Þjónusta við smíði á bókasafni fyrir fagasýningar

Alpha Lifetech hefur unnið djúpt að þróun fagasýningartækni í mörg ár. Fyrirtækið hefur byggt upp fullkomna og stöðuga fagasýningartækni sem sparar tíma fyrir vísindarannsóknir eða verkefnarannsóknir og auðveldar síðari framleiðslu. Alpha Lifetech getur einnig veitt viðskiptavinum þjónustu eins og framleiðslu á vhh mótefnum, framleiðslu á scFv mótefnum og framleiðslu á Fab mótefnum.

Alpha Lifetech býr yfir alhliða M13/T7 fagasýningarvettvangi til að tryggja smíði og framleiðslu mótefnasafna. Við getum einnig boðið upp á sérsniðna þjónustu, svo sem framleiðslu á scFv mótefnum og háafköst mótefnaskimun, til að mæta þörfum þínum.

Kynning á fagasýningu

Fögasýningartækni er tækni sem notar faga (veiru sem sýkir bakteríur) til að leita að virkum bindandi sameindum tiltekinna próteina eða peptíða. Aðferðir við smíði faga-mótefnabókasafna fela í sér smíði Fab-mótefnabókasafna, smíði scFv-mótefnabókasafna, smíði nanólíkamabókasafna o.s.frv. Samkvæmt gerðum bakteríufaga má skipta þeim í M13, T7, T4, λ og önnur kerfi. Samkvæmt gerð bókasafnsins má skipta því í handahófskennd peptíðbókasafn, cDNA-bókasafn, mótefnabókasafn og próteinbókasafn. Fögasýningartækni er einföld í notkun og ódýr. Hins vegar takmarkar þessi tækni fjölbreytni sameindaerfðafræðinnar í bókasafninu sem getur ekki tjáð of langar raðir,

Nú á dögum er fagasýningartækni mikið notuð. Meðal þeirra eru mikilvægir árangursþættir í rannsóknum og þróun nýrra bóluefna (ódýr og skilvirk tilbúin bóluefni), þróun mótefnalyfja (skimun ensímhömlunar), frumuboðleiðni (skimun á hermdum mótefnavaka) og rannsóknum á mótefnavakamótefnavaka (undirbúningur einstofna mótefna).

Kynning á T7 bakteríufága

T7 bakteríufagi er tvíþátta DNA, lengd DNA-sins er 40kb og er vafið inn í hylki með þvermál 60nm. Tengiefnið milli höfuðs og hala er hringlaga uppbygging sem samanstendur af mörgum eintökum af gp8. Höfuð og kjarni t7 bakteríufagans mynda sívalningslaga uppbyggingu sem binst gp8 og getur tengt höfuð og hala.

Mynd 1. Skýringarmynd af T7 bakteríufaganum.(Tilvísun: Framfarir í T7 fagasýningarkerfinu (Yfirlit))

Kynning á M13 bakteríufága

Bakteríufaginn M13 tilheyrir flokki þráðlaga faga sem sameiginlega eru kallaðir Ff fagar. Hann er 900 nm langur og 6,5 nm breiður. Hann inniheldur erfðamengi úr einþátta DNA (ssDNA) sem er 6407 bp langt og samanstendur af níu genum sem kóða fyrir 11 mismunandi próteinum. Meðal þeirra eru fimm prótein hjúpprótein og sex próteinin taka þátt í afritun og samsetningu fagans. Hæsti styrkur hjúppróteina er kapsíðpróteinið G8P, sem er gert úr um 2.700 próteineiningum og myndar hjúp utan um litninginn.

Mynd 2. Skýringarmynd af bakteríufaganum M13.(Tilvísun: Grunnatriði tækni til að sýna mótefnisfaga)

Kynning á mótefnasafni fagasýningar

Uppgötvun mótefna hefur orðið sífellt mikilvægari í nútíma læknisfræði. Mismunandi aðferðir við uppgötvun mótefna eru til, en mótefnasafnið sem sýnir faga er notað meira í læknavísindum.

