Árið 1960 var hugmyndin um tvísértæk mótefni lögð til. Tvísértæk mótefni, einnig þekkt sem tvísértæk einstofna mótefni, eru tilbúnar mótefni með erfðatækni. Sem verkfræðilega tilbúna mótefni tilheyra tvísértæk mótefni venjulega IgG undirflokknum og innihalda mótefnavakabindandi brot sem miðar á CD3 undireininguna. Tvísértæk mótefni hafa tvö sértæk mótefnavakabindistaði sem geta samtímis bundist og þekkt tvö mismunandi mótefnavaka, eða tvö mismunandi mótefnavaka mótefnavaka. Í samanburði við einstofna mótefni hafa tvísértæk mótefni viðbótar sértækan mótefnavakabindistað, sem hefur því sterkari sértækni og markvissari getu, sem getur miðað æxlisfrumur nákvæmar og dregið úr eituráhrifum utan marksins. Tvísértæk mótefni geta samtímis framkvæmt margar líffræðilegar aðgerðir, svo sem að laða að ónæmisfrumur, loka fyrir boðleiðir og drepa æxlisfrumur beint. Fyrstu tvísértæk mótefni voru aðallega framleidd með efnasamtengingu eða frumusamruna, en þessi aðferð kann að hafa þróast hægt vegna handahófskenndrar samsetningar og erfiðleika við að einangra marksamsetninguna. Með sífelldri þróun erfðatækni hafa margar nýjar tæknilausnir verið þróaðar, svo sem hnútar í holum (KIH), CrossMab, DVD Ig, o.fl. Þessir vettvangar leysa á áhrifaríkan hátt vandamál eins og ósamræmi í þungum og léttum keðjum og bæta einsleitni og afköst tvísértækra mótefna.

Helstu aðferðirnar við framleiðslu tvísértækra mótefna eru efnatenging, fjögurra uppspretta blendingafrumur og erfðatæknileg mótefnaframleiðsla. Meðal þeirra er efnatengingaraðferðin sem tengir tvö óskemmd IgG eða tvö F(ab')2 mótefnabrot í tvísértæk mótefni með því að nota efnatengiefni eins og ftalímíð og díþíóasýlbensósýru. Þessi aðferð er einföld og auðveld í notkun, en hún getur skemmt bindistað mótefnavaka, dregið úr mótefnavirkni og tengiefnið sjálft hefur einnig ákveðið krabbameinsvaldandi áhrif. Fjögurra uppspretta blendingafrumuaðferðin byggist á samruna líkamsfrumna úr tveimur mismunandi blendingafrumulínum til að tjá samsvarandi músa-IgG. Með erfðatækni er hægt að breyta mótefnum erfðafræðilega til að mynda tvísértæk mótefni. Tvö mismunandi einstofna mótefni voru smíðuð og Fab-brotin eða breytileg svæði þungkeðju og léttkeðju mótefnanna tveggja voru klofin sérstaklega. Með þvertengingarviðbrögðum eða keðjuendurröðunartækni voru brotin tvö sameinuð til að mynda tvísértækt mótefni. Þó að flækjustig erfðatækni sé tiltölulega mikil, er það nú algengasta aðferðin til framleiðslu tvísértækra mótefna til að aðlaga uppbyggingu og virkni mótefna. Við hönnun tvísértækra mótefna má nota meginregluna um krossvirkni mótefna, en krossvirkni mótefna getur valdið ósértækum viðbrögðum, þannig að það verður vandlega tekið til greina við hagnýtingu tvísértækrar mótefnahönnunar, svo sem meðferð með tvísértækum mótefnum.

Hreinsun tvísértækra mótefna er ferlið við að einangra og hreinsa markmótefni með mikilli hreinleika. Tvær aðferðir, skilvindun og djúpsíun, eru notaðar til að fjarlægja leysanleg óhreinindi. Markmótefnið tvísértæka er upphaflega fangað með sækniskiljun. Fyrir tvísértæk mótefni eins og IgG er notuð sækniskiljun prótein A, en fyrir tvísértæk mótefni sem ekki eru IgG er hægt að nota sækniskiljun byggða á léttkeðju. Að lokum er mótefnið ræktað við lágt pH í ákveðinn tíma, sem veldur því að próteinbyggingin á yfirborði veiruhjúpsins raskast og missir þannig getu sína til að smita frumur. Millistig djúpsíun er framkvæmd til að fjarlægja frekar óhreinindi eins og hýsilfrumuprótein (HCP). Hreinleiki mótefna er bættur með aðferðum eins og jónskiptaskiljun og allar leifar af veirum eru fjarlægðar með nanósíun eða öfgasíun. Að lokum er sýnið þétt og skipt út fyrir viðeigandi buffer.