Þjónusta við greiningu á einkennum aptamera

Alpha Lifetech hefur veitt þjónustu tengda aptamerum í mörg ár og getur nú boðið upp á alhliða þróunaráætlanir fyrir aptamera, svo sem aptamer-myndun, SELEX-skimun, háafköstaröðun og aptamer-bestun og einkenningu. Byggt á kostum SELEX-aðferðarinnar við skimun aptamera hefur Alpha Lifetech útvíkkað fleiri aðferðir til skimunar á aptamerum.

Inngangur að greiningu á aptamerum

Staðfesting á skyldleika

Bætt sækni aptamersins var staðfest með viðeigandi aðferðum í aptamer bindingarprófi. Dæmi eru meðal annars ísótermísk títrunarhitamæling (ITC), flæðisfrumumæling (FCM) og yfirborðsplasmónómsveifla (SPR), örflæðifræði o.s.frv. Sækni aptamersins er venjulega tjáð með sundrunarstuðli (KD), eðlisfræðilegri stærð sem notuð er til að mæla stig sameindasundrunar í afturkræfum viðbrögðum. Því lægra sem KD gildið er, því stöðugra er fléttan, það er að segja, því sterkari er sæknin; Aftur á móti, því stærra sem KD gildið er, því óstöðugra er fléttan og því veikari er sæknin. Þetta skref er lykillinn að því að bera kennsl á frammistöðu aptamersins, tryggja þroska sækni aptamersins og geta bundist marksameindinni með mikilli sækni og sértækni í hagnýtum tilgangi.

Mynd 1. Ferli þroskunar aptamer-sækni. Heimild:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Staðfesting virkni

Auk þess að sannreyna sækni þarf að sannreyna virkni aptamersins. Þetta felur í sér að sannreyna stöðugleika aptamersins, sértækni og víxlverkun við aðrar sameindir í tilteknu umhverfi. Niðurstöður virknissannreynslunnar munu hafa bein áhrif á gildi aptamera í vísindarannsóknum og iðnaðarnotkun.

Sérstök staðfesting

Samkeppnistilraun: Hæfni aptamersins til að bindast ákveðnu skotmarki er metin í návist annarra svipaðra skotmarka. Ef aptamerið getur tengst marksameindinni sértækt án truflana frá öðrum sameindum, bendir það til þess að það hafi mikla sértækni.

Krossverkunartilraun: Aptamerið er bundið við röð skyldra eða óskyldra skotmarka til að sjá hvort það binst aðeins við ákveðið skotmark, til að staðfesta sértækni þess.

Stöðugleikastaðfesting

Tilraun með niðurbrot núkleasa: Aptamerarnir voru útsettir fyrir mismunandi styrk núkleasa og niðurbrot þeirra var athugað. Með því að bera saman niðurbrotsstig á mismunandi tímapunktum er hægt að meta niðurbrotsgetu aptamersins gegn núkleasa.

Tilraun með hitastigs- og tímastöðugleika: Aptamerinn var settur við mismunandi hitastigs- og tímaskilyrði til að fylgjast með uppbyggingu hans og virkni. Þetta hjálpar til við að ákvarða bestu geymslu- og notkunarskilyrði fyrir aptamera.

Auðkenning líffræðilegrar virkni

Viðeigandi aðferð er venjulega valin í samræmi við sérstakt notkunarmarkmið kjarnsýruaptamersins.

(1) Prófun á sameindastigi: Notkun sameindalíffræðitækni, svo sem gelrafgreiningar, Western blot, o.s.frv., til að greina fléttur sem myndast eftir að aptamerinn sameinast marksameindinni, eða greina breytingar á tjáningarstigi marksameindarinnar af völdum aptamersins.

(2) Prófanir á frumustigi: Með því að nota frumuræktunartækni eru aptamerar ræktaðir með markfrumum til að fylgjast með líffræðilegum breytingum eins og frumugerð, fjölgun og frumudauða og meta líffræðilega virkni aptamera.

(3) Prófanir á dýralíkönum: Í viðeigandi dýralíkönum eru kjarnsýruaptamerar gefnir með inndælingu eða lyfjagjöf og lífeðlisfræðilegir vísar og meinafræðilegar breytingar dýranna eru skoðaðar til að meta líffræðilega virkni og öryggi aptameranna in vivo.