Frá árinu 1990 hafa mismunandi mótefnaform verið notuð til að smíða fagasöfn, þar á meðal VH, VHH, scFv, díalíkamsefni og Fab mótefni. SCFv, sem samanstendur af VH og VL byggingarlénum, eru einkeðju mótefni sem notuð eru til að smíða scFv mótefnasöfn. scFv einkennist af stuttum helmingunartíma og lágri ónæmissvörun. Fab mótefnasafnið samanstendur af VH, VL, CL og CH1, sem geta fljótt skimað út kjörmótefni með mikilli sækni. Minnsta einingin sem getur bundist markmótefnavakanum-VHH myndar nanólíkamasafnið í dag, VHH hefur kosti eins og einfaldri uppbyggingu, litlu rúmmáli, mikilli leysni, góðum stöðugleika og auðveldri undirbúningi og tjáningu. Tilbúin nanólíkamasöfn (Nb) eru að koma fram sem aðlaðandi valkostur við dýrabólusetningu fyrir stöðuga, tilbúna nanólíkama með mikilli sækni. Almennt eru þessir mótefnabrot tengdir við G3P M13 fagans og með því að klóna fjölda gena sem kóða fyrir mótefnabrot er hægt að búa til stór mótefnasöfn fyrir faga sem hægt er að velja úr.

Smíðaferli fagasafns

Ferlið við smíði fagasafns er sem hér segir: sérstakir praimerar eru hannaðir fyrir PCR mögnun sem fá afurðirnar, sem eru ensímbundnar við T7/M13 faga vektorinn, og endurröðuðu faga plasmíðinu er smíðað með góðum árangri. Endurröðuðu faga plasmíðinu var umbreytt í TG1 viðtakafrumur, síðan húðað á miðli sem innihélt viðeigandi sýklalyf, og stækkuð ræktun var framkvæmd eftir skimun umbreytenda. Eftir margar ræktunarumferðir endurtekur faginn afritunartíma í bakteríunni og tjáir markpróteinið eða fjölpeptíðið með góðum árangri. Síðan er fagasafnið hreinsað til að fjarlægja óhreinindi og óbundna faga.

Breytileg svæði (VH og VL) tengdust fjölbreytileika mótefna og VH og VL voru sett inn í faga-vigurinn ásamt röð sem kóðar fyrir fagapróteinið PIII. Eftir samsetningu er faga-agninn afhjúpaður og samrunninn N-enda minniháttar hjúppróteins III til að mynda virkt mótefnisbrot, sem gefur bókasafn sem inniheldur DNA-röð mótefnisins.

Eftir að ónæmisaðgerð lauk var títerinn greindur og blóð úr dýrinu tekið eftir að títerinn hafði verið staðfestur. Eitilfrumur eru einangraðar úr blóðinu, RNA er dregið út, RT-PCR magnar markbrotið og V-svæðisgenbrotið er fengið. V-genið er magnað með sérstökum praimer.

Náttúrulegu bókasöfnin sem mynduð eru innihalda léleg ónæmisvakandi mótefni í dýrum sem geta miðað á hvaða skotmark sem er. Hægt er að safna fögamótefnum sem bindast sértækt við mótefnavakann með skimunaraðferðum sem festa eða merkja mótefnavakann.

Markmótefnavakinn er festur við fast burðarefni, svo sem gat á örplötu, eða tengdur við segulperlu. Mótefnasafnið úr fögum er síðan bætt við til að binda það við mótefnavakann. Eftir endurteknar útskolanir eru fögar með lága sækni eða ósértækar þvegnir burt og þeir sem sýna sértæk mótefni eru eftir.

Notkun fagasýningar

*Uppgötvun mótefna hefur orðið sífellt mikilvægari í nútíma læknisfræði. Mismunandi aðferðir við uppgötvun mótefna eru til, en fagasýningartækni er meira notuð í læknavísindum. Frá árinu 1990 hafa mismunandi mótefnaform verið notuð til að smíða fagasöfn, þar á meðal VH, VHH, scFv, díalíkön og Fab mótefni.
*Peptíðasöfn faga gera kleift að ákvarða röð próteinþátta hratt og hafa orðið öflugt tæki til að rannsaka samspil þátta og mótefnavakaviðtaka.
*Mótefnabrot eru sameinuð G3P í M13 faganum og með því að klóna fjölda gena sem kóða fyrir mótefnabrot er hægt að búa til stór mótefnasöfn fyrir faga sem hægt er að velja úr.
*T7 fagasýningarkerfið hefur marga kosti, þar á meðal einfaldleika, mikið öryggi, stöðugleika, auðvelda geymslu og flutning, þannig að kerfið er notað í fyrirbyggjandi og meðferðarbóluefnum.
*T7 fagasýningarkerfið getur greint ýmis mótefnavaka, svo sem yfirborðsmótefnavaka sjúkdómsvaldandi örvera og krabbameinsmótefnavaka.

Fag

HVERS VEGNA AÐ VELJA OKKUR

Alpha Lifetech getur einnig veitt viðskiptavinum þjónustu eins og framleiðslu á VHH mótefnum, framleiðslu á scFv mótefnum og framleiðslu á Fab mótefnum.