Aptamer rannsóknarþjónusta

Kynning á Aptamer

Aptamerar eru einþátta kjarnsýrusameindir (eins og DNA eða RNA) sem eru skimaðar in vitro úr bókasafni af tilbúnum oligonúkleótíðum með handahófskenndri röð með ferli sem kallast SELEX skimun, sem felur í sér margar umferðir af endurtekinni vali. Helstu þættir aptamera þróunarþjónustu í eigu Alpha Lifetech eru smíði aptamera bókasafna, aptamera SELEX skimun, aptamera SELEX raðgreining, aptamera raðgreining og önnur aptamera greining.

SELEX raðgreining sameinar SELEX skimun aptamer og háafköstaröðgreiningu. Með SELEX raðgreiningu aptamersins er hægt að ákvarða á skilvirkan hátt nákvæma röð aptamersins sem er bundið við skotmarkið, sem veitir grunngögn fyrir síðari greiningu og notkun aptamerraða.

Aptamerar hafa verið mikið notaðir í vísindarannsóknum, sjúkdómsmeðferð, smíði líffræðilegra skynjara, lyfjaþróun og umhverfisvöktun. Hins vegar brotnuðu aptamerarnir sem voru skimaðir in vitro auðveldlega niður in vivo og sýndu jafnvel eituráhrif. Því, eftir að skimaðir aptamerar hafa verið fínstilltir, þarf in vitro greiningu til að meta árangur þróunar aptamera. Í samræmi við mismunandi greiningarþarfir viðskiptavina býður Alpha Lifetech upp á fjölbreyttar aðferðir við greiningu aptamera fyrir viðskiptavini.

Mynd 1 Skýringarmynd af aptamergreiningu. Heimild:Thevendran R, Citartan M. 2022. Prófanir til að meta bindingarhæfni aptamera..

Kynning á Aptamer rannsóknarþjónustunni

Stöðugleikagreining á aptamer

Tilraun með niðurbroti núkleasa

Með því að rækta aptamerið með mismunandi gerðum af núkleösum (eins og DNasa, RNasa o.s.frv.) við ákveðnar aðstæður er niðurbrot aptamersins fylgst með til að meta niðurbrotsþol þess. Þetta er gagnlegt til að ákvarða stöðugleika og endingu aptamersins í hagnýtum tilgangi.

Flúrljómandi merkingaraðferð

Stöðugleiki aptamersins er metinn óbeint með því að merkja flúrljómunarleiðarana á aptamerinu og fylgjast með breytingum á flúrljómunarmerkinu fyrir og eftir bindingu við skotmarkið. Til dæmis, þegar aptamer binst skotmarki, getur lögun þess breyst, sem leiðir til aukinnar eða minnkaðrar flúrljómunar.

Greining á hitastöðugleika

Hitastöðugleiki aptamersins er metinn með því að mæla breytingu á bræðslumarki þess (Tm gildi) við mismunandi hitastig. Því hærra sem bræðslumark aptamersins er, því betri er hitastöðugleiki þess.

Greining á hreyfanlegum stöðugleika

Yfirborðsplasmónómsjá (SPR) og aðrar tæknir voru notaðar til að fylgjast með bindingar- og aftengingarferlinu milli aptamersins og skotmarksins í rauntíma, fá breytur (eins og bindingarhraðastuðul, sundrunarhraðastuðul o.s.frv.), skilja betur víxlverkunarferlið milli aptamersins og skotmarksins og meta hreyfifræðilegan stöðugleika þess.

Greining á burðarvirkni

Röntgenkristallagreining, kjarnorkusegulómunargreining (NMR) og aðrar aðferðir í byggingarlíffræði voru notaðar til að greina þrívíddarbyggingu aptamersins og byggingarstöðugleika þess.

Aptamer sértæk greining

Aptamer bindingarpróf

Sækni er metin með því að framkvæma aptamer bindingarpróf til að mæla bindingarstuðulinn milli aptamersins og marksameindarinnar, svo sem sundrunarstuðulinn Kd. Lægra Kd gildi gefur til kynna meiri sækni. Með aptamer bindingarprófi er hægt að flokka lyf sem hafa mikla bindingargetu og síðan framkvæma frekari lyfjafræðilegar og lyfjafræðilegar rannsóknir.

Tilraun með öfuga skimun

Öfug skimun er skimunaraðferð til að útiloka fljótt ómarkmiðssameindir úr fjölda tilvonandi sameinda. Öfug skimun er hönnuð til að útiloka sameindir sem hafa ekki þennan eiginleika eða virkni. Lykillinn að öfugri skimun er að velja viðeigandi öfugskimunarmerki eða skilyrði sem gera kleift að bera kennsl á og fjarlægja ómarkmiðssameindir meðan á skimunarferlinu stendur. Í þessari tilraun er val á ómarkmiðssameindum mjög mikilvægt. Tryggja skal að ómarkmiðssameindirnar sem valdar eru séu dæmigerðar fyrir efni sem geta truflað aptamerskimun og að hugsanlegir truflandi þættir séu fjallaðir eins vel og mögulegt er.

Tilraun í samkeppnishömlun

Með því að bæta við óhóflegum samkeppnisþáttum (eins og sameindum með svipaða byggingu og marksameindin) við bindikerfi aptamersins og marksameindarinnar sést breyting á bindingargetu aptamersins og marksameindarinnar. Ef geta aptamersins til að bindast marksameindinni minnkar verulega bendir það til þess að aptamerinn hafi mikla sértækni.

