektora með því að nota T4 DNA lígasa og takmörkunarensím, ræktað með bakteríufögum og magnað með bakteríufögum, og fagasýningarsafn er smíðað. Þrjár umferðir af skimun með samsvarandi mótefnavökum eru framkvæmdar og jákvæðir klónar eru að lokum staðfestir með ELISA og öðrum aðferðum.

Mynd 3: Skýringarmynd af aðferðum til að manna uppbyggingu á CDR-ígræðslu (complementarity determining region) og FR-uppstokkun (framework shuffling). (A) Helsta aðferð CDR-ígræðslu. (B) Helsta ferli FR-uppstokkunar. (Heimild: Wang Yongmei o.fl., Samanburður á „rammabreytingu“ og „CDR-ígræðslu“ við mannvæðingu PD-1 músamótefnis.)

Fögasýning

Framleiðsla á manngerðum mótefnum byggist á aðferðinni þar sem sértæk mótefni eru birt á yfirborði bakteríufága, aðallega smíðuð með fögasöfnum úr mönnum. Uppruni bókasafnsins eru PBMC einangraðar úr útlægu blóði manna til að smíða fögasöfn, sem samsvarandi raðir eru skimaðar úr. Þessi röð hefur alla mannaröðina, en mótefnin sem framleidd eru eru mótefnabrot, svo sem scFv, Fab og nanólíkami.

Verkflæði fyrir þjónustu við manngerð mótefna

Þjónustuskref	QC staðall	Tímalína
Einangrun mótefna	Hreinleiki >95%	1-2 vikur
Raðgreining	Nákvæm auðkenning á raðgreiningum sem ekki eru af mannavöldum	1 viku
CDR-ígræðsla og rammaígræðsla	Vel heppnuð samþætting og tjáning	2-3 vikur
Tjáning og hreinsun	Mikil ávöxtun og hreinleiki	2-3 vikur
Virkniprófun	Mat á skyldleika og sértækni	1 viku