Í sumum tilfellum er hægt að nota samkeppnishömlunartilraunir sem hluta af eða sem viðbót við öfugar skimunartilraunir. Til dæmis, í lyfjaskimunarferlinu er hægt að meta getu lyfjasameindarinnar til að bindast markpróteininu með samkeppnishömlunartilraunum og síðan er hægt að nota öfugar skimunartilraunir til að fjarlægja þau efnasambönd sem eru of sterkt bundin við eðlilegar frumur eða vefi.

Frumueituráhrifagreining á aptamer

Til eru fjölbreyttar tilraunaaðferðir til að greina frumueiturverkanir aptamera, sem eru hannaðar til að meta áhrif aptamera á frumulifun, frumufjölgun eða virkni.

Aðferðir	Ítarleg kynning	Kostur	Ókostur
MTT greiningaraðferð	MTT-prófun er aðferð sem byggir á ensímvirkni í hvötberum lifandi frumna. Súksínat dehýdrógenasi í hvötberum lifandi frumna getur dregið úr utanaðkomandi MTT í vatnsóleysanlegan bláfjólubláan kristall Formazan og sett hann í frumuna, en dauðar frumur hafa ekkert slíkt hlutverk. Með því að leysa upp þessa kristalla með dímetýlsúlfoxíði (DMSO) og greina gleypni við ákveðnar bylgjulengdir (eins og 490 nm eða 570 nm) á ensímmæli er hægt að óbeint endurspegla fjölda lifandi frumna og þannig meta frumueituráhrif aptamersins.	Mikil næmni, hagkvæmni og þægindi	Mikið álag, lífræn leysiefni geta valdið skemmdum á frumum; Aðeins er hægt að fá lokaniðurstöður tilrauna og ekki er hægt að skoða allt frumueitrunarferlið
CCK-8 greiningaraðferð	Frumuteljarabúnaður-8 (CCK-8) er mjög næm, ógeislavirk litrófsgreiningaraðferð. CCK-8 inniheldur WST-8, sem er afoxað með dehýdrógenasa í hvatberum lifandi frumna til að framleiða mjög vatnsleysanlegt appelsínugult metýlzan eldsneyti. Magn mezan litarefnis sem myndast er línulega tengt fjölda lifandi frumna og hægt er að endurspegla fjölda lifandi frumna óbeint með því að mæla ljósgleypnigildi Mezan litarefnisins við bylgjulengd 450 nm, til að meta frumueituráhrif aptamersins.	Einföld aðgerð, engin þörf á að þvo frumur, hröð greining, breitt línulegt greiningarsvið, mikil næmi, góð endurtekningarnákvæmni, lítil frumueituráhrif	Hátt verð á hvarfefnum; Stundum er erfitt að segja til um hvort minnkuð gleypni stafar af fækkun lifandi frumna eða minnkaðri virkni frumudehýdrógenasa sjálfs.
LDH greiningaraðferð	LDH (laktat dehýdrógenasi) er ensím sem er stöðugt í umfrymi frumna og þegar frumuhimna skemmist losnar LDH út fyrir frumuna. LDH getur hvatað mjólkursýru til að mynda pýrúvat og hvarfast við INT (tetrazolíumsölt) til að mynda fjólublátt kristallað efni. Með því að mæla gleypni þess við ákveðna bylgjulengd (eins og 490 nm) er hægt að endurspegla umfang frumuskemmda og síðan meta frumueituráhrif aptamersins.	Það endurspeglar beint dánartíðni frumna og hefur minni skaða á frumum og engin geislavirk samsætumengun er til staðar	Þar sem þörf er á að taka frumurnar oft úr ræktunarofninum er aðgerðin flóknari; aðeins er hægt að fá lokaniðurstöður tilraunarinnar og ekki er hægt að skoða allt frumueitrunarferlið.
Rauntíma greining á myndgreiningu lifandi frumna	Með því að nota rauntíma lifandi frumumyndgreiningartæki var tækið sett í ræktunarofn til að fylgjast með og skrá allt frumuvaxtarferlið í rauntíma. Frumueituráhrif aptamera er hægt að meta með því að greina formfræðilegar breytingar og vaxtarferla frumna. Þessi aðferð getur veitt myndbönd og magnbundnar niðurstöður af frumueituráhrifum en haldið frumuvaxtarumhverfinu stöðugu.	Það getur fylgst með frumudrepandi ferlinu í rauntíma, myndgreint án eyðileggingar, dregið úr truflunum og skemmdum á frumum; Bæði myndbands- og magnbundnar niðurstöður eru tiltækar fyrir ítarlega greiningu.	Kostnaður við búnað er hár og krefst faglegrar rekstrarhæfni og gagnagreiningarhæfni.

KACHI

Kostir rannsóknarþjónustu Aptamer

Algæðaeftirlit

Bjartsýni aptamera með meiri stöðugleika

Hagkvæmt og skilvirkt. Samkeppnishæfara verð, betri þjónusta.

Ítarlegar rannsóknarvefsíður og fjölmargar rannsóknaraðferðir

Fagleg ráðgjöf fyrir sölu og þjónustu eftir sölu

Mikil reynsla af aptamer greiningu

Háttsett rannsóknar- og þróunarteymi

Sérsniðin þjónusta tengd aptamer

Til baka á síðu Aptamer þróunarvettvangs

Ef þú hefur einhverjar spurningar, vinsamlegast hafðu samband við okkur hvenær sem er.

Leave Your Message

Valin þjónusta

